849例妇产科患者HPV基因分型检验及结果分析

钟佳伶 何钰 黄文芳 杜琼

【摘 要】目的：探讨妇产科患者中人乳头瘤病毒（ HPV）的感染率及各亚型的分布情况。方法：采用HPV基因分型技术对我院2012年 间849例患者进行HPV分型检测并进行统计分析。结果：849例患者中，共检出HPV阳性者267例，总阳性率为31.45%。HPV-21分型中，6型占首位（15.70%），其次是52型（11.39%）和58型（11.39%）。高危型别（HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68）、低危型别（HPV6、11、42、43、44）及中国人常见类型（53、66、CP8403）分别占55.94%，28.10%，15.94%。结论：在患者所感染的HPV亚型中，以6型最多，其次是52型和58型;高危亚型的感染率明显高于低危亚型。

【关键词】human papillomavirus（HPV）;基因型;感染

Abstract OBJECTIVE： To investigate the infection rate and distribution of HPV subtypes in patients of obstetrics and Gynecology.METHODS： The HPV genotyping technique was used to detect and analyze the HPV genotypes of 849 patients in our hospital in 2012. RESULTS： Of 849 patients， 267 were HPV positive， the total positive rate was 31.4%. Among HPV-21 types， type 6 was the most （15.70%）， followed by type 52 （11.39%） and type 58 （11.39%）. High-risk types （HPV16， 18， 31， 33， 35， 39， 45， 51， 52， 56， 58， 59， 68）， low-risk types （HPV6， 11， 42， 43， 44） and Chinese common types （53， 66， CP8403） accounted for 55.94%， 28.10% and 15.94%， respectively. CONCLUSION： Among the HPV subtypes infected by patients， type 6 is the most common， types 52 and 58 followed. and the infection rate of high-risk subtypes is significantly higher than that of low-risk subtypes.

Key works human papillomavirus（HPV）;genotype;infection

【中图分类号】 R248.3

【文献标识码】 A【文章编号】 1672-3783（2019）04-03-073-01

【前言】据世界肿瘤流行病调查分析，宫颈癌发病率位于女性肿瘤的第三位，致死率位于第四位，成为严重威胁女性健康和生命的杀手[1]。大量研究表明，人乳头瘤病毒（HPV）感染时导致宫颈癌发生的主要危险因素，99%以上的宫颈癌有HPV感染[2-4]。HPV病毒含有多种亚型，在发现的HPV亚型中，约有 100 种可以感染生殖道 [5]。根据其致病性的不同，可分为低危型HPV （如6，11，42，43型），高危型 HPV （16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58 ，59 ， 68 型）及中国地区常见类型（53，66，CP8304型）。低危亚型主要与性病湿疣相关，高危亚型与宫颈癌的发生相关[6]。为了解本地区女性HPV感染情况，作者对本院849例就诊妇产科患者作导流杂交HPV-21型基因分型技术进行检测并进行统计分析。

1 对象与方法

1.对象  本院2012年1月到12月间，妇产科泌尿生殖道炎症女性患者共849，年龄16-77岁，平均年龄33.8岁。

2.仪器及试剂 细胞裂解液（凯普公司）;凯普21种人乳头状瘤病毒（HPV）分型检测试剂盒（凯普公司）;DA-7600 核酸扩增仪（达安公司）;HybriMaXM 医用核酸分子快速杂交仪（凯普公司）。

3. 实验方法

3.1 标本采集：利用采集器，采集子宫脱落细胞样本将采样刷置于标本保存液中 4 ℃冰箱保存备用。

3.2 DNA的提取及扩增： 取保存有宫颈细胞的细胞保存液0.5ml，14，000rpm离心1分钟后，弃去上清，然后严格按照细胞裂解液试剂盒操作步骤提取DNA.取1ulDNA样本按95℃-9分钟一个循环，95℃-20秒-55℃-30秒-72℃-30秒40个循环，72℃-5分钟，4℃-hold进行扩增。

3.3 杂交检测：严格按照凯普21种人乳头状瘤病毒（HPV）分型检测试剂盒的说明书操作步骤进行杂交。简述为：PCR 产物25ul在95℃加热5分钟后立即冰浴2分鐘，与0.5ml的预热至 45 ℃的杂交缓冲液混合，在导流杂交仪 HybrMax 上45 ℃与膜孵育 15 min 然后进行导流杂交。杂交后再用 0.8 ml 杂交缓冲液清洗 3 次后，在 25 ℃条件下，用封阻液封阻孵育 5 min 封阻后，加入 0.5 ml 酶标液孵育 3.5 分钟， 用冲洗缓冲液 A清洗杂交膜，去除未结合的酶标液。显色过程加入 0.5 NBT/BCIP 底物在 36 ℃保持 3-5 min.在显色后 1 h 内查看分析结果。

2 结果

1.HPV感染总体阳性率：849例患者中，共检出HPV阳性者267例，总阳性率为31.45%。

2.HPV感染各亚型分布：经统计分析，在HPV感染当中，以第6型所占比例最大（15.70%），其次是52型（11.39%）和58型（11.39%）。其余各亚型所占比例见表1及图1.

3.HPV高危亚型分布：经统计分析，在HPV高危亚型感染中，以52亚型（20.36%）、58亚型（20.36%）及16亚型（18.10%）为主。其余高危亚型所占比例见图2.

4.HPV低危亚型分布：经统计分析，在HPV低危亚型感染中，以6亚型（42.75%）及11亚型（32.41%）为主。其余低危亚型所占比例见图3.

5. 中国人常见HPV亚型分布：经统计分析，在中国人常见HPV亚型感染中，53型，66型及CP8304型分别占28.57%，17.46%及53.97%（图4）。

3 讨论

人乳头瘤病毒（HPV）是一种小的双链DNA病毒，可以特异性地感染人皮肤黏膜的鳞状上皮细胞，引起多种良、恶性病变。低危亚型主要与性病湿疣相关，高危亚型与宫颈癌的发生相关[6]。所以在筛查宫颈癌的同时筛查HPV感染 具有重要的意义。

本研究就本院849例妇产科患者进行HPV-21型分型检测，HPV总阳性率为31.45%，略高于其他研究的阳性率[7-9]。HPV 型别分布存在地区差异 。据IARC 报道，全球 25 个国家的 3607 例宫颈癌患者的多中心研究中 16 型在所有 HPV阳性的宫颈癌患者中的平均感染率为 57.4%， 18 型次之。 而在亚洲国家 52 和 58 型感染更常见。在上海有 42.5%的宫颈癌标本存在 52、58 型感染[7]。在我们的研究中，所有亚型中，6型占首位（15.70%），其次是52型（11.39%）和58型（11.39%）。与亚洲的研究结果基本相符。高危亚型（HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68）、低危亚型（HPV6、11、42、43、44，CP8304）及中国人常见类型（53、66、CP8403）分别占55.94%，28.10%，15.94%。可以看出，在感染HPV人群中，以高危亚型为主，可见高危感染问题的严重性。

在本研究中，仅对所出现的HPV亚型进行整体统计，发现本地区人群HPV感染亚型以6型最多，其次是52型和58型;且高危亚型的感染率明显高于低危亚型。在本研究并未对单一亚型感染和多重亚型感染，以及患病人群的感染程度及年龄的相关性进行分别统计，这些有待于进一步的数据整理和分析。

参考文献

[1] Jemal A， Bray F， Center MM， Ferlay J， Ward E， Forman D. Global cancer statistics. CA Cancer J Clin. 2011， 61： 69-90.

[2]Koss LG. The papnicolaou test for cervical detection： a triumph and a tragedy. J Am Yied Assoc， 2009，26（1）：737-743.

[3]陈丽艳，李春波，黄淑杰. 液基细胞学检查结合阴道镜诊断宫颈上皮内瘤变分析. 局解手术学杂志， 2007， 16（2）：140-141.

[4]吴有利，陆学东，刘键，等.膜杂交多重检测技术在HPV基因分型中的应用.中华微生物学和免疫学杂志，2005，25：1048.

[5]Clavel C，Masure M，Bory JP，et al.Human papillomavirus testing in primary screening for the detection of high-risk lesions：a study of 7932 woman .Br J Cancer，2001，89：1616～1623.

[6]Munoz N，Spsch FX. Epidemiologic classification of human papillomavims types associated with cervical cancer .N Engl J Med，2003，348（6）：518～527.

[7]趙夏丰，杨小华，刘庆峰. 547 例妇科门诊就诊者HPV基因分型结果的回顾分析.临床医学工程. 2010，17（4）：145-146.

[8]潘莉，潘伟. 妇科门诊患者HPV 分型检测及结果分析. 医学信息. 2010，23（9）：3372.

[9]徐维， 曾孟兰， 杨黎明. 1285 例女性 HPV 感染状况调查[J]. 实用预防医学， 2009， 16（1）： 36-37.