术瑞吉对预防术后腹腔粘连的效果观察

王久成,于世明,乔茂强,范宏刚

(东北农业大学动物医学学院,黑龙江 哈尔滨 150030)

随着人们生活需求的改变,越来越多的伴侣动物走进了人们的生活,伴侣动物的诊疗行业也得到了快速的发展,但是在伴侣动物手术过程中快速有效止血和防止术后粘连一直都是急需解决的问题,特别是没有明显出血点的大面积组织广泛的渗血和腹腔术后导致的腹腔粘连。市面上常见的止血材料和防粘连材料包括沸石、壳聚糖、胶原蛋白和纤维素基等,都是应用于人。大多数只有单一的止血功能或者防粘连功能,而且价格昂贵,有些材料在止血的同时还导致粘连的发生。到目前为止,应用于伴侣动物的止血材料的相关报道少之又少,此方面仍处于空白阶段。术瑞吉生物流体膜是由羧甲基纤维素钠和海藻酸钠组成的天然复合材料,解决了使用单一材料时的不足。适用于组织的广泛渗血,同时起到预防粘连的作用。本研究建立肠粘连模型[1]。将术瑞吉生物流体膜应用于该模型,并与其他材料作对比,验证其止血、预防粘连的效果。为其在伴侣动物的临床应用中提供试验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康实验犬30只,雌雄各半,年龄12～14月龄,体重5.5±0.5 kg,由哈尔滨市青喜养殖场提供,检疫合格符合实验动物要求,均无凝血异常,在相同环境下饲养2周无异常情况进行试验。

1.2 设备、药品和试剂 Datex呼吸监护仪S/5、TGL-16B普通离心机、DK-S22恒温水浴锅、Matrx小动物专用吸入麻醉机等。

异氟烷(深圳市瑞沃德生命科技有限公司,批号20170201)；丙泊酚注射液(四川国瑞药业有限责任公司,批号20170524)；术瑞吉生物流体膜(哈尔滨础润医疗器械有限责任公司)；Seprafilm(美国强生(Johnson&Johnson)公司,批号20170415)；强脯氨酸试剂盒(南京建成生物工程研究所；批号20171008)等。

1.3 方法

1.3.1 术瑞吉预防犬腹腔粘连试验 将12只实验犬随机分成3组,每组4只。A组为空白组,B组为Seprafilm组,C组为术瑞吉组。

参照Ellis法制备肠粘连模型[2],于犬腹中线脐部开始做一3 cm切口打开腹腔,创口周围干纱布隔离,牵拉出盲肠置于纱布上5 min,使盲肠浆膜干燥,用干纱布摩擦盲肠浆膜层,使浆膜层破损,形成点状出血面,创面约1 cm宽、2 cm长。A组纱布按压,直至没有渗血为止。B组将Seprafilm放置于盲肠创面。C组涂抹术瑞吉生物流体膜,直至没有渗血为止。术后关闭腹腔。

1.3.2 粘连程度评定分级 于术后7 d,将各组犬麻醉后进行剖腹探查,记录腹腔粘连情况,参照胡建敏分级方法,进行粘连评分[3],如表1。并取粘连部位组织,用于病理组织学检测和羟脯氨酸测定。

表1 腹腔粘连分级标准

1.3.3 组织病理学观察 取肠管创面组织,进行病理切片制作和观察。

1.3.4 组织羟脯氨酸测定 取肠管创面组织,进行羟脯氨酸测定。

1.4 统计学处理 应用SPSS18.0软件进行统计学分析,数据以均数±标准差(¯x±SD)表示,采用单因素方差分析以及 Post Hoc Tests多重比较检验LSD和S-N-K法,P＜0.05为差异显著。

2 结果

2.1 术后第7天粘连程度分级 由表2和中插彩版图1可知,各组均有粘连发生,但无梗阻、肠扩张。A组粘连严重,均与肠管、肠系膜粘连,其中1例与胰腺粘连。C组和B组肠管浆膜创伤恢复良好,痕迹不明显,只有部分犬肠管与大网膜少量粘连,未与其他脏器粘连。C组和B组粘连评分均低于A组,具有显著性差异(P＜0.05)。

图1 各组粘连情况

表2 术后各组腹腔粘连分级结果 (n=4)

2.2 粘连组织病理组织学观察 各组肠壁粘连组织切片如中插彩版图2,A组盲肠浆膜层与粘连组织连接紧密,有大量的胶原纤维,粘连组织中新生毛细血管明显增多。C组和B组盲肠浆膜层增厚,胶原纤维较少,有少量的新生毛细血管。

图2 肠壁粘连组织H.E.染色 (×200)

2.3 肠粘连创面组织Hyp水平 由表3可知,手术后第7天取创面粘连组织(未粘连者取创面组织)测定Hyp含量,结果发现B组和C组的肠壁Hyp含量明显低于A组肠壁Hyp含量,有显著性差异(P＜0.05)。

表3 肠粘连组织Hyp结果 (n=4)

3 讨论

目前国内外研究的纤维蛋白胶、多孔沸石、医用胶等都不适用于这种没有明显出血点的弥漫性渗血,而且有些医用敷料使用后还会导致粘连的发生[4]。空腔脏器损伤或者手术时同样会出现没有明显出血点的弥漫性渗血,且其术后创面炎症反应、纤维蛋白的渗出,常常导致腹腔粘连。Pados G等人在相关研究中报道,90%的开腹手术会导致腹腔粘连,外科手术后,93% ～97%的患者发生腹腔粘连,腹腔粘连形成后可能不会表现出临床症状,但是仍有很大一部分会继发肠梗阻、慢性腹腔疼痛等。

本试验采用的术瑞吉生物流体膜是一种天然复合植物材料。由羧甲基纤维素钠和海藻酸钠组成的等渗液体；羧甲基纤维素钠和海藻酸钠均可粘附在创面,避免创面与其他组织接触发生粘连；同时其降解产物可以抑制炎性反应,保护肉芽组织,促进伤口愈合[5-6]。羧甲基纤维素具有良好的水溶性,溶于水后形成的溶胶具有一定黏度(与海藻酸钠混合使用时,弥补了海藻酸钠粘附力不足的情况),可加速血液凝固[7]。吴立各等人在实验研究中发现,羧甲基纤维素可以明显减轻腹腔术后的粘连程度,8 d后可被降解吸收[8]。同时纤维素类对血小板和血红蛋白等有良好的吸附作用,有利于形成血栓,促进止血[9]。另外,纤维素基类的止血材料溶解后可以释放出负离子,激活凝血系统从而加快止血[10]。同时,流体膜可以维持伤口周围的湿润环境,促进创面愈合,抑制炎症反应,减少后期瘢痕的形成,并与周围组织隔离,减少粘连的发生。

术后粘连的形成是腹腔手术中最常见的并发症之一,粘连可以看成体内瘢痕的形成,组织在受损后需要进行修复和重塑。当手术或感染引起腹膜或腹腔浆膜损伤时,创面会发生炎症反应,分泌多种生物活性物质。创面的机械损伤、腹膜炎症、血凝块的形成等,都会引起炎性反应和纤维浆液渗出,同时激活凝血系统,导致纤维蛋白沉积并凝固,而术后纤溶系统失衡,不能及时溶解纤维蛋白,就形成永久性粘连。

本试验参考Ellis法制作犬肠粘连模型,该方法具有操作简单、造模成功率高、对组织损伤小等优点。本试验粘连分级结果表明,A组均与肠管或胰腺发生粘连,B组和C组部分与大网膜或肠系膜粘连,粘连较轻。证明术瑞吉生物流体膜具有一定的防粘连作用。通过对病理切片分析结果表明：A组纤维组织增生明显,新生毛细血管丰富,有明显的粘连带。B组和C组盲肠浆膜层增厚,新生血管较少,未出现粘连带,创面有纤维增生。说明术瑞吉生物流体膜没有影响创面自身的愈合过程,有一定的防粘连作用。通过对创面组织Hyp含量分析结果表明：C组Hyp含量明显低于A组但高于B组,与粘连评分结果和组织切片结果相符。试验结果与lvarsson M L.等人的研究结果相吻合[11]。再次证明术瑞吉具有预防粘连的作用。因此,该试验证明了术瑞吉生物流体膜在犬肠粘连模型术后具有一定的防粘连作用。