糜烂型口腔扁平苔藓患者EBi3、IL—12p35的表达及临床意义

孙丽美

[摘要] 目的 探讨糜烂型口腔扁平苔藓患者EB病毒诱导基因3（EBi3 ）及IL-12p35的表达及临床意义。方法 方便选取2016年1月—2018年2月该院收治的口腔扁平苔藓患者56例作为研究组，选取同期健康体检者60名作为对照组，采取免疫组织化学法检测其EBi3 及IL-12p35 阳性的表达情况，分析EBi3 及IL-12p35与糜烂型口腔扁平苔藓患者临床病理特征的关系。结果 研究組EBi3 、IL-12p35 阳性表达率分别为60.71%、41.07%，均高于对照组，组间比较差异有统计学意义（P<0.05）；EBi3 及IL-12p35 蛋白表达与口腔扁平苔藓患者临床分型有关（χ2=32.323，13.333，P<0.05），与年龄、性别、病程无关（P>0.05）。结论 口腔扁平苔藓病损组织中EBi3、IL-12p35表达上调，其与口腔扁平苔藓患者临床分型有关，提示EBi3、IL-12p35可能在口腔扁平苔藓病损形成中发挥着重要作用。

[关键词] 糜烂型；口腔扁平苔藓；EBi3；IL-12p35

[中图分类号] R4 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2019）03（a）-0001-04

[Abstract] Objective To investigate the expression and clinical significance of Epstein-Barr virus-induced gene 3 （EBi3） and IL-12p35 in patients with erosive oral lichen planus. Methods A total of 56 patients with oral lichen planus admitted to our hospital from January 2016 to February 2018 were convenient selected enrolled as the study group. 60 healthy subjects were selected as the control group. Immunohistochemistry was used to detect EBi3 and IL-12p35 positive. The relationship between EBi3 and IL-12p35 and clinicopathological features of erosive oral lichen planus was analyzed. Results The positive expression rates of EBi3 and IL-12p35 in the study group were 60.71% and 41.07%， respectively， which were higher than the control group. There was significant difference between the two groups （P<0.05）. The expression of EBi3 and IL-12p35 protein and oral lichen planus patients clinical classification was related（χ2=32.323， 13.333， P<0.05）， and was not related to age， gender and duration （P>0.05）. Conclusion The expression of EBi3 and IL-12p35 is up-regulated in the lesions of oral lichen planus， which is related to the clinical classification of oral lichen planus， suggesting that EBi3 and IL-12p35 may play an important role in the formation of oral lichen planus lesions.

[Key words] Erosive type； Oral lichen planus； EBi3； IL-12p35

口腔扁平苔藓是一种影响皮肤及黏膜表面的慢性炎症性自身免疫性疾病，主要发病部位在口腔颌面部，按疾病类型可分为糜烂型和非糜烂型，其中以糜烂型最为常见[1]。该病病因尚未明确，主要病理特征为上皮增生，伴有上皮过渡不全角化，固有层淋巴细胞呈带状浸润。白细胞介素-35（Interleukin-35，IL-35）是IL-12细胞因子家族中新的一员，主要由EB病毒诱导基因3（Epstein-Barr virus-induced gene 3，EBi3 ）及IL-12p35两个亚基组成，通过特异性作用方式，可发挥免疫调节的作用[2]。近年，有研究证实[3]，IL-35在多种感染性疾病、自身免疫性疾病的病理机制中扮演重要角色，并与病情严重程度及预后存在密切联系。为探讨IL-35中两个亚基EBi3、IL-12p35在糜烂型口腔扁平苔藓患者中的表达情况及临床意义，该文方便选取2016年1月—2018年2月该院口腔科收治的糜烂型口腔扁平苔藓患者56例进行分析，并选取60名健康体检者作对照，现分析如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

方便选取上述时期该院口腔科收治的56例糜烂型口腔扁平苔藓患者作为研究组，纳入标准：符合《实用口腔科学》[4]中关于糜烂型口腔扁平苔藓诊断标准；口腔损害发生2 d内就诊；所有患者经血常规、心电图、肝肾功能检查均正常。排除标准：合并心、肝、肺、肾等重要器官病变者；脑血管疾病者；精神疾病者；资料不全者。其中男22例，女34例，年龄30～75岁，平均（48.21±3.34）岁；病程6个月～8年，平均（2.15±0.46）年；其中糜烂型36例，非糜烂型20例。选取同期健康体检者60名作为对照组，男28名，岁32名，年龄30～74岁，平均（48.19±3.31）岁。两组性别、年龄比较差异无统计学意义（P>0.05）。该次所选受试者均对该次研究知情，均签署知情同意书，且经医院伦理学委员会批准。

1.2 方法

采取免疫组织化学法检测其EBi3 及IL-12p35 阳性表达情况，选取胎盘组织作为阳性对照，选取PPS缓冲液作为阴性对照，具体操作步骤：①烤片：将所得石蜡组织切片放入电热恒温培养干燥箱（60℃）中进行烤片，持续90 min；②脱蜡：使用二甲苯脱蜡15～20 min，共3次；③用95%酒精水化5 min；蒸馏水冲洗3 min，共3次；用PBS缓冲液洗涤3 min，3～4次；④抗原修复，将组织切片置于耐高温塑料切片架上进行高温高压修复，随后将其置入含有EDTA抗原修复液（北京鼎国生物技术有限责任公司）的器皿中，经高温加热处理后，取出器皿，冷却至室温；⑤用PBS缓冲液洗涤5 min，3～4次；⑥滴加浓度3%H2O2去离子水，室温下孵育持续10 min，随后用PBS缓冲液洗涤5 min，3～4次；⑦滴加一抗，选取鼠抗人Ebi3单克隆抗体（英国NOVUWS生物科研有限公司）、兔抗人IL-12p35多克隆抗体（上海酶研生物科技有限公司），4℃冰箱孵育过夜，次日取出，将其置于温箱（37℃）中，孵育持续30 min，用PBS缓冲液洗涤5 min，3～4次；⑧滴加二抗，Ebi3滴加PV6002山羊抗鼠IgG/HRP聚合物（北京中杉生物技术有限公司），IL-12p35滴加PV6001山羊抗兔IgG/HRP聚合物（北京中杉生物技术有限公司），在37℃条件下孵育30 min，用PBS缓冲液洗涤5 min，3～4次；⑨DAB显色，将配制的DBA显色剂滴加至组织切片上，在YS100光学显微镜（Nikon公司）下观察，直至阳性切片上细胞出现明显棕色或棕黄色颗粒时终止反应；⑩苏木素复染，切片上滴加苏木素试剂，复染2 min，用自来水冲洗5 min，最后用酒精脱水干燥，中性树胶封片。

1.3 观察指标

免疫组化结果判定：每张切片随机选取5个视野（400×），计算每个视野中阳性细胞所占百分比，Ebi3、IL-12p35染色以细胞出现明显棕色或棕黄色颗粒为阳性细胞，0分：棕黄色颗粒细胞<5%；1分：5%≤棕黄色颗粒细胞<25%；2分：25%≤棕黄色颗粒细胞<50%；3分：50%≤棕黄色颗粒细胞<75%；4分：棕黄色颗粒细胞≥75%，0～1分为阴性（-），2～4分为阳性（+）[5]。详细记录糜烂型口腔扁平苔藓患者EBi3 及IL-12p35 阳性的表达情况，并分析EBi3 及IL-12p35蛋白表达与糜烂型口腔扁平苔藓患者临床病理特征的关系。

1.4 统计方法

将该研究纳入统计的数据均在SPSS 19.0统计学软件中完成处理，计量数据以（x±s）表示，采取t检验进行组间比较，多组间比较采取F检验，将该研究纳入统计的计数数据，以[n（%）]表示，采取χ2检验进行组间比较，检验水准设置为α=0.05。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 EBi3 及IL-12p35 阳性表达

研究组EBi3 、IL-12p35 阳性表达率均显著高于对照组，组间比较差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2 EBi3 及IL-12p35蛋白表达与口腔扁平苔藓患者临床病理特征的关系

EBi3 及IL-12p35 蛋白表达与口腔扁平苔藓患者临床分型有关（P<0.05），与年龄、性别、病程无关（P>0.05），见表2。

3 讨论

口腔扁平苔藓是临床常见一种口腔黏膜病变疾病，对口腔损害较严重，若不及时治疗，随着病情进展，易发生癌变，癌变率为0.5%～3.5%[6]。有研究表明[7]，口腔扁平苔藓具有成人易患、病程迁延不愈、自身免疫功能明显下降、病损部位存在自身毒性T细胞克隆等特性，其主要病理特征为上皮增生。口腔扁平苔藓的发生、发展与機体免疫状态存在密切联系，其中以T淋巴细胞免疫是近年来临床关注的重点。当机体免疫功能低下时，调节性T（Treg）细胞会诱导机体炎性细胞通过免疫逃逸机制的作用，以此来逃避效应细胞的杀伤作用，最终促进病情进展。其中IL-35可由Treg细胞特异性产生，是一种抑制性细胞因子，其主要通过以下途径来发挥免疫抑制的作用：①能促进Tregs增殖；②对Teffs增殖及分泌的细胞因子有明显的抑制作用；③抑制T淋巴细胞向Teffs分化[8-9]。近年，有研究报道[10]，肿瘤细胞分泌的IL-35，可促进肿瘤发生、发展，其主要受EBi3 及IL-12p35两个亚基的影响。

刘艳等[11]研究发现，鼻咽癌组织中IL-35水平明显高于鼻炎黏膜慢性炎症组织及健康对照组（P<0.05），提示随着病情严重程度加重，患者组织中IL-35水平逐渐升高。目前，国内外关于IL-35中两个亚基EBi3 、IL-12p35在口腔扁平苔藓病损中的表达少见报道。该研究采取免疫组织化学法检测口腔扁平苔藓患者组织中EBi3 及IL-12p35 阳性表达情况，结果发现研究组EBi3 、IL-12p35阳性率分别为60.71%、41.07%，均高于对照组（P<0.05）。王荣等[12]学者报道，EBi3 、IL-12p35在正常口腔黏膜上皮均无表达，在口腔鳞癌组织中的阳性表达率分别为58.82%、67.65%，都高于对照组，此研究结果与上述结果差别不大，都提示了EBi3 、IL-12p35在正常口腔黏膜上皮组织中无表达，但病损组织中就会出现EBi3 、IL-12p35阳性表达。按临床分型，口腔扁平苔藓可分为糜烂型和非糜烂型两种，以糜烂型最为常见。本研究分析EBi3 、IL-12p35与口腔扁平苔藓患者病理特征的关系，结果发现EBi3 、IL-12p35与口腔扁平苔藓患者临床分型有关，与年龄、性别、病程无关。EBi3 、IL-12p35可能是口腔黏膜癌变的早期事件，随着组织恶性程度的增加，其蛋白表达水平均会升高。糜烂型口腔扁平苔藓的发生，多表现为上皮萎缩变薄，脱落后形成不规则形态的表浅糜烂，常伴有自发性疼痛，给患者带来的痛苦较大，其癌变率可能大于网状型，临床需对其引起足够重视[13-15]。早诊断、早治疗，降低癌变率，对提高患者生活质量有重要意义。

综上所述，口腔扁平苔藓是临床常见一种慢性炎症性自身免疫性疾病，大部分会出现口腔损害，严重影响患者生活质量。根据其病理特征，机体免疫功能明显下降，T淋巴细胞免疫受到抑制，而IL-35主要由Treg细胞特异性产生，其两个亚基EBi3 、IL-12p35表达水平也会受到影响。因此，分析口腔扁平苔藓病损中EBi3 、IL-12p35表达情况，可见上述指标表达上调，且与口腔扁平苔藓患者临床分型有关，尤其是糜烂型口腔扁平苔藓，提示EBi3 、IL-12p35可能在口腔扁平苔藓病损中发挥着重要作用。

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（收稿日期：2018-12-01）