XpertMTB/RIF技术对结核分枝杆菌的诊断价值

陈波 马晓波 洪国粦

摘要：目的  对Xpert MTB/RIF技术检测结核分枝杆菌（MTB）的结果进行分析并评估其价值。方法  采集2017年10月～2018年10月本院就诊疑为结核分枝杆菌感染的患者共580例，利用Xpert MTB/RIF技术对其痰液（或体液）标本进行DNA检测，同时将标本进行固体培养及涂片抗酸染色并对检测结果进行比较。结果  Xpert MTB/RIF技术检测MTB的阳性率为18.97%（110/580），和固体培养法的阳性率18.62%（108/580）相比差异无统计学意义（P>0.05）;和抗酸染色法的阳性率15.00%（87/580）相比则更为敏感，差异有统计学意义（P<0.05）。 结论  Xpert MTB/RIF检测技术和固体培养法不相上下，且由于抗酸染色法，可以用于MTB的快速筛选。

关键词：Xpert MTB/RIF技术;结核分枝杆菌;筛选;酸染色法;固体培养法

中图分类号：R542.2+2                                文献标识码：A                               DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.06.056

文章编号：1006-1959（2019）06-0172-02

Abstract：Objective  To analyze and evaluate the results of Xpert MTB/RIF detection of Mycobacterium tuberculosis （MTB）.Methods  A total of 580 patients with suspected Mycobacterium tuberculosis infection were enrolled in our hospital from October 2017 to October 2018. The sputum （or body fluid） specimens were tested for DNA by Xpert MTB/RIF technique. Solid culture and smear acid-fast staining and comparison of test results.Results  The positive rate of MTB detected by Xpert MTB/RIF technique was 18.97%（110/580）， and the positive rate of solid culture method was 18.62% （108/580），the difference was not statistically significant （P>0.05）; The positive rate of staining was 15.00%（87/580）， which was more sensitive，the difference was statistically significant（P<0.05）. Conclusion  Xpert MTB/RIF detection technology is comparable to solid culture method， and can be used for rapid screening of MTB due to acid-fast staining.

Key words：Xpert MTB/RIF technology;Mycobacterium tuberculosis;Screening;Acid staining;Solid culture

结核病（tuberculosis）是全球十大死因之一，2017年全球因结核病死亡例数为总共为160万例，是高于艾滋病在内的单一传染病中的头号杀手。根据世界卫生组织2018年的报告，2017年全球的结核病潜伏感染人群约为17亿，潜伏感染率为23%。全球新发结核病患者约1000万，结核病发病率为133/10万，而中国的新发患者数为88.9万（约占全球的8.9%），估算结核病发病率为63/10万[1-3]。早期诊断和及时治疗对防控结核有重要意义。实验室检查是确诊结核病的必要依据，而目前实验室的常规的痰涂片抗酸检查法作为筛查方法操作繁琐，耗时费力，且敏感度和特异性也难以满足临床的实际需要[4-6]。因此，临床急需一种简易快速，敏感度高，特异性强的新型检测手段来填补这一需求。随着分子诊断技术的发展，一种新型的全自动基因检测系统Xpert MTB/RIF系统于2010年开始被WHO推荐用于MTB及多重耐药结核菌的快速诊断。本研究将同时采用Xpert MTB/RIF系统、涂片抗酸染色法以及罗氏固体培养法对疑似结核患者的标本进行检测，以评估Xpert MTB/RIF系统对MTB的诊断价值。

1资料与方法

1.1一般资料  选择2017年10月～2018年10月在厦门大学附属第一医院住院及门诊就诊怀疑为结核菌感染的疑似患者共580例，其中男性332例，女性248例，留取其痰标本、肺泡灌洗液标本或者尿液标本。

1.2方法   所有疑似患者的痰标本、肺泡灌洗液标本及尿液标本都同时采用萋-尼氏抗酸染色法（试剂购于珠海贝索生物技术有限公司），固体培养法（试剂购于珠海贝索生物技术有限公司）和Xpert MTB/RIF系统（美国Cepheid公司）进行结核分枝杆菌的检测。①萋-尼氏抗酸染色法：参考《痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册》对标本进行涂片制备、染色及镜检，检出1条及以上分枝杆菌即为涂片阳性[1]。②固体培养法：参考《分枝杆菌分离培养标准化操作程序及质量保证手册》将中和离心后的标本混悬液接种于固体培养基并放在孵箱中培养[2]。在第3、7天观察培养基中菌落的生长状况，之后每周觀察1次，至少连续30 d以上未有分枝杆菌生长方可报阴性。③Xpert检测法：标本和前处理液按1：2的比例混匀后静置15 min以上，待标本中没有明显细颗粒存在即可用专用吸管吸取2 ml处理后的样品液加入到反应盒中。将反应盒放入Xpert检测系统中完成样品DNA的自动提取、扩增及检测，以检出目标序列为阳性。

1.3统计学分析  采用SPSS 16.0软件进行统计分析，计数资料采用百分比（%）来表示，组间比较采用配对四格表？字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1 Xpert MTB/RIF技术与固体培养法阳性结果比较  疑似患者共580例，固体培养法检出阳性标本108例，阳性率为18.62%;Xpert MTB/RIF系统检出阳性标本110例，阳性率为18.97%。Kappa检验提示两种方法诊断结果一致性良好（Kappa=0.932），McNemer检验的结果表明两者的差别无统计学意义（P=0.774），见表1。

2.2 Xpert MTB/RIF技术与抗酸染色法阳性结果比较  疑似患者共580例，Xpert MTB/RIF系统检出阳性标本110例，阳性率为18.97%;抗酸染色法检出阳性标本87例，阳性率为15.00%。Kappa检验提示两种方法诊断结果一致性较好（Kappa=0.848），McNemer检验的结果提示两种方法诊断结果差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

3讨论

结核病是一种在世界范围内广泛分布的常见传染病，在中国其发病率约为63/10万，因此对其防控不容忽视。传统的涂片抗酸染色法步骤较为繁琐，耗时较长，对制片质量及染色的效果均有严格的要求[1，7]。而且镜检需要有经验的工作人员进行检测，对镜检人员数量及单日阅片量亦有要求。而对于含菌量较少的痰液或者体液标本采用涂片镜检法时有可能会出现漏检现象。而传统作为金标准的的培养法则耗时更长，对患者来说容易延误治疗[2，8]。随着分子诊断技术的发展，以实时荧光定量PCR技术为基础的Xpert MTB/RIF技术被应用到MTB及其耐药相关基因检测中。该方法兼具耗时少（约2 h），灵敏度高，操作封闭安全等优点，而且还能同时检测常见的结核杆菌耐药基因，因此得到了世界卫生组织的推荐。刘亚芹及刘婷等人以培养法为金标准和Xpert MTB/RIF技术进行比较未发现两者的阳性结果有显著差异[3，4]。周洪经[6]等的研究则认为Xpert MTB/RIF技术检出MTB的阳性率高于培养法及抗酸染色法。

本文对580例疑似结核患者同时采用抗酸染色法、固体培养法和Xpert MTB/RIF技术进行结核分枝杆菌的检测，结果显示Xpert 技术检测MTB的阳性率和固体培养法相比一致性较好，且差异无统计学意义（P>0.05）;和抗酸染色法阳性率相比则更为敏感。与邹远妩及马秀珍等人的结论较为一致[9，10]。固体培养法常常被作为结核杆菌检测的金标准，但由于结核杆菌分裂增殖缓慢，所以其在培养基上要观察到阳性结果需要较长的时间，尤其是标本含菌量少的情况下其所需要的时间更长，这很难满足患者及临床医生的诊治需要。而抗酸涂片法作为常规结核的过筛实验耗时费力，敏感性低，对人员和安全设备有较高的要求，操作也比较繁琐，且较低的阳性检出率也一直困扰着大家。从本次研究的结论可以看出，Xpert MTB/RIF系统有着和固体培养法不相上下的阳性检出率，且整个检测过程快速安全，可作为临床快速筛查MTB的一种有效手段，为临床预防和诊治结核提供有效帮助。

参考文献：

[1]赵雁林，姜广路.痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册[M].北京：中国协和医科大学出版社，2009.

[2]赵雁林，王黎霞.分枝杆菌分离培养标准化操作程序及质量保证手册[M].北京：人民卫生出版社，2013.

[3]刘亞芹，杨振斌，冯冬霞，等.GeneXpert法检测结核分枝杆菌及其对利福平耐药性的研究[J].中华实验和临床感染病杂志（电子版），2015（4）：524-527.

[4]李妍，张天华，鲜小平，等.Xpert Mtb/RIF 检测技术诊断肺结核和肺外结核的价值[J].中国防痨杂志，2015，37（6）：586-589.

[5]刘婷，温贵华，陈伊，等.XpertMTB/RIF在结核病诊断及利福平耐药中的应用[J].国际检验医学杂志，2016，37（10）：1368-1370.

[6]周洪经，郭明日，冯爽，等.Xpert MTB/RIF在快速诊断肺结核及利福平耐药中的临床应用[J].国际检验医学杂志，2016，37（18）：2568-2570.

[7]张爱梅，李锋，刘旭晖，等.结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测在肺外结核中的诊断价值[J].中华传染病杂志，2016，34（3）：174-179.

[8]陈子芳，劳海黎，李秀华，等.全自动医用 PCR 分析系统在肺外结核诊断及利福平耐药检测中的应用价值[J].中华结核和呼吸杂志，2016，39（7）：529-533.

[9]邹远妩，刘尚武，朱蕾，等.Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌及其耐药性在结核病辅助诊断中的临床价值[J].临床肺科杂志，2015（3）：568-570.

[10]马秀珍，卓玛.高海拔地区Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌及其耐药性在结核病辅助诊断中的应用价值[J].广东微量元素科学，2016，23（9）：34-36.

收稿日期：2018-12-20;修回日期：2018-12-30

编辑/成森