血清sST、IgA1与T细胞亚群联合检测在HSP患儿诊断中的价值

王伟伟，马国瑞，宋晓娟，吴文先

(1.河南科技大学第一附属医院儿科，河南 洛阳 471003；2.偃师市疾病预防控制中心，河南 偃师 471900；3.河南省中医药研究院儿科，河南 郑州 450003)

过敏性紫癜（HSP，hench-schonlein purpura）是儿童常见的出血性疾病之一，是一种常见的自身免疫性血管炎性疾病，近年发病率逐渐增加，主要表现为关节肿痛、皮肤紫癜、胃肠道的出血等等[1，2]。HSP的发病机制还不清楚，但是主要认为是免疫应答机制介导的血管炎，可能与发病期T淋巴细胞亚群失调、体液免疫系统紊乱等有关，在体液免疫中体内产生以IgA1为主的自身抗体，形成免疫复合物从而沉积在毛细血管壁中，损伤血管的内皮细胞，导致HSP的发生[3，4]。有研究表明sST2(可溶性ST2，Soluble ST2)在免疫调节中有重要作用，在HSP患儿中水平升高[5]，因此本研究探讨血清sST、IgA1与T细胞亚群联合检测在HSP患儿诊断中的价值，为临床治疗提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 随机选择2015年1月-2018年1月在本院就诊的HSP患儿110例，年龄2～13岁，平均（7.53±2.68）岁；其中男 76 例，女 34 例；病程1～23 周，平均（12.4±6.4）周；类型：单纯皮肤紫癜有35例，皮肤紫癜合并胃肠道症状有39例，皮肤紫癜、胃肠道症状及关节症状有23例，紫癜肾炎有13例；同时选择同期在本院体检的健康儿童80例，年龄为 3～13 岁，平均（7.16±2.05）岁；其中男 51例，女29例；两组儿童的年龄、性别等一般资料差异无统计学意义（P＞0.05），有可比性。本研究经我院伦理委员会批准。所有儿童家长知情并同意。1.2纳入排除标准 观察组纳入标准：⑴患儿符合过敏性紫癜的诊断标准；⑵均是首次发病；⑶近4周内未使用免疫抑制剂或者糖皮质激素等药物；观察组排除标准：⑴合并其他过敏者；⑵合并有风湿性关节炎、特发性血小板减少性紫癜等免疫性疾病或免疫缺陷者；⑶近期有感染者；对照组纳入标准：⑴健康儿童；对照组排除标准：同上述排除标准。

1.3 方法 采集所有儿童空腹肘部静脉血5ml，以3000r/min离心10min，使用全自动生化分析仪检测IgA1、IgG、IgM以及补体的水平，使用ELISA法检测TNF-α、IL-33、IL-21水平，试剂盒由上海钰博生物科技有限公司。使用流式细胞仪检测所有儿童的T细胞亚群。使用ELISA法检测sST2的水平，试剂盒由上海仁捷生物科技有限公司提供，严格按照说明书进行操作。

1.4 统计学方法 所有数据均采用SPSS 19.0统计软件分析，采用百分比表示计数资料，采用χ2检验比较组间差异，用平均数±标准偏差表示计量资料，两两组间比较采用t检验。采用Spearman分析各指标和HSP的相关性，将单因素分析存在统计学差异的因素纳入Logistic多因素回归分析，采用受试者工作特征曲线 (receiver operating characteristic curve，ROC 曲线)判断其诊断价值。 P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 所有儿童的T细胞亚群比较 观察组患儿的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+低于健康儿童，CD8+高于健康儿童，差异有统计学意义（P＜0.05），见表 1。

表1 所有儿童的T细胞亚群比较（±s）

表1 所有儿童的T细胞亚群比较（±s）

组别 例数观察组对照组110 80 t P CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+61.41±8.37 66.03±6.73 4.212 0.000 30.18±6.85 35.62±4.68 6.500 0.000 32.26±6.46 30.36±5.42 2.139 0.034 1.01±0.36 1.19±0.38 3.324 0.001

2.2 所有儿童的炎性因子、补体的水平比较 观察组儿童的IgA1、TNF-α、IL-33水平显著高于健康儿童，IL-21水平显著低于健康儿童，差异有统计学意义（P＜0.05），IgG、IgM、C3、C4 水平与健康儿童差异无统计学意义（P＞0.05），见表 2。

2.3 所有儿童的sST2水平比较 观察组儿童的sST2水平显著高于健康儿童，差异有统计学意义（P＜0.05），见表 3。

2.4 各指标与HSP之间的关系 相关性分析表明：CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、IgA1、sST2/IL-33 与 HSP的发生有关。

2.5 Logistic回归分析 以 CD4+/CD8+、IgA1、sST2/IL-33为自变量，以是否为HSP为因变量，进行非条件Logistic回归分析。结果表明T细胞亚群、I-gA1、sST2/IL-33是 HSP的独立危险因素 （P＜0.05），见表 5。

表2 两组儿童的炎性因子、补体水平比较（±s）

表2 两组儿童的炎性因子、补体水平比较（±s）

组别 例数观察组对照组110 80 t P IgA1（g/L） IgG（g/L） IgM（g/L） C3（g/L） C4（g/L）1.88±0.64 1.29±0.32 8.341 0.000 8.06±2.41 8.26±1.87 0.644 0.521 1.47±0.55 1.42±0.47 0.657 0.512 1.18±0.21 1.16±0.23 0.623 0.534 0.23±0.06 0.24±0.05 1.430 0.056 IL-21（pg/ml） TNF-α（pg/ml） IL-33（pg/ml）156.42±60.03 331.46±32.51 25.816 0.000 224.51±124.05 124.51±80.04 6.742 0.000 364.41±154.62 175.74±91.04 10.531 0.000

表3 所有儿童的sST2水平比较（±s）

表3 所有儿童的sST2水平比较（±s）

组别 例数观察组对照组110 80 t P sST2（pg/ml）1784.4±541.4 1067.4±468.3 9.531 0.000

表4 各指标与HSP的相关性分析

ROC 曲线显示：CD4+/CD8+、IgA1、sST2/IL-33单独检测的曲线下面积为 0.789、0.763、0.775，联合检测的曲线下面积为0.907，联合检测的敏感度为89.49%，显著高于单独检测，见表6。

图1单项生化指标和联合检测的ROC曲线图

3 讨论

HSP是儿童常见的自身免疫性血管炎性疾病，常累及肌肉、关节、血液循环、神经系统、肾脏等多个系统、脏器的功能，虽然HSP是一种自限性疾病，较多患者在4周内症状可消失，但是仍有部分患者可发展为HSPN（过敏性紫癜肾炎），甚至最后发展为慢性肾病，因此需要及时进行治疗，但是在临床上HSP的发生机制还不清楚，目前主要认为与体液免疫、T细胞亚群功能异常、炎症因子等有关[6-8]，因此本研究探讨血清sST、IgA1与T细胞亚群联合检测在HSP患儿诊断中的价值，提高早期诊断率，提高预后。

表5 二项分类logistic回归分析结果

表6 单项检测和联合检测ROC曲线下面积比较

T细胞亚群功能失调被认为HSP的发病机制之一，在本研究中观察组患儿的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+低于健康儿童，CD8+高于健康儿童，差异有统计学意义（P＜0.05），说明了在HSP患儿中Th1/Th2发生失衡，Th2细胞活化，发生失衡的原因可能是因为在HSP患儿中IFN-γ （干扰素-γ，Interferonγ）的水平发生降低，使IFN-γ/STAT1(信号传导及转录激活因子1，Signal transducers and activator of transcription 1)的信号传导通路受到抑制，从而使Th1的特异性转录因子表达降低，而机体的白介素-4（IL-4，Interleukin-4）水平升高使 IL-4/STAT6(信号传导及转录激活因子 6，Signal transducers and activator of transcription 6)的信号传导通路激活，使Th2的转录因子表达上调，从而使Th1/Th2发生失衡[9，10]，与张红[11]等研究结果较一致，说明了HSP可能与T淋巴细胞亚群的功能失调。

HSP患儿中发生Th1/Th2失衡，可使IL-4、IL-6等因子增多，IL-4及IL-6水平升高可活化B细胞，从而使IgA1（分泌IgA）增多，主要以异常糖基化IgA1为主，异常糖基化IgA1不能被肝细胞识别、清除，可发生自我聚集形成多聚体或者形成抗原-抗体的免疫复合物，从而沉积在血管壁导致血管炎，引起HSP的发生[11，12]。在本研究中观察组儿童的IgA1、TNF-α水平显著高于健康儿童，IL-21水平显著低于健康儿童，差异有统计学意义 （P＜0.05），IgG、IgM、C3、C4 水平与健康儿童无差异（P＞0.05），说明了B细胞体液免疫在HSP发生中起重要作用。

近年新发现的炎性因子IL-33与IL-1的家族成员的IL-18、IL-1β的基因序列、结构域相似，可以激活肥大细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞等细胞的诱导产生，Th2类炎症细胞因子、趋化因子，促进炎症发生[13]。有研究表明[14]在成人HSP血清IL-33水平升高，而且与疾病的严重程度有，可能是因为IL-33与其受体ST2和辅助蛋白结合传递活化的信号，激活NF-kB （核因子-kB，nuclear factor-kgene binding）、MAPK(丝裂原活化蛋白激酶，mitogen-activated protein kinase)等通路，使Th2型细胞因子、趋化因子释放，导致HSP发生。ST2蛋白是IL-1受体的家族成员，分为可溶性ST2、跨膜性ST蛋白，而sST2是IL-33的可溶性受体，可能抑制Th2型细胞因子、趋化因子释放，主要是因为sST2并不引起信号的传导，sST2与IL-33结合后可以抑制IL-33及细胞膜上其他的受体结合，从而抑制信号传导[15]。在本研究中观察组儿童的sST2、IL-33水平显著高于健康儿童，但是sST2/IL-33的比值降低，差异有统计学意义（P＜0.05），说明了 sST2/IL-33的水平失衡与HSP的发生有较大关系，与王菲等研究结果较一致。在本研究中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、IgA1、sST2/IL-33 与 HSP 的发生有关；以CD4+/CD8+、IgA1、sST2为自变量，以是否为DN为因变量，进行非条件Logistic回归分析。结果表明T细胞亚群、IgA1、sST2是HSP的独立危险因素（P＜0.05）， 说明了 CD4+/CD8+、IgA1、sST2/IL-33 与HSP有关。

ROC 曲线显示：CD4+/CD8+、IgA1、sST2/IL-33单独检测的曲线下面积为 0.789、0.763、0.775，联合检测的曲线下面积为0.907，联合检测的敏感度为89.49%，显著高于单独检测，说明了CD4+/CD8+、IgA1、sST2/IL-33在诊断HSP均有较大价值，但是联合检测的敏感度更高，可显著提高诊断率，在临床上可广泛使用。