牛奶中氯霉素残留量LC-MS/MS 快速测定方法

李 琴 王宇坤 仵军红

（郑州市食品药品检验所，河南郑州 450006）

氯霉素属胺苯醇类抗生素，在我国养殖行业滥用现象比较严重，而氯霉素在畜禽体内残留，给食品安全带来很大隐患，同时对人类健康构成了潜在的危害。因此研究一种快速、准确的检测氯霉素残留量的方法具有重大意义。目前动物源性食品中氯霉素残留量的测定方法有多种，如液相色谱法、气相色谱-质谱联用法、液相色谱-质谱联用法等，而液质联用技术因其灵敏度高、适用范围宽、易确证而被广泛应用在有害物质残留分析中。

本方法采用液质联用的方法直接分析牛奶中氯霉素的残留量，无需衍生化，采用内标法二级质谱定性定量，能准确快速的对牛奶中氯霉素残留量进行分析。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

氯霉素标样，Dr.GmbH 德国；甲醇、乙酸乙酯、乙腈、正己烷，均为色谱级，美国赛默飞公司；娃哈哈纯净水，杭州娃哈哈有限公司；氯化钠，分析纯。

1.2 仪器与设备

Waters TQ-S 液质联用仪，色谱柱为Waters ACQUITY UPLCBEH C18（2.1 mm×50 mm×1.7 μm），美国Waters；TD4Z-WS 高速离心机，湖南湘立科学仪器有限公司；Thermo Scientific Dionex ASE 350 加速溶剂萃取仪；MS204S 精密电子天平，METTLER TOLEDO 公司。

1.3 仪器工作条件

色谱条件：流动相乙腈∶水=50∶50，流速0.2 mL/min，柱温30 ℃，进样量10 μL，采集时间5 min。

质谱条件：LC-MS 接口为电喷雾接口（ESI）负离子模式，多反应监测（MRM），毛细管电压1.8 kV，锥孔电压20V，脱溶剂温度500 ℃，锥孔流速150 L/h，雾化器流速450 L/h，扫描以m/z 321/152、m/z 321/257 离子对定性，以m/z 321/152定量，驻留时间0.3 s。

1.4 标准曲线的配制

准确称取10 mg 氯霉素标样于烧杯中，用甲醇溶解并定容至100 mL，得到100 μg/mL 的标准溶液，逐步稀释，得100 ng/mL 标准储备液。

氯霉素氘代内标（氯霉素-D5）储备溶液：100 μg/mL 的标准储备溶液。

1.5 样品前处理

称取牛奶试样约10 g 于50 mL 离心管中，加乙酸乙酯20 mL，振荡10 min，4 500 r/min 离心10 min，取乙酸乙酯层于旋转蒸发管中，反复提取2 次，合并提取液，于45 ℃旋转蒸发至干，用4%氯化钠溶液5 mL 溶解残留物，加正己烷重复提取2次，取下层水相过水相滤膜后进样分析。

2 结果与分析

2.1 标准曲线及相关系数

配制成氯霉素质量浓度为0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、2.0 ng/mL、5.0 ng/mL、10 ng/mL，氯霉素-D5 最终质量浓度为5 μg/L 系列标准工作溶液。将氯霉素标准溶液及内标物氯霉素-D5注入离子源，找到与之相对应的分子离子峰，扫描二级质谱找到特征离子碎片信息，以氯霉素和氯霉素-D5特征离子响应值比值为纵坐标，标准溶液质量浓度为横坐标，绘制标准曲线（见图1），回归方程为y=0.736 097x+0.007 425 1，相关系数为0.999，说明线性良好。

图1 氯霉素标准工作曲线图

2.2 精密度和回收率试验

取均质后的空白牛奶试样，分别进行了1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL 3 个水平的空白加标样品，做回收率试验，每个水平做5 次平行试验，得到平均回收率及相对标准偏差见表1。

表1 方法的精密度和回收率试验结果（n=5）

2.3 牛奶样品中氯霉素的测定

共检测牛奶样品120 批次，检出氯霉素的共5批次，不合格率为4.2%。氯霉素标样和样品的总离子色谱图见图2。从图2 中可以看出，牛奶样品中的氯霉素很好地被分离，无干扰峰，5 min 即可完成一次分析，大大缩短了检测时间。

图2 氯霉素标样和样品的总离子色谱图

3 结论

本试验建立了牛奶中氯霉素残留量的快速检测方法，简化了提取步骤，缩短了检测时间。该方法具有精密度较高，重现性较好、分离度高等优点，能满足对牛奶中氯霉素残留量的检测要求，极大的提高了检测效率。