冠状动脉粥样硬化患者外周血Th17细胞与IL-17的水平及意义

王江凤 高美华 张娟

摘要：目的  探究冠状动脉粥样硬化患者外周血Th17细胞与IL-17水平变化的意义。方法  收集青岛阜外心血管病医院冠状动脉粥样硬化患者200例，根据疾病类型分为心肌梗死（AMI）组（52例）、不稳定型心绞痛（UA）组（68例）、稳定型心绞痛（SA）组（80例），另外选取同期200例体检者作为对照组。采用流式细胞术检测患者Th17细胞频率，ELISA法检测各组血清中IL-17、CRP表达水平。结果  流式细胞检测结果显示，与对照组比较，各组Th17细胞的频率表达均升高，差异具有统计学意义（P<0.05），且AMI组升高水平高于SA组和UA组，差异具有统计学意义（P<0.05）; ELISA检测结果显示，与对照组比较，各组IL-17及CRP表达水平均升高，差异具有统计学意义（P<0.05），且AMI组升高水平高于SA组和UA组，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论  冠状动脉粥样硬化患者血中Th17及IL-17水平的升高，可能是导致冠状动脉粥样硬化患者板块不稳定的原因。

关键词：冠状动脉粥样硬化;Th17;IL-17;CRP

中图分类号：R541.4                                   文献标识码：A                               DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.12.020

文章编号：1006-1959（2019）12-0064-03

Abstract：Objective  To investigate the significance of changes in Th17 cells and IL-17 levels in peripheral blood of patients with coronary atherosclerosis. Methods  A total of 200 patients with coronary atherosclerosis were enrolled in Qingdao Fuwai Cardiovascular Hospital. According to the disease type， they were divided into myocardial infarction （AMI） group （52 cases）， unstable angina （UA） group （68 cases）， stable angina pectoris. In the （SA） group （80 cases）， another 200 physical examination subjects were selected as the control group. The frequency of Th17 cells was detected by flow cytometry. The expression levels of IL-17 and CRP in serum of each group were detected by ELISA. Results  The results of flow cytometry showed that compared with the control group， the frequency of Th17 cells in each group increased， the difference was statistically significant （P<0.05）， and the elevated level of AMI group was higher than that of SA group and UA group，the difference was statistically significant （P<0.05）. The results of ELISA showed that compared with the control group， the expression levels of IL-17 and CRP increased in each group， the difference was statistically significant （P<0.05）， and the AMI group increased. The level was higher than that of SA group and UA group，the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion  The elevated levels of Th17 and IL-17 in patients with coronary atherosclerosis may be responsible for plate instability in patients with coronary atherosclerosis.

Key words：Coronary atherosclerosis;Th17;IL-17;CRP

冠狀动脉粥样硬化病（coronary atherosclerosis）是一种慢性炎症性动脉硬化性疾病，世界范围内病死率较高，在中国其发病人数显著增加[1]。有研究发现T细胞参与该病发生发展，过去研究大多发现Th1、Th2参与冠状动脉粥样硬化炎症病理过程，认为Th1细胞可促进动脉粥样硬化发展[2]。最新研究发现Th17细胞也参与炎症反应，Th17细胞被视为炎症反应重要调节因子，IL-17作为TH17分泌的特征性细胞因子，参与多种炎症性疾病的发展。TH17/IL-17在系统性红斑狼[3，4]等免疫性疾病的研究较多，其在冠脉粥样硬化中相关作用仍在研究。CRP作为一种敏感的炎症和组织损伤标志物，在冠状动脉粥样硬化发生发展进程中扮演重要作用。大量临床和基础研究数据表明，CRP在冠脉硬化症中发挥重要作用[5]。Th17与冠状动脉粥样硬化密切相关，CRP在冠状动脉粥样硬化症里的报道也渐增多，因此研究TH17、IL-17及CRP在冠状动脉粥样硬化症的机制有重要意义。本文通过检测Th17细胞在冠状动脉粥样硬化患者血清中的变化，探讨TH17、IL-17、CRP与冠状动脉粥样硬化症的关系，为临床提供参考依据。

1资料与方法

1.1一般资料  收集2017年6月～2018年6月青岛阜外心血管病医院冠状动脉粥样硬化患者200例，男122例，女78例。根据疾病类型分为心肌梗死（AMI）组、不稳定型心绞痛（UA）组、稳定型心绞痛（SA）组。其中AMI组52例，伴有突发性的胸前区疼痛，且持续时间>30 min，不缓解，心肌标志物超过正常范围，有典型心电图波段变化或动态改变;UA组68例，胸痛时有进行性加重，伴有ST段一过性改变;SA组80例，休息或含化硝酸甘油可在几分钟内缓解，日常活动下心电图无异常，发作时或行心电图负荷试验有波段压低，检测心肌坏死标志物未超过正常范围;另外选择同期排除冠状动脉病变的体检者200例为对照组。各组年龄、性别、血压、血糖、吸烟史、血脂情况比较，差异无统计学意义（P>0.05），研究可比，见表1。

1.2标本收集  冠状动脉粥样硬化患者均于发病后6 h内采集肘部静脉血5 ml，体检者于早上10点前采集肘部静脉血5 ml，离心后分离取上清冻存与-80℃冰箱供后续实验用。

1.3相关标准  高血压参照《中国高血压防治指南》2018修订版：在未使用降压药物的情况下 SBP≥140 mmHg 和（或）DBP≥90 mmHg。糖尿病参照最新糖尿病诊断标准：一个随机的静脉血浆葡萄糖浓度≥11.1 mmol/L或空腹血糖浓度≥7.0 mmol/L（全血≥6.1 mmol/L）或餐后2h血糖浓度≥11.1 mmol/ L与75 g 2 h后无水葡萄糖在口服葡萄糖耐量试验（OGTT）。血脂异常：TG>1.8 mmol/L，CHO>5.69 mmol/L，HDL>1.55 mmol/L，LDL>3.12 mmol/L。

1.4实验仪器及试剂  全自动生化分析仪P800（德国罗氏诊断有限公司）、AU580全自动生化分析仪（美国贝克曼集团有限公司）、MK3酶标仪（美国Thermo）、流式细胞仪（美国BD公司）。总胆固醇（CHOL）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、尿酸（UA）试剂盒、葡萄糖（GLU）测定试剂盒，试剂盒购自上海罗氏;血清IL-17、CRP ELISA试剂盒购自武汉基因美公司;Intracellular Fixation&Permeabilization Buffer Set、抗人CD4FITC抗体、抗鼠CD4FITC抗体、抗人IL-17A-PE抗体、抗鼠IL-17A-PE抗体购自美国eBioscience公司。

1.5方法  ①采用全自动生化分析仪P800检测标本中CHOL、HDL-C、LDL-C、UA、GLU表达水平，按试剂盒说明书设定各项指标参数;②FCM 检测外周血中TH17细胞频率，将待检血清50 μl及Th17抗体15 μl加入流式管内混匀后避光条件下孵育20 min，随后加入500 μl溶血素继续孵育10 min，再加入500 μl PBS混匀，2000 rpm 离心5 min，弃上清，用300 μl PBS重悬细胞，上机检测Th17细胞百分比;③细胞因子IL-17、CRP检测：取待测标本血清，采用双抗体夹心法参照相应试剂盒说明书操作，使用MK3酶标仪在450 nm下测定吸光度（OD值），并通过标准曲线计算样品中IL-17、CRP浓度。

1.6统计学分析  应用Prism 5.0软件进行统计分析，计量资料采用（x±s）表示，两两比较采用t检验，多组数据比较采用F检验，P<0.05 认为差异有统计学意义。

2结果

与对照组比较，各组Th17细胞的频率表达均升高，差异具有统计学意义（P<0.05），且AMI组升高水平高于SA组和UA组，差异具有统计学意义（P<0.05）; ELISA检测结果显示，与对照组比较，各组IL-17及CRP表达水平均升高，差异具有统计学意义（P<0.05），且AMI组升高水平高于SA组和UA组，差异具有统计学意义（P<0.05），见表2。

3讨论

冠心病是一种血管冠状动脉粥样硬化病变导致的血管管腔狭窄继而引起心肌缺血坏死诱发的心脏疾病。该病以严重的胸痛、心律失常、心衰为典型临床特征[6]。依据心电图ST段抬高分为两大类[7]， 该病目前起病急，因此寻找更快更合適的血清学指标，及时给予干预治疗，具有重要意义。近年来，不少学者提出炎症学说，炎症在动脉粥样硬化的所有阶段起着关键作用[8， 9]。

Th细胞协调免疫应答的主要手段之一是产生细胞因子。现已明确定义[10]的有分泌的Th1细胞亚群、Th2细胞亚群，最新研究发现Th17作为一种新型T细胞分子，与炎症性疾病，过敏性疾病有重要关系。IL-17主要来自于Th17的分泌，其不光能够分泌IL-6、IL-8，还能水解蛋白酶，另一方面也能募集中性粒细胞，一定程度上参与炎症过程[11]。外周血中高水平的IL-17在急性冠脉综合征患者表达，这也就说明IL-17在冠脉硬化性疾病中有着重要作用。本次研究显示，与对照组比较，各组TH17及IL-17表达水平差异均有统计学意义（P<0.05），SA组TH17及IL-17表达水平均升高，UA组TH17及IL-17表达水平均升高，AMI组TH17及IL-17表达水平均升高，且AMI组升高水平高于SA组，AMI组升高水平高于UA组，差异均有统计学意义（P<0.05）。这些也与之前文献所提到的结果相一致，这些数据进一步说明TH17、IL-17在冠状动脉硬化疾病发生发展密切相关。

CRP是由肝脏合成的一种急性时相反应蛋白，主要作用于淋巴细胞膜表面受体，促进淋巴细胞增生，进一步抑制T淋巴细胞增生分化[12]， 在正常人血清中能检测到的含量很少，当机体出现感染、损伤、炎症或者肿瘤等情况时，其含量明显升高。CRP与急性冠状动脉粥样硬化症的发生发展密切相关[13]。研究发现，CRP作用于血管内皮细胞诱导粘附分子，从而释放炎性介质，进一步加剧脂质的沉积，最终加重疾病进展。本研究中结果表明，与对照组比较，SA组CRP表达水平升高，UA组CRP表达水平升高， AMI组CRP表达水平升高，UA组CRP表达水平低于AMI组，且高于对照组，可说明CRP在冠状动脉粥样硬化中起到促进作用。

综上所述，本次试验发现TH17、IL-17和CRP在冠状动脉粥样硬化症发生发展中起到重要作用，或可导致冠状动脉粥样硬化患者斑块的不稳定性，然而其更为具体的机制需要后期进一步研究。

最后，感谢青岛阜外心血管病医院为本次研究提供数据支持！

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收稿日期：2019-2-13;修回日期：2019-3-13

編辑/成森