人血清布鲁氏菌病两种检测方法比较

杨洋 张旭 白梅

摘要：目的  对比分析虎红平板凝集實验（RBPT）和试管凝集实验（SAT）两种检测方法的实验结果，为提高布鲁菌病实验室检测水平提供依据。方法  同时采用RBPT和SAT两种方法对2016年1月～2017年12月到锦州市疾控中心布病免疫门诊就诊的高危人群2873份人血清进行布鲁菌病实验室检测，对检测结果进行对比分析。结果  RBPT的阳性率为53.11%（1526/2873），SAT的阳性率为52.41%（1506/2873）。RBPT与SAT总体阳性进行比较：敏感度为98.47%（1483/1506），特异性为96.85%（1324/1367），符合率为97.70%（2807/2873），两种检测方法符合率很高;RBPT与SAT 1：100++及以上阳性者比较，符合率为72.96%（2096/2873），两种检测方法符合率不高。结论  RBPT不能代替SAT用于布鲁菌病的临床诊断，对SAT凝集低滴度者应跟踪调查。

关键词：布鲁菌病;虎红平板凝集试验;试管凝集试验;符合率

中图分类号：R516.7                                 文献标识码：A                                 DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.12.059

文章编号：1006-1959（2019）12-0174-02

Abstract：Objective  To compare and analyze the experimental results of two methods of detection of tiger red plate agglutination test （RBPT） and tube agglutination test （SAT）， in order to improve the detection level of brucellosis laboratory. Methods  RBPT and SAT were used to test the results of Brucellosis in 2873 human serum from high-risk groups in the outpatient department of outpatient disease in Jinzhou City from January 2016 to December 2017 and Comparative analysis this. Results  The positive rate of RBPT was 53.11% （1526/2873）， and the positive rate of SAT was 52.41% （1506/2873）. RBPT was compared with the overall positive SAT： sensitivity was 98.47% （1483/1506）， specificity was 96.85% （1324/1367）， and the coincidence rate was 97.70% （2807/2873）. The coincidence rate of the two methods was high; Compared with SAT 1：100++ and above， the RBPT was 72.96% （2096/2873）， and the coincidence rate of the two methods was not high. Conclusion  RBPT cannot replace the SAT for the clinical diagnosis of brucellosis， and the SAT agglutination low titer should be followed up.

Key words：Brucellosis;Tiger red plate agglutination test;Tube agglutination test;Coincidence rate

《中华人民共和国传染病防治法》将布鲁菌病（brucellosis，布病）归入乙类传染病，该病不仅严重危害人类健康，而且也严重危害畜牧业的发展。目前我国在临床诊断上多用虎红平板凝集实验（RBPT）进行初筛，阳性者用布病试管凝集实验（SAT）进行确诊。二者相比较而言，SAT操作程序复杂，需要22 h才能出结果，而RBPT则更加简便、快捷的得出结果，大大缩短了实验的操作时间和患者的等待时间。为探讨RBPT结果是否准确、能不能代替SAT方法，锦州市疾控中心微生物检验科对2873份人血清进行检测，现将结果汇报如下。

1材料与方法

1.1材料  2016年1月～2017年12月到锦州市疾控中心布病免疫门诊就诊的高危人群2873例。按常规方法采血、分离血清供检测;布病虎红平板凝集抗原、布病试管凝集抗原均由辽宁省疾病预防控制中心传感所提供，且在有效期内使用。

1.2方法及结果判定  参照《布鲁氏菌病诊断标准》进行检测和结果判断[1]。

1.2.1虎红平板凝集试验（RBPT）  将0.03 ml备检血清与等量的虎红平板凝集抗原（试剂需室温平衡30 min）在载玻片上充分混匀，5 min内判定结果。出现肉眼可见颗粒或絮状凝集为阳性（+）;未凝集者为阴性（-）。

1.2.2试管凝集实验（SAT）  取5支小试管，第1管加入2.3 ml生理盐水，第2试管不加，第3、4、5管各加入0.5 ml。吸取被检血清0.2 ml加入第1管中混匀。吸取第1管中血清0.5 ml加入第2管和第3管，混匀后，从第3管开始进行倍比稀释至第5管，混匀后将第5管0.5 ml弃去。将1∶10倍稀释的试管凝集抗原各0.5 ml分别加入第2管至第5管中。则血清稀释度从第2管到第5管分别为1∶25，1∶50，1∶100和1∶200。同时做阴阳对照，并制备判定比浊管。全部试验管，对照管及比浊管充分振荡后，置37℃温箱中20～22 h，室温放置2 h后观察结果。以 1∶100++及以上为阳性滴度，1∶100+以下为低滴度，未凝集者判定为阴性（-）。

2结果

2.1 RBPT和SAT检测结果  2873份待检血清分别用RBPT和SAT两种方法进行检测，其中RBPT的阳性率为53.11%（1526/2873），SAT的阳性率为52.41%（1506/2873）。在1347份RBPT阴性血清中，有23份SAT阳性，假阳性率为1.71%。RBPT与SAT总体阳性进行比较：敏感度为98.47%（1483/1506），特异性为96.85%（1324/1367），符合率为97.70%（2807/2873）两种检测方法符合率很高;RBPT与SAT 1∶100++及以上阳性者比较，符合率为72.96%（2096/2873）两种检测方法符合率不高，见表1。

2.2 RBPT与SAT阳性不符合结果  1526份RBPT阳性和1506份SAT阳性血清中，有66份血清出现不相符情况。其中RBPT阳性SAT阴性59例，RBPT阴性SAT阳性（阳性滴度+低滴度）7例，见表2。

2.3 SAT凝集低滴度者复查结果  本次實验SAT低滴度者共725例，其中287例完成复查。其中11例SAT低滴度转为阳性滴度，见表3。

3讨论

布鲁氏菌病是由布鲁氏菌属细菌侵入机体所引发的传染-变态反应性人畜共患传染病。临床上主要表现为轻重不一的发热、多汗、关节肌肉疼痛、肝脾肿大和男性睾丸炎，如果没有及时治疗转为慢性则很难彻底治愈。该病在世界范围内广泛流行，我国新疆、青海、内蒙古等地尤为严重，不仅影响了社会经济发展，还会引起公共卫生事件，威胁着人类的健康。锦州市也是辽宁省布病发病率较高的地区[2]。因此，准确、简便、快速的检测方法是防控布病疫情的关键环节。

本次实验的2873例待检样本采用RBPT和SAT同时进行检测，结果RBPT和SAT两种实验的符合率为97.70%，说明两者检测布病抗体具有很高的一致性。但在确证实验SAT的结果判读中抗体滴度为1∶100（++）及以上者才判定为阳性滴度更有诊断意义，而RBPT与SAT 1∶100++及以上阳性者比较，符合率为72.96%（2096/2873）两种检测方法符合率不高，其他实验研究也有类似情况[3]。所以RBPT不能代替SAT用于布病的临床诊断。RBPT结果只能大致推断SAT结果，用作大面积布病筛查和初筛实验使用。但由于RBPT实验操作简便快速，且在基层有很高的推广度，仍对布病爆发的早期识别、紧急预防和治疗有重大意义[4]。

在1526份RBPT阳性和1506份SAT阳性血清中，有66份血清出现不相符情况。其中RBPT阳性SAT阴性59例;RBPT阴性SAT阳性（阳性滴度+低滴度）7例，特别是编号为20150149和20151321的样本滴度已经达到了1∶100++，说明SAT会存在假阳性，提示在临床诊断中一定要结合流行病学和症状体征，避免误诊、漏诊。特别注意SAT实验有时会出现前滞现象，所以实验过程中一定要按要求做足稀释倍数以防漏检。

对287份SAT凝集低滴度者跟踪调查，在初次检测的3～4周后再次进行复检，结果有11例SAT凝集结果转为阳性（滴度≥1∶100++）。这是因为SAT主要检测 IgM类抗体[5]，抗体滴度会随病程长短而改变。说明对于RBPT凝集阳性而SAT凝集低滴度者进行复查十分有必要，提示在布病检测中要重视对疑似患者的复查随访工作。

综上所述，尽管RBPT操作方法简便快捷但仍不能代替SAT。RBPT可适用于筛查，筛查阳性的样本应用SAT进一步确诊，两种方法结合起来应用可提高检测实效。目前仍需要布病研究者去不断努力完善和深入研究，以解决布病检测中提高灵敏度去除假阳性的目的。另外，与布病监测科室加强信息沟通，对SAT凝集低滴度者进行跟踪调查，及时发现转阳的患者并加以干预，对布病的防控工作有着重要意义。

参考文献：

[1]中华人民共和国卫生部.WS 269-2019布鲁氏菌病诊断标准[S].北京：中国标准出版社，2019.

[2]田晶，张旭，白梅，等.2013年锦州市布鲁氏菌病高危人群血清学调查分析[J].中国卫生检验杂志，2014，24（7）：1026-1027.

[3]苏晓玲，樊永贞，王佳敏，等.布病血清学检测RBPT与SAT一致性研究中国卫生检验杂志，2015，25（9）：1357-1359.

[4]绍宏业，张帅清.107份人血清布鲁氏菌病两种检测方法比较[J].中国卫生检验杂志，2013，23（10）：2294.

[5]王佳，徐卫民.布鲁氏菌病血清学诊断研究进展[J].中国病原生物学杂志，2018，3（2）：149-152.

收稿日期：2019-1-7;修回日期：2019-3-1

编辑/王海静