黄芪中总黄酮含量的测定

王焕英

（衡水学院化工学院，河北衡水053000）

黄芪作为一种中药药材，因其含有黄酮类化合物，具有补气、改善心功能、利尿消肿、抗衰老和增强免疫力等功效，越来越受到科研工作者的关注。黄芪中总黄酮含量的测定与中医药学关系密不可分，测定黄芪中总黄酮的含量对黄芪药理作用的研究发挥着指导性作用。王超等[1]用乙醇作为提取剂，添加溴化十六烷基三甲胺辅助提取黄芪中黄酮。肖卫华等[2]用乙醇回流提取黄芪中黄酮含量，并用高效液相色谱法对提取出来的黄酮进行测定。徐东生[3]利用微波消解仪提取黄芪中的黄酮。以上方法能对黄芪中的黄酮最大限度地提取，并进行了含量测定，但也存在使用药品昂贵、仪器复杂等缺点。

本文以乙醇为溶剂，采用超声提取法提取黄芪中的黄酮，通过紫外分光光度计测定黄酮的含量,方法简单，操作方便,并采用单因素实验法探讨了不同乙醇浓度、用量、不同提取温度和时间对河北产黄芪中黄酮含量的影响，得出了最佳提取条件，在最佳条件下采用标准曲线法测得了黄芪中的黄酮总含量。

1 实验部分

1.1 实验仪器

T6新世纪紫外分光光度计；超声波清洗器；粉碎机。

1.2 实验步骤

1.2.1 超声温度的确定

文献调研得知，黄酮的溶解量随着溶剂乙醇温度的升高而升高，但是考虑到乙醇的沸点在75℃～80℃，超声温度超过80℃乙醇会挥发而使体积减少，所以选择超声温度为75℃。

1.2.2 超声时间的确定

用粉碎机将黄芪粉碎，将粉碎后的黄芪均分成4份，每份称取1 g左右，分别在80%的乙醇中浸泡8 h后，在 75℃下超声 20 min、30 min、40 min、60 min，在紫外分光光度计上测其黄酮含量。

1.2.3 乙醇浸泡浓度的确定

用粉碎机将黄芪粉碎，将粉碎后的黄芪均分成4份，每份称取1 g左右，分别取20 mL 55%、70%、80%、95%的乙醇中浸泡8 h。浸泡结束后，75℃下超声提取40 min。在紫外分光光度计上测其黄酮含量。

1.2.4 浸泡时间的确定

用粉碎机将黄芪粉碎，将粉碎后的黄芪均分成5份，每份称取1 g左右，分别在80%的乙醇中浸泡2 h、8 h、10 h、12 h、14 h，浸泡结束后，75℃下超声提取 40 min。在紫外分光光度计上测其黄酮含量。

1.2.5 乙醇浸泡体积的确定

用粉碎机将黄芪粉碎，将粉碎后的黄芪均分成4份，每份称取1 g左右，分别加入80%的乙醇10 mL、20 mL、30 mL、50 mL，浸泡结束后，75℃下超声提取 40 min。在紫外分光光度计上测其黄酮含量。

2 结果与讨论

2.1 超声时间对黄酮含量的影响

表1 不同超声时间对黄酮吸光度的影响

由表1可知，随着超声时间的延长，吸光度逐渐增大，说明黄芪中提取黄酮的量逐渐增加，但当超声时间超过40 min后，吸光度虽然增大，但是增大的幅度减小，所以取超声时间为40 min，既保证了得到较大量的黄酮，又节省了时间和能源。

2.2 乙醇浓度对黄酮含量的影响

表2 不同浓度乙醇浸泡后黄酮所测吸光度

由表2可知，随着浸泡黄芪的乙醇浓度增大，吸光度先增大后减小，原因可能是，乙醇浓度越大，能溶解的黄酮量也越多，但当乙醇浓度增大到一定程度，乙醇分子间产生氢键，游离乙醇浓度减小，溶解黄酮的能力减小，所以选取乙醇浓度80%为宜。

2.3 浸泡时间对黄酮含量的影响

表3 不同浸泡时间后黄酮所测吸光度

由表3可知，随着黄芪浸泡时间的延长，吸光度逐渐增大，但当浸泡时间超过12h后，吸光度几乎不再增加，说明浸泡12 h黄芪中的黄酮已完全溶解出来，所以选择浸泡时间为12 h。

2.4 黄芪与乙醇量比对黄酮含量的影响

表4 不同物料比所测黄酮吸光度

由表4可知，随着所用乙醇体积的增大，吸光度逐渐增大，但当乙醇体积增大到1∶30后，吸光度虽然增大，但幅度不大。所以选择物料比1∶30既保证黄芪中的黄酮基本溶解，又节约了成本。

综上所述，黄芪中黄酮最佳提取条件为：在80%的乙醇中浸泡12 h，浸泡时黄芪与乙醇的物料比为1 g∶30 mL，然后在75℃下超声40 min。

2.5 标准曲线的绘制

准确量取对照品溶液（芦丁标准液）0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL，分别置于 10 mL 容量瓶中，加甲醇溶液至刻度线，置比色皿中，分别于265 nm波长处测定吸光度，作出图1曲线。

在上述最佳黄酮提取条件下，称取一定量黄芪测得黄酮吸光度，根据标准曲线，可以得出黄酮的平均浓度为7.4 μg/mL，即每g黄芪中黄酮的含量为0.007 4 mg。

3 结论

（1）乙醇浓度对黄酮的提取有影响，经过实验可知，黄芪浸泡在80%的乙醇溶液中有较高的吸光度。

（2）浸泡黄芪的乙醇体积对黄酮的提取有影响。当乙醇浓度固定不变时，体积越大，吸光度越大，1g∶30 mL的乙醇溶液浸泡较好。

（3）黄芪在乙醇中浸泡时间的长短与黄酮的含量有关，浸泡时间越长，提取的黄酮含量越多，当达到一定时间时，黄酮含量不再升高，表明黄芪已经浸泡完全。

（4）用粉碎机粉碎黄芪后浸泡将黄酮提取出来，实验发现用超声波提取法能将黄酮提取得更彻底。

（5）实验结果表明，黄芪在1 g∶30 mL 80%的乙醇溶液中浸泡12 h，然后在75℃下超声40 min，吸光度达最大值，可以认为黄酮已经提取完全，此时吸光度值为0.302 3，黄芪中黄酮含量为0.007 4 mg/g。