益气养阴活血方对2型糖尿病大鼠糖脂代谢及胰岛功能的影响*

张 军 孙佳佳 马雷雷 赵 静 刘 颖

非传染性疾病(主要包括糖尿病、心血管疾病、肿瘤等)是世界上最主要的死亡原因，占总死亡人数的65%[1]。2型糖尿病不仅对人类寿命和生活质量有严重的威胁，还造成各国沉重的经济负担，2015年一项研究表明[2]，全球糖尿病总花费占全球GDP的1.8%，约1.31万亿美元。因此，有效防治2型糖尿病及其并发症的发生和发展尤为重要。中药具有多途径、多靶点且毒副作用小的优势，最新研究表明[3]，防治2型糖尿病应坚持益气养阴、活血化瘀的治疗原则。本研究为本科室自拟方，临床疗效突出，行动物实验，旨在研究益气养阴活血方对2型糖尿病大鼠糖脂代谢及胰岛β细胞功能的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物选取SD雄性，SPF级，体质量200～240 g的大鼠60只，均购自于中国人民解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所，许可证号：SCXK-(军)-2014-0001。实验期间各组大鼠予专用饲料喂养，自由摄水，动物房温度20～25 ℃，相对湿度50%～65%，自然昼夜光照，适应性喂养7 d，正式分组。

1.1.2 药物中药颗粒：黄芪15 g，黄精15 g，太子参15 g，当归10 g，山萸肉15 g，鬼箭羽15 g，丹参30 g，葛根10 g，牡丹皮10 g，熟地黄15 g，三七粉2 g等。

1.1.3 试剂和仪器链脲佐菌素(STZ)：美国Sigma公司。大鼠胰岛素ELISA试剂盒：北京普诺欣生物科技有限公司。血糖仪及配套试纸：德国拜耳公司；离心机：美国Thermo Fisher科技公司；MDF-u4086 s低温冰箱：日本SANYO公司；Shandon325型石蜡切片机：英国Shandon公司。

1.2 方法

1.2.1 动物分组及给药将60只8周龄SD大鼠适应性饲养7 d，随机分为空白对照组(10只)和造模组(50只)，造模组选取FBG≥16.7 mmol/L并维持稳定7 d为成功建立2型糖尿病大鼠模型，共48只。按体质量分成层，随机分为5组：模型组；津力达组以1.5 g/kg/d给药；益气养阴活血方高、中、低剂量组，药量剂量按成人剂量6.25倍作为低剂量组用药，按4∶2∶1给药。高、中、低剂量组分别给予55.00 g/kg、27.50 g/kg、13.75 g/kg的益气养阴活血方药物溶液，空白组和模型组给予等体积生理盐水灌胃。每天给药1次，持续28 d。造模期间，2只大鼠因灌胃不当死亡，1只大鼠疑似肺感染死亡，最终45只大鼠计入统计。

1.2.2 取材灌胃给药28 d后，小鼠处理前称重，腹主动脉取血，分离血清，-20 ℃保存。取胰腺组织置于4%甲醛固定、脱水、石蜡包埋，制成 4 μm厚切片以备病理检测。

1.2.3 指标测定

1.2.3.1 FBG、2hBG、FINS、HOMA-β、ISI测定测定各组大鼠治疗前后FBG和2hBG，ELISA测定FINS，计算胰岛素敏感指数：ISI=1/(FBG×FINS)，并取其自然对数；胰岛素分泌指数：HOMA-β=20× FINS/(FBG-3.5)。

1.2.3.2 胰岛细胞病理变化处死大鼠后取部分胰腺组织，常规HE染色，400倍光镜下观察各组大鼠胰岛β细胞的病理变化。

2 结果

2.1 各组大鼠用药前后FBG、2hBG比较用药前，与空白组比较，模型组，津力达组，益气养阴活血方高、中、低剂量组FBG、2hBG明显升高(P<0.05)，但5组之间差异无统计学意义(P>0.05)。用药后，与空白组比较，模型组及各给药组FBG、2hBG水平明显升高(P<0.05)，与模型组比较，各给药组FBG、2hBG水平明显降低(P<0.05)，与津力达组比较，益气养阴活血方各剂量组均能够不同程度地降低FBG、2hBG，而以中剂量组效果最优且明显优于津力达组(P<0.05)。用药前后比较，用药后各给药组均不同程度地降低大鼠的FBG、2hBG水平，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 各组用药前后FBG、2hBG比较 (只，

注：与空白组比较，1)P<0.05；与模型组比较，2)P<0.05；与津力达组比较，3)P<0.05；与用药前比较，4)P<0.05

2.2 各组大鼠FINS、ISI、HOMA-β比较与空白组比较，模型组和各给药组FINS，ISI和HOMA-β水平降低，有显著性差异(P<0.05)。与模型组相比，益气养阴活血方各剂量组ISI水平升高(P<0.05)，各给药组FINS和HOMA-β水平升高(P<0.05)。与津力达组比较，益气养阴活血方各剂量组ISI水平无差异(P>0.05)，FINS和HOMA-β水平均有所下降，而以中剂量组效果最佳(P<0.05)。见表2。

表2 各组大鼠FINS、ISI、HOMA-β水平比较 (只，

注：与空白组比较，1)P<0.05；与模型组比较，2)P<0.05；与津力达组比较，3)P<0.05；与中剂量组比较，5)P<0.05

2.3 各组大鼠TC、TG、LDL-C、HDL-C比较与空白组比较，模型组TC、TG和LDL-C水平显著升高，HDL-C水平显著降低(P<0.05)。与模型组比较，各给药组TC、TG和LDL-C水平降低，HDL-C水平升高(P<0.05)。与津力达组比较，益气养阴活血方中剂量组降低TC、TG和LDL-C水平明显(P<0.05)。但对HDL-C的升高作用，各组间无明显差异(P>0.05)。见表3。

表3 各组大鼠血脂水平比较 (只，

注：与空白组比较，1)P<0.05；与模型组比较，2)P<0.05；与津力达组比较，3)P<0.05；与中剂量组比较，5)P<0.05

2.4 胰腺组织形态学观察光镜下，正常组大鼠的胰岛结构完整呈团索状，胰岛内细胞界限清楚，多呈圆形或椭圆形，大小正常，形态饱满，分布均匀，排列紧密规整，细胞胞核清晰居中呈卵圆形，胞质丰富浅染。与正常组比较，模型组大鼠的胰岛出现明显的萎缩现象，岛内细胞界限模糊，形态结构不规整，排列紊乱。细胞核出现部分固缩深染，偏心分布，胰岛间质大量纤维化多呈松网状，并伴有大量空泡，可见毛细血管增生和炎性浸润。与模型组比较，益气养阴活血方各给药组胰岛均有不同程度的改善，胰岛萎缩明显好转，结构趋于完整，岛内细胞数量增多，形态较好，空泡样变减少，无增生和炎性浸润。而中剂量组较其他给药组改善明显，其形态接近正常组。见图1。

图1 各组大鼠胰岛组织形态(HE×400)

3 讨论

2型糖尿病(T2DM)属于多基因遗传性疾病，发生发展的主要病理基础为胰岛β细胞功能受损和胰岛素抵抗，即胰岛素分泌缺陷和胰岛素作用缺陷[4]。不同程度的胰岛素缺乏和胰岛素抵抗可以引起糖、脂肪、蛋白质、水及电解质等代谢紊乱，而以糖脂代谢紊乱为主要临床特征，久病会引起一系列并发症。“糖脂毒性”可通过线粒体、过氧化物酶体增殖物激活受体、蛋白激酶、神经酰胺、氧化应激等多条途径影响胰岛功能，诱导2型糖尿病的发生[5]。

2型糖尿病属中医“消渴”范畴，而以阴虚为本、燥热为标[6]。冯兴中教授[7]指出“气虚生毒”为2型糖尿病病理关键，治疗上应益气养阴，扶“气虚”之正， 解“湿、热、痰、瘀、风”之毒。李怡[8]亦从“毒”而论，认为消渴的发生是内外合毒而致，形成“糖毒”，“糖毒”经久还可以化生“热毒”“火毒”“痰毒”“瘀毒”等。韩永明等[9]认为毒邪为病，伤人较甚，且顽固缠绵，这与糖尿病临床特点相吻合。又久病多瘀，提出瘀毒贯穿2型糖尿病及其并发症始终，故以气阴两虚兼瘀证最常见。本实验根据对消渴病病因病机分析，采用导师临床自拟经验方益气养阴活血方，其中黄芪、太子参为君，黄精、当归、鬼箭羽、丹参为臣，佐以葛根、三七、牡丹皮，共奏益气养阴、活血化瘀之效。方中黄芪多糖[10]可通过对肝组织细胞线粒体及内质网的保护作用,改善衰老2型糖尿病小鼠模型的肝脏糖脂代谢。太子参多糖[11]能明显降低小鼠血清MDA水平，激活小鼠AMPK及PKBSer473信号传导,增强炎症抑制蛋白IκBα的表达，进而有效抑制STZ诱导的C57BL/6J小鼠高血糖作用。黄精多糖、丹参多酚[12,13]可通过抑制体内氧化应激反应，有效改善糖脂代谢。另有相关研究表明，当归多糖[14]能明显降低2型糖尿病大鼠血糖、血脂、糖化血红蛋白情况。具有“破血通经”作用的鬼箭羽[15]则能改善血流变，防治并发症的发生发展。

本实验采用益气养阴活血方对高脂饲料加小剂量STZ诱导的2型糖尿病大鼠模型进行治疗，结果表明，各给药组FBG、2hBG、TC、TG、LDL-C水平降低，FINS、ISI、HOMA-β、HDL-C水平升高，大鼠胰腺组织HE染色显示胰岛组织均有不同程度的改善，而以益气养阴活血方中剂量效果最优。说明益气养阴活血方可有效调节血糖，改善糖脂代谢紊乱，修复胰岛β细胞结构和功能，促进胰岛素分泌。且提示在今后的临床运用中以益气养阴活血方中剂量组药物剂量为基础，用合理的药量达到最佳的疗效。