参麦注射液及其中间体相对分子质量研究

王雪莲，李响明*，王文鹏，周永妍，孙胜斌

(1.神威药业集团有限公司，河北 石家庄 051430；2.中药注射剂新药技术开发国家地方联合工程实验室，河北 石家庄 051430)

参麦注射液为红参和麦冬提取有效成分制成的纯中药注射液制剂，主要以人参皂苷类和糖类为主要有效成分[1]。参麦注射液具有益气固脱、养阴生津、生脉的作用，临床用于冠心病、休克、病毒性心肌炎等多种疾病的治疗，为临床常用中药注射液品种之一[2-3]。大分子物质被广泛认为是引起中药注射液中不良反应的源头[4]，受生产工艺及存放环境等因素影响，制剂中可能存在少量鞣质与蛋白质成分等大分子物质。在中药注射液生产过程中去除了绝大多数的大分子物质，而制剂中大分子物质的分子量分布，现有法定标准中鲜有控制。本实验采用高效分子排阻色谱法[5]对参麦注射液及其中间体药液测定其相对分子质量及分布，为参麦注射液质量标准的提高提供依据[6-8]。

1 材料

1.1 仪器与试剂

Agilent 1260型高效液相色谱；Alltech ELSD6000型蒸发光散射检测器；凝胶柱TSK-Gel GPWXL4000，7.8mm×300mm；四元梯度泵，CPA225D电子天平(德国赛多利斯)；SHB-Ⅲ循环水式真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；KH3200E型超声清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司)。乙腈(色谱纯，天津科密欧化学试剂有限公司)，其余试剂均为分析纯。

1.2 样品及对照品

参麦注射液(市售产品)及参麦注射液中间体。右旋糖酐分子量标准套对照品相对分子质量分别为D0(相对分子质量180，批号140637-201203)、D1(相对分子质量2 700，批号140638-201203)、D2(相对分子质量5 250，批号140639-201203)、D3(相对分子质量9 750，批号140640-201203)、D4(相对分子质量13 050，批号140641-201203)、D5(相对分子质量36 800，批号140642-201203)、D6(相对分子质量64 650，批号140643-201203)、D7(相对分子质量135 350，批号140644-201203)、D8(相对分子质量300 600，批号140645-201203)，均购于中国食品药品检定研究院。

2 方法与结果

2.1 测定方法

2.1.1 色谱条件 凝胶柱(TSK-Gel GPWXL4000，7.8 mm×300 mm)，以10 mmol·L-1醋酸铵溶液为流动相，柱温40 ℃，流速为0.6 mL·min-1，蒸发光散射检测器(干燥气体流速3.0 L·min-1；漂移管温度115 ℃)。

2.1.2 对照品溶液制备 取右旋糖酐D0～D8对照品，精密称定，加水分别制成每1 mL约含2 mg的溶液，即得。

2.1.3 供试品溶液制备 取参麦注射液过0.45 μm微孔滤膜，即得。参麦中间体药液稀释至每mL含红参0.1 g生药或麦冬0.1 g生药浓度，过0.45 μm微孔滤膜，即得。

2.1.4 测定方法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5 μL，注入液相色谱仪测定。将所得的一系列对照品溶液的色谱保留时间为横坐标X，对照品标准分子量的对数值为纵坐标Y，作二次回归方程，计算供试品溶液的分子量分布，即得。

2.2 方法学考察

2.2.1 系统适应性及专属性试验 取空白溶剂水测定，结果见图1，溶剂对结果无影响。

图1 溶剂色谱

右旋糖酐系列标准品色谱见图2。

注：按保留时间由大到小，依次为右旋糖酐对照品D0-D8。

2.2.2 线性范围考察 取右旋糖酐对照品溶液，按“2.1.4”注入高效液相色谱仪，采用ELSD检测，记录对照品保留时间。以对照品的标准分子量的对数值为纵坐标Y，相应的对照品色谱峰保留时间为横坐标X，进行二次回归，回归方程为Y=-0.060 7X2+1.334 5X-2.280 5，R2=0.982 9，r=0.991 0。

2.2.3 精密度试验 取D4(相对分子质量13 050)对照品溶液，连续进样6次，计算保留时间RSD为0.17%，峰面积RSD为0.57%，表明系统精密度良好。

2.2.4 稳定性试验 取SM-1批按“2.1.4”制备供试品溶液，在室温放置0、4、8、12、16、24h时分别进样测定，计算各峰保留时间的RSD分别为0.14%、0.11%、0.18%，各峰峰面积RSD分别为3.94%、3.87%、0.33%，表明供试品在室温放置24h内稳定性良好。

2.2.5 重复性试验 取SM-1批按“2.1.4”制备供试品溶液，连续进样6次，计算各峰保留时间RSD分别为0.07%、0.05%、0.08%，各峰峰面积RSD分别为2.36%、2.47%、0.18%，系统重复性良好。

2.3 样品测定

2.3.1 成品测定 取10批市售成品，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，依法测定，结果见表1。

表1 10批市售成品检测结果

2.3.2 中间体样品测定 取3批参麦注射液中间体样品，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，依法测定，由标准曲线可得以下结果，见表2、表3。

表2 参麦注射液中间体(红参)检测结果

表3 参麦注射液中间体(麦冬)检测结果

从10批参麦注射液成品的测定结果可以看出，参麦注射液成品中物质的相对分子质量均小于8 000，其中98.7%物质分子质量小于380；分子量在3 300～3 460间的物质约占总峰面积0.55%～0.56%；极少量分子质量在7 800～7 950间的物质约占总峰面积0.035%～0.047%。这应该与参麦注射液产品中所含的人参皂苷类、糖类物质有关。

结合文献研究及生产工艺，在参麦注射液生产的关键工序取中间体，以考察精制工艺对大分子物质的去除效果。红参醇提液中最大分子质量在80 000～92 000间，约占总峰面积0.15%～0.18%，经过活性炭处理后该部分物质占总峰面积的比例下降。经过调碱、水沉后，可有效去除分子质量大于10 000的物质和极少量分子质量7 000～8 000的物质。麦冬醇提液中最大分子质量在1 300～1 400间，可见提取出来的物质分子量较小，再经过活性炭处理、水沉后，不同分子量间的物质所占总峰面积的百分数变化不大。

3 讨论

本研究建立了一种可用于检测参麦注射液大分子物质的相对分子质量及分布方法，该方法操作简单、便捷、分离度好，对该产品大分子物质质量控制具有重要意义，对其他注射液中大分子杂质的限量检查亦有借鉴作用，而且借助中间体的分子量分布结果可以评价精制工艺的有效性。

参麦注射液主要含有人参皂苷类成分和糖类成分，故本实验以右旋糖酐为对照，主要测定支链型大分子物质；是否存在链球型大分子物质[9]还需进一步研究。