MUC16促进肺腺癌细胞侵袭转移

陈永胜 贾小婷(通讯作者)

510095广州医科大学附属肿瘤医院肿瘤研究所广州恶性肿瘤治疗转化医学重点实验室，广东广州

肺癌是全球发病率和死亡率均居于第一位的恶性肿瘤，其中40%左右肺癌患者属于肺腺癌[1]。肺腺癌发病率和死亡率居高不下的主要原因是发生发展的机制尚未阐明，因此探讨肺腺癌发生发展的分子机制是临床的重要研究课题。MUC16 属于黏蛋白家族成员，能够促进多种肿瘤发生发展，且MUC16 可调控顺铂和吉西他滨的化疗耐受[2]，本文拟探讨其在肺腺癌中的作用。

资料与方法

材料与试剂：本次研究所用试剂和材料主要包括肺腺癌细胞H1975(中国科学院上海细胞库)、胎牛血清(美国Gibco公司)、1640 培养基(美国Gibco公司)和Transwell小室(美国Corning有限公司)。

方法：①细胞培养：将H1975 细胞接种于含10%胎牛血清的1640 培养液中，在37℃、5%CO2培养箱中培养；待细胞融合度达到80%以上，用于后续研究。②Transwell：将Transwell 小室放在24 孔板中，上室加入50 μL 无血清培养基，将其放入37℃、5%CO2培养箱中水化基底膜30 min；将目标细胞消化，用1%血清培养基重悬，调整浓度至5×105个细胞/mL；吸去上层小室的液体，加入目标细胞200 μL，下层小室加入完全培养基500 μL，24 h 后，用甲醇室温固定小室20 min，棉签擦拭上层小室细胞，1%结晶紫染色细胞10 min，流动水冲洗小室，室温晾干，拍照。每个实验重复3次以保证结果的可靠性。

生物信息学：通过在线数据库GEPIA(http ：// gepia.cancer-pku.cn/index.html)分析MUC16 的表达量及与预后的相关性。

统计学方法：所有数据采用SPSS 19.0软件分析，均用Mean±SD表示；两组间比较用独立样本t检验，检验水准α=0.05。

结 果

通过在线数据库GEPIA 发现MUC16在483例肺腺癌中的表达量远高于在347例正常组织中的表达量。且MUC16 的表达量越高，肺腺癌患者预后越差(P=0.006 6)，见图1。

以H1975 细胞作为对照组，在H1975 细胞中过表达MUC16(标记为H1975/MUC16 组)，Transwell 实验发现与对照组相比，H1975/MUC16 组可明显增加该细胞的侵袭能力。相反，在H1975细胞中敲低MUC16(标记为H1975/sh-MUC16 组)，Transwell 实验发现与对照组相比，H1975/sh-MUC16组可明显抑制该细胞的侵袭能力，见表1。

讨 论

图1 MUC16 在肺癌中高表达且与患者较差的预后正相关

MUC16在80%以上卵巢癌中高表达，且在子宫内膜癌、胰腺癌、结肠癌、乳腺癌和肺癌细胞中也有过表达[3-4]。我们通过统计GEPIA 数据库信息发现，MUC16 在肺腺癌组织中的表达量显著高于癌旁组织，且其高表达量与患者较差的预后呈正相关关系。细胞功能实验证实，MUC16 能促进肺腺癌细胞的侵袭能力。有学者发现MUC16 能够与β-catenin 结合，促进其从细胞质移位到细胞核，从而促进下游致癌基因的表达[5]。研究发现MUC16可促进p120ctn迁移至细胞质，活化RhoA/Cdc42 信号通路，从而促进卵巢癌细胞增殖和迁移[6]。后续，我们将深入验证MUC16 通过何种方式促进肺腺癌细胞侵袭转移。

表1 MUC16影响H1975的侵袭能力