全自动定氮法测定植物蛋白饲料中挥发性盐基氮

摘要：制订植物蛋白饲料中挥发性盐基氮的测定方法对饲料业进行监督、指导、规范非常必要。实验室测定经验，制定植物蛋白饲料中挥发性盐基氮的测定方法（全自动定氮法），通过研究分析该测定方法的范围、原理，并从实验仪器、设备、用试剂的准备过程，与采样、试样设备、样品处理、定氮实施过程及最终的结果计算与精密度分析过程进行详细介绍，以期为其他地方植物蛋白饲料中挥发性盐基氮的测定提供借鉴。

关键词：植物蛋白;饲料;挥发性盐基氮;全自动定氮法

中图分类号：S816 文献标识码：B doi：10.3969fj.issn.2096-3637.2019.19.011

0 引言

目前我国饲料工业蓬勃发展，饲料产品不断创新，特别是发酵的植物蛋白饲料原料和含有植物性蛋白饲料原料的饲料产品，凭借易消化吸收、报酬高、使用范围广等特点，发展较快。河北省作为养殖和饲料产业大省，是发酵饲料发源地之一，近年更是发展迅猛。

植物蛋白饲料中挥发性盐基氮主要是由于发酵中生产条件失当或杂菌生长过多产生，挥发性盐基氮指在蛋白饲料受到有关酶与细菌的作用，逐渐发生变质腐败中，原本的蛋白质分解而产生氨以及胺类等碱性含氮物质。该类物质具有加强的挥发性，含量的高低与氨基酸破坏程度呈正比，因此也是检查原料腐败变质情况的重要依据。饲料作为养殖业必不可少的的食物来源，直接影响畜产品的质量安全。河北省曾发生过因挥发性盐基氮含量过高造成饲料企业巨大经济损失的案例。植物蛋白饲料原料和含有植物性蛋白饲料原料的饲料产品中挥发性盐基氮的检验方法亟待制定。

1 范围

方法规定了饲料中挥发性盐基氮测定的原理、仪器和设备、试剂、采样及试样制备、样品准备、滴定、结果计算、准确度和精密度。

方法适用于植物蛋白饲料中挥发性盐基氮的测定。

方法检出限为0.18mg/100g。

2 原理

试样中的挥发性盐基氮用高氯酸液浸提，将浸提液调至碱性，蒸馏，用硼酸吸收液吸收，再以盐酸标准溶液滴定，计算含量。

3 仪器与设备

实验室用样品粉碎机或研钵;分样筛（孔径0.45mm）;分析天平（感量0.1mg）;电炉;低速离心机;微量酸式滴定管（最小分度值为0.01mL）;锥形瓶（250mL）;容量瓶（50mL）;全自动定氮仪。

4 试剂

除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682中规定的三级水。

（1）高氯酸溶液（0.6mol/L），量取高氯酸50mL，加水定容至1000mL。 （2）氢氧化钠溶液（40g/L），称取氢氧化钠40G，加水溶解并稀释至1000mL。

（3）盐酸标准溶液[c（HCL）≈0.01mol/L]，吸取浓盐酸0.85mL，加水定容至1000mL，摇匀，并按照GB/T601的方法进行标定。

（4）硼酸吸收液（10g/L），称取硼酸10g，溶于1000mL水中。

（5）硅油消泡剂。

（6）混合指示剂，甲基红0.1%乙醇溶液与溴甲酚绿0.5%乙醇溶液等体积混合，临用前配置。

（7）甲基红指示剂（10g/L），称取甲基红指示剂1g，溶解于100mL95%乙醇中。

5 采样及试样制备

按照GB/T14699.1采样，按照GB/T20195进行样品制备，粉碎后过0.45mm孔径的分析筛，混匀密闭保存，48h内检测。

6 样品准备

6.1 样品处理

称取试样约5g（精确至0.1mg）于锥形瓶中，加入高氯酸溶液（5.1）40mL，振摇30min均匀混合，然后将试溶液全部转移至50mL容量瓶，并用高氯酸溶液（5.1）定容，摇匀;再用50mL的离心管从试样浸提液中提取约30mL的液体，3500r/min离心5min，最后取上清液在2～6℃的环境中贮存24h后，以备后期实验测定。

6.2 定氮

采用全自动定氮仪，按方法参数编写程序进行测定。

7 滴定

用盐酸标准溶液（4.3）滴定至溶液由蓝绿色变为灰红色为终点。

同时用高氯酸溶液（4.1）10.00mL代替浸提上清液进行空白试验。

8 结果计算

所得實验数据按公式（1）计算。

$x=＼frac{（V1-V0）＼timesc＼times14.01}{m＼timesV{‘}/V}＼times 100$…………………………………………………（1）

式中：

x—试样中挥发性盐基氮的含量，单位mg/100g;

V1—测定用样液消耗盐酸标准溶液体积，单位为mL;

V0—空白时消耗盐酸标准溶液体积，单位为mL;

c—盐酸标准溶液的浓度，单位为mol/L;

V—试样提取液定荣体积，单位为mL;

V’一试样提取液定荣体积，单位为mL;

14.01一与1.00mL盐酸标准溶液（4.3）相当于以克表示的氮的质量;

m—试样质量，单位为g。

9 精密度

9.1 重复性

在重复条件下，获得的2次独立测试结果的绝对差值不超过这两个测定值的算术平均值的10%。

9.2 再现性

在再现条件下，获得的2次独立测试结果的绝对差值不超过这2个测定值的算术平均值的15%。

10 参考引用文件

GB/T601（化学试剂标准滴定溶液的制备）;GB/T6682（分析实验室用水规格和试验方法）;GB/T14699.1（饲料采样）;GB/T20195（动物饲料试样的制备）;GB/T8170-2008（数值修约规则与极限数值的表示和判定）。

11 结束语

做植物蛋白饲料中挥发性盐基氮的测定非常重要，挥发性盐基氮含量过高时会造成养殖动物中毒现象。近年，非洲猪瘟、口蹄疫、禽流感时有发生，因此保障饲料的质量安全，进而保证畜牧业的质量安全尤为重要，制订此方法对饲料业进行监督、指导、规范非常必要。

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作者简介：段培姿（1980-），女，河北饶阳人，研究生，衡水市农业环境与农畜产品质量监督管理站副站长，主要从事农业环保与农畜产品检验监测工作。