春雷霉素高效液相色谱分析方法

李丽霞 程伦 王鹏 胡紫微

摘要：于春雷霉素而言，其是一种农用抗生素，对防治农作物病害具有良好的效果，不会对周围环境造成污染，是现阶段应用比较广泛、较为理想的一种杀菌剂。春雷霉素的特点有：无特征的紫外吸收、极性大、易溶于水，在液相色谱柱上的保留时间相对较短，难以与杂质有效分离，这给分析检测人员带来了较大的困难。为了将春雷霉素的色谱行为进行改变，需要对春雷霉素高效液相色谱分析方法进行探究，以期使春雷霉素的作用充分发挥。

关键词：春雷霉素;高效液相色谱分析方法;离子对

1春雷霉素试验检测概述

某公司曾经利用柱前衍生化方法，并与疏水性发色团有效结合，通过这样的方式对春雷霉素的色谱行为进行改变，使其保留时间逐步增加，同时使春雷霉素具有特征的紫外吸收，但是这种操作方法过于复杂，在操作的过程中，不仅需要投入大量的時间，而且需要投入较多的人力，在衍生化反应过程中会产生一种气体，名为HF气体，该气体具有一定的毒性，因此会对操作人员产生不利影响。此外，在使用柱前衍生化方法的过程中，需要使用相应的冷冻设备，这样才能保证衍生物在短时间内不被分解，从而使分析结果的有效性得到保障。由于该种操作方法相对复杂，并且在操作的过程中容易产生一系列问题，牛长群等人优化了分析条件，并构建出了反相离子对高效液相色谱法。笔者将利用此种方法对2%春雷霉素水剂进行分析，并使用岛津LC-10AT vp Plus高效液相色谱仪，在这过程中，由于春雷霉素的保留时间如果太长，可能不利于实验人员的快速分析检测。

2实验用具、条件

2.1使用的仪器以及试剂。CBM-10AT vp plus数据处理工作站、岛津LC-10AT vp plus高效液相色谱仪、SPD-10A vp plus可变波长紫外检测器。

2%春雷霉素水剂、重蒸二次蒸馏水、磷酸、十二烷基硫酸钠、春雷霉素标样、乙腈。

2.2色谱条件。色谱柱显示为：250mmx4.6mm（i.d.）不锈钢柱，内装VP-ODS，粒径5μm。检测时的波长为215nm，柱温显示为室内的温度，流动相：乙腈-1.0%SDS水溶液体积比20：80，磷酸调节PH值控制在2-3之间。流速控制在1.2mL/min，进样量主要为5μL。研究人员在以上色谱条件下开展了试验检测工作，春雷霉素保留时间在14.5分钟左右。

3测定步骤

3.1标准曲线溶液的配置情况。研究人员称取春雷霉素标准品100毫克，需要确保称取量的准确性，将称取的春雷霉素放入25毫升的容量瓶中，用水进行稀释，稀释控制在相应范围之内，然后使水与春雷霉素有效溶解成为质量浓度在4.0g/L的母液。研究人员利用重蒸二次蒸馏水对母液进行相应的稀释，总共需要稀释4次。

3.2回收率方面的测定情况。研究人员称取标准品312.5毫克，在称取标准品的过程中一定要保证精确，将其放入25毫升的容量瓶当中，加水溶解，将水与标准品稀释到相应的刻度，摇匀，然后形成标准品溶液。研究人员称取2%的春雷霉素水剂试样，试样总共分为4份，每份含量为25毫克，将其置入25毫升的容量瓶当中，每一份春雷霉素水剂试样都需要加入标准品溶液，标准品溶液的加入量为4毫升，然后加水进行稀释。

3.3标样溶液的配制。研究人员称取0.05克的春雷霉素标样，将其放入25毫升的容量瓶中，用水进行稀释，稀释到相应的刻度，然后摇匀，使水与春雷霉素标样有效溶解。

3.4试样溶液的配置。研究人员称取含有0.05克的春雷霉素试样，将称取的春雷霉素试样放置在25毫升的容量瓶中，然后用水进行稀释，确保稀释达到相应的刻度，然后使两者充分溶解。

3.5测定。研究人员在完成以上操作之后，确保仪器基线稳定，方可注入数针标样溶液，然后根据相应的计算方法计算出各针的相对响应值。如果相邻两针的相对响应值变化在1.5%以内，可以根据以下步骤开展进样分析，第一步是标样溶液，第二步是试样溶液，第三步是试样溶液，第四步是标样溶液，根据这样的顺序进行测定。

4结果

4.1春雷霉素线性相关性的测定情况。研究人员以峰高或者是峰面积作为纵坐标，而横坐标是进样的质量浓度，然后可以得出两条直线回归式。研究人员通过计算得出质量浓度对峰面积的直线回归式，然后算出相关系数r为1.0。这就表明春雷霉素的进样量控制在相应的范围之内，春雷霉素的进样量与峰面积或峰高呈线性，各点大致保持在一条直线上。

4.2春雷霉素分析的准确度情况。研究人员控制春雷霉素标准品的添加量，添加量控制在25毫克，然后开展含量测定。通过本项研究可以得知，已知添加量与实测添加量较为接近，而回收率控制在98%-102%之间，这就证明本次研究方法十分可行。

4.3春雷霉素分析的精密度情况。下表中将给出三批2%春雷霉素水剂分析的精密度情况，对比三批样品，每批样品进行4次采样，通过下表分析结果显示，重复性相对较好，变异系数均在5%以内，2%春雷霉素水剂分析的要求可以满足。

5讨论

春雷霉素对家禽、人以及牲畜的毒性相对较低，是一种比较常用的农用杀菌剂，对水稻上的稻瘟病有良好的治疗作用。春雷霉素属于一种由链霉菌产生的弱碱性抗菌素，对春雷霉素的高效液相色谱分析进行探究，有利于春雷霉素的有效应用。

本项研究中在仪器色谱工作站默认的条件下，峰面积的积分值有着较大的变化，通过研究得出的峰面积是在改变积分条件后获得的数据，而峰高则较为稳定，可直接利用色谱工作站默认的条件下获得，所以在进行方法定量的过程中应该选用峰高。

在研究过程中，研究人员需要对各个环节进行控制，不仅需要控制研究的环境、研究过程中的取量以及稀释量等，还需要保证研究过程中仪器的功能，从而保证本项试验检测结果的准确性。在这过程中，需要各位研究人员的团结协作，在研究的过程中将自身能力充分发挥，对研究中的问题进行详细分析，在研究过程中确保研究标样、试样的取量，从而使整项研究的精准度得到保证。本项研究过程仍然有部分需要改善，希望通过本项研究给予相关人员提供一定的指导，使春雷霉素高效液相色谱分析得到进一步推进，从而为春雷霉素的使用奠定良好基础。

参考文献：

[1]刘刚.春雷霉素首次在桃树上登记[J].农药市场信息，2018（21）：34.

[2]吴国旭，毕富春，翟立红.春雷霉素高效液相色谱分析方法[J].农药，2010，49（12）：902-903.

[3]关于盐酸春雷霉素浓缩液稳定性的研究[J]. 孙玲玲，武仲涛.  中小企业管理与科技（中旬刊）. 2015（06）.

[4]首个春雷霉素水分散粒剂产品登记[J]. 刘刚.  农药市场信息. 2012（13）.

（作者单位：华北制药华胜有限公司）