LAMP技术在林蛙油掺假检测中的应用

陈丽晶 范怡婷 徐铭昆 陈宇飞

◆摘 要：林蛙具有重要经济意义和医疗保健价值，干制的雌蛙输卵管入药后称林蛙油。具有极高的营养保健功能，近年来已经以不同的产品形式走进了人们的日常生活。但随着其营养价值的发掘，林蛙油掺假造假行为泛滥，本文通过对林蛙、黑斑蛙、中华蟾蜍、青蛙和牛蛙的DNA分子进行提取，研究林蛙油掺假LAMP检测技术，旨在提供准确快捷的林蛙油检测方法，为基层、商检、食品检验、检疫单位、生化企业、科研院所、海关出入境检疫局等机构进行林蛙油掺假检测提供帮助。

◆关键词：林蛙油；掺假；LAMP技术

1 前言

林蛙为名贵的动物药材，林蛙油本身也具有延缓衰老、抗疲劳、滋阴养颜、提高机体免疫力功能和抗应激能力，是一种滋补养生品。而LAMP分子生物学检测方法在食源性致病菌检测、动物源性食品安全检测、病毒检测等方面都作出了重大贡献，研究林蛙油掺假LAMP检测技术，希望提供准确快捷的林蛙油检测方法。

2 林蛙油掺假现状

林蛙油因其重要的医疗保健价值，在国际市场上价格昂贵，有“软黄金”之称。这也导致了市场上出现很多假冒伪劣产品，其中主要以中华蟾蜍输卵管、红肚蛤蟆输卵管、牛蛙油、青蛙油、鱼类精巢为主。因此，建立一种新型快速、简便、灵敏而高通量的检测方法，进行林蛙油掺假检测刻不容缓。

3 传统林蛙油检测

传统的林蛙油检测方法有很多，包括：外观鉴定、膨胀度鉴定和质地鉴定等这些传统林蛙油检测主要以形态学为基础从林蛙油的来源，性状，理化等方面来进行鉴别。但是这些鉴别方法容易受到遗传、环境、人类活动、以及林蛙的生长发育过程等因素的影响。使得最终鉴定结果不稳定，可靠性更低。而分子生物学检测方法则不容易受周围环境因素、器官组织差异及生物体发育阶段的影响，应用性更强。

4 LAMP技术

4.1 LAMP技术简介

LAMP技術是一种新的体外扩增特异DNA片段分子生物技术。是一种“简便、快速、精确、低价”的基因扩增方法。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于PCR技术，不依赖任何专门的仪器设备实现现场高通量快速检测，检测成本远低于荧光定量PCR。

4.2 LAMP技术在掺杂掺假食品检测中的应用

近年来LAMP技术在掺假食品的检测研究多为肉类真伪鉴别，也有一些研究了动植物成分掺杂。真伪鉴别常以线粒体细胞色素b基因、D-Loop区、125rRNA、165rRNA等为靶基因。这是由于线粒体DNA具有广泛种内、种间多态性和高度的物种特异性的特点，并且具有拷贝数多，加热时不容易被彻底破坏，存活机率大，更容易被扩增，不会发生基因重组的优势。因此在选择靶基因时往往选择线粒体DNA而非核DNA。

4.3 LAMP技术在掺假林蛙油检测中的应用

LAMP技术对掺假林蛙油的检测是通过在Gaaebznk上找到林蛙、中华蟾蜍、牛蛙、青蛙的保守序列，采用在线LAMP引物设计软件对每种样品分別设计5组特异引物；进行最佳引物筛选，选出反应时间短、扩增效率高的引物；将筛选出的最佳引物进行特异性验证，初步建立林蛙、中华蟾蜍、牛蛙、青蛙快速检测体系，便可分别制作出单一品种掺假检测试剂盒。

4.4 LAMP检测技术的意义

环介导等温扩增技术自2000年开发至今已有18年，该技术逐渐被越来越多的学者所接受，尤其适合在实验条件简陋和技术比较落后的地区推广和应用。随着对LAMP技术研究的不断深入，我们将不断完善、发展这种新型的技术，使它在食品安全检测方面发挥更大地优势，得到更全面的应用。实验证明，LAMP法检测肉类食品切实可行，在食品安全快速检测方面将具有极大的应用前景。

5 总结

LAMP技术作为一种核酸扩增技术，在食品安全检测领域已逐渐成为一种可靠的分子生物学检测手段。目前，LAMP技术的研究方向主要是研究领域的广度和深度两方面。广度研究增加了LAMP技术的应用范围，LAMP技术原本是用于医学领域，逐渐发展到食品学、动物科学、农学等领域，建立了相关一系列的LAMP检测体系，食品掺杂掺假、食品过敏原、转基因食品等方向研究较多；深度研究主要探讨了LAMP技术的原理分析、技术优化。将LAMP与其他技术相结合，往往能起到优势互补的作用。总之，在食品检测领域.未来LAMP技术的发展方向依然是增加应用范围和技术优化并行.LAMP技术依然有很大发展空间。

参考文献

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作者简介

陈丽晶（1997—），女，在读本科生，研究方向：食品质量与安全专业。

通讯作者：陈宇飞，本科学历，教授，研究方向：食品微生物及安全检测。

资助项目：吉林工商学院大学生创新创业训练计划资助项目《林蛙油掺假LAMP检测方法的建立》（201811261021）。