Livin、Bcl-2在结直肠癌的表达及临床意义

高晓虹 徐晓焱 陈远寿 曹永

【摘  要】目的：研究Livin和Bcl-2在大肠癌中的表达及其与侵袭转移之间的关系，探讨Livin和Bcl-2之间的相关性。方法：采用免疫组织化学（SP）法对大肠癌34例及腺瘤10例和相应癌旁组织8例做Livin和Bcl-2的抗原标记。结果：Livin和Bcl-2与年龄、性别、Dukes分期及淋巴结转移均无明显相关性（P﹥0.05）。Livin与肿瘤分化程度和浸润深度呈明显相关（P<0.05）;Bcl-2与肿瘤浸润深度明显相关（P<0.05），而与肿瘤分化程度无显著性差异（P>0.05）。Livin和Bcl-2在大肠癌表达呈正相关。结论：Livin和Bcl-2的表达与大肠癌发生和侵袭密切相关，可作为判断大肠癌预后的指标。

【关键词】大肠癌;Livin;Bcl-2

【中图分类号】R735      【文献标识码】A      【文章编号】1004-7484（2019）05-0056-01

恶性肿瘤是当前危害人类生命健康最常见的疾病之一。研究表明，90%以上恶性肿瘤患者最终死于肿瘤复发或转移。凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein， IAP）家族是一类调节细胞凋亡的蛋白质，IAPs过低或过高表达影响肿瘤的发生、发展。Livin是IAPs中新近发现的一员，已发现在多种肿瘤及细胞系中高表达，而在成人正常组织中不表达或低表达。Wang TS等发现ShRNA可抑制SGC-7901细胞中Livin的表达并诱导细胞凋亡，livin可作为诱导胃癌细胞凋亡的重要靶点。大肠癌中Livin表达或抑制是否与胃癌中的相同，目前仍未明确，因此本研究拟探讨Livin、Bcl-2在大肠癌的表达及与临床病理特征之间的关系，分析其在大肠癌转移中的作用和临床意义。

1 材料与方法

1.1 材料 收集牡丹江市中醫医院2010年～2014年资料完整病理存档蜡块52例，大肠癌34例、大肠腺瘤10例和癌旁组织8例。按Dukes分期分类：A期7例，B期15例，C期9例，D期3例;其高分化腺癌13例，中分化腺癌9例，低分化腺癌12例;腺癌30例，粘液腺癌3例，印戒细胞癌1例;腺瘤组：腺瘤性息肉10例，男性7例，女性3例，8例癌旁组织作对照。

1.2 试剂和方法  10%福尔马林溶液组织固定，采用S-P（strePtavidin-Perosidase）法，BCL-2抗体（BA0412），Livin抗体（BA1743）。Livin、Bcl-2抗体以1：200比例稀释，PBS液代替第一抗体做空白对照。

1.3 结果判定 Livin和Bcl-2在胞浆呈棕黄色或棕褐色颗粒，400倍下观察5个视野，计算Livin和Bcl-2阳性的癌细胞数。结肠癌癌细胞阳性判定标准参照，分级方法如下：染色强度依次为0、1、2、3;阳性细胞所占百分比：无着色为0，<10%为1，10%-50%为2，>50%为3，两种积分相加后进行半定量判断，进行统计学分析时（+～+++）皆为阳性。

1.4 统计学处理 采用SPSS17.0统计分析，SPearman相关分析，Kruskal-Wallis检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Livin、Bcl-2的表达

Livin、Bcl-2均呈棕黄色颗粒表达于癌细胞浆，34例中有17（50.0%）呈阳性表达，大肠腺瘤和癌旁中未见表达。癌组织中Livin与癌旁、大肠腺瘤存在明显差异（P﹤0.05）。Bcl-2在大肠癌组织、大肠腺瘤和癌旁中表达率分别为58.82%（20/34）、80.00%（8/10）和12.50%（1/8）。癌组织中Bcl-2与癌旁组织差异显著（0.025﹤P#﹤0.05） ，与大肠腺瘤无显著性差异（P﹥0.05）。

2.3 Livin、Bcl-2与大肠癌临床病理特征的关系

Livin与分化程度、浸润深度均显著性差异（P﹤0.05）;Bcl-2与癌组织浸润深度有显著性差异（P﹤0.05），与肿瘤分化程度无相关性（P﹥0.05）;Livin、Bcl-2与有无淋巴结转移均无明显关系（P﹥0.05）;Livin、Bcl-2与年龄、性别及Dukes分期均无明显差异（P﹥0.05）。

2.4 大肠癌中Livin与bcl-2表达相关性

Spearman分析示，大肠癌中Livin与bcl-2表达呈显著正相关（P=0.002<0.01，r=0.519），在大肠癌发生、发展中呈相互促进作用。

3 讨论

Livin作为一个新发现的IAP家族成员，在多数成人组织中不表达，但在大多数黑色素细胞系及很多人类恶性肿瘤细胞株中高表达，提示该基因可能在肿瘤的发生和发展中起着重要作用。Livin主要表达于细胞浆，但在胞质内呈丝状表达，同时也表达于胞核，并认为Livin C末端的RING结构对介导其在亚细胞水平上的分布具有重要作用。最近研究认为，Livin的亚细胞定位决定了抗凋亡和促凋亡之间的精细平衡调节。

我们的研究结果显示Livin主要表达于细胞浆，癌组织中表达率明显高于腺瘤和癌旁组织。Livin表达与年龄、性别、Dukes分期及淋巴结转移均无明显相关性，而与肿瘤分化程度和浸润深度明显相关。

Bcl-2作为公认的凋亡抑制基因，许多人类肿瘤中均有Bcl-2的高表达。本研究结果示，Bcl-2在大肠癌和腺瘤组织中高表达，在癌旁组织低表达。Bcl-2表达与患者的年龄、性别、分化程度、Dukes分期及淋巴结转移均无明显相关关系，而与肿瘤浸润深度明显相关。经统计学分析，提示大肠癌组织中Livin与Bcl-2蛋白表达呈正相关。在大肠癌的发病机制上Livin基因与Bcl-2基因协同发挥抑制细胞凋亡的作用。

总之，Livin、Bcl-2均为凋亡相关基因，Livin及Bcl-2的作用是抑制细胞凋亡的发生，这些基因的异常表达或突变影响到凋亡的发生，从而可使具有恶性变的细胞继续存活，为细胞的DNA进一步损伤或突变提供条件。本实验以大肠癌病理组织为研究对象探讨了Livin及Bcl-2蛋白在大肠癌中的作用及相互关系，为临床以Livin及Bcl-2为治疗靶点对大肠癌进行基因治疗提供理论依据。

参考文献

[1]黄青远， 赵志龙， 崔肃， et al. Livin在食管癌中的表达及与Bcl-2相关性研究[J]. 现代肿瘤医学， 2007， 15（3）：326- 328.

[2]齐凤杰， 赵树鹏， 董新茜. Livin蛋白在乳腺癌中的表达及与Bcl-2的关系[J]. 中国组织化学与细胞化学杂志， 2008 （6）：613-618.