Selonsertib的合成

胡孔泉，郑琳日，陈国华

(中国药科大学 药学院，江苏 南京 210000)

Selonsertib(1)，化学名为5-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-N-(6-(4-异丙基-4H-1，2，4-三氮唑-3-基)吡啶-2-基)-4-甲基苯甲酰胺，是由吉利德制药公司研发的一种细胞凋亡信号调节激酶1(ASK1)抑制剂，用于非酒精性脂肪肝(NAFLD)的治疗[1]。临床研究表明，selonsertib是一种高选择性，有效的ASK1抑制剂，具有潜在的抗肿瘤、抗炎、抗纤维化活性，单用或联合用药均表现出很好的疗效[2-3]。

通过查阅文献，(1)的合成方法主要有两条：首先都是将(1)拆分成5-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-4-甲基苯甲酸盐酸盐(8)和6-(4-异丙基-4H-1，2，4-三氮唑-3-基)吡啶-2-胺(12)两个中间体对其分别合成，最后再将两者缩合得到终产物(1)；其中，(12)的合成路线主要是以6-氨基吡啶甲酸甲酯(9)，经水合肼氨解得6-氨基吡啶-2-酰肼(10)，(10)与DMF-DMA缩合得(E)-N'-(6-(2-((E)- (二甲氨基)亚甲基)酰肼-1羰基)吡啶-2-基)-N，N-二甲基甲酰胺(11)，(11)再与异丙胺反应得到(12).而(8)的合成路线有两条：①以环丙基甲基酮(2)为起始原料与Koser试剂反应得到2-环丙基-2-氧乙基-4-甲基苯磺酸盐(17)，以甲苯为溶剂，与3-氟-4-溴-6-氨基甲苯(18)缩合得到2-((5-溴-4-氟-2-甲基苯基)氨基)-1-环丙基乙基-1-酮(4)，经甲酸，醋酐反应得到N-(5-溴-4-氟-2-甲基苯基)-N-(2-环丙基-2-乙酰氧基)甲酰胺(5)，与乙酸铵，乙酸反应环化得到1-(5-溴-4-氟-2-甲基苯基)-4-环丙基-1-H-咪唑(6)，与异丙基氯化镁反应后，通入二氧化碳反应得到5-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲酸(7)，在甲醇条件下与浓盐酸反应得到5-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲酸盐酸盐(8)[4-5]。该法(4)的合成反应时间偏长，且后处理收率低；制备(7)时，所使用的亲和试剂异丙基氯化镁在工业生产中会产生低沸点、易燃烧的丙烷，存在安全隐患。

图1 路线 ①

Fig.1 Route ①

②3-氟-4-溴-6-氨基甲苯(18)与氰化亚铜反应得到5-氨基-2-氟-4-甲基苯甲腈(13)，经溴代环丙基甲基酮(3)反应得到5-(2-环丙基-2-氧代乙基氨基)-2-氟-4-甲基苯甲腈(14)，与硫氰化钾反应得到5-(4-环丙基-2-巯基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲腈(15)，在氮气保护下，与过氧化氢反应得到5-(4-环丙基-1H-咪唑-2-基)-2-氟-4-甲基苯甲腈(16)，再与浓盐酸成盐得到5-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲酸盐酸盐(8)[6-7]。该法(13)的制备中，温度偏高，副产物生成多；制备(16)时，用到了易制爆试剂过氧化氢，且该步操作较复杂，操作要求较高。

图2 路线②

Fig.2 Route ②

本研究通过参考上述工艺思路，选择路线①作为化合物(8)的主体合成路线，并做了以下改进：制备(4)时，文献用甲苯做溶剂，且在90～100℃反应接近10 h，生成副产物多且耗费时间，收率46.6%。本研究以(3)代替(17)，以价廉易得的DMF作溶剂，在氮气保护下，逐滴加入DIPEA，于100℃反应2 h即可；后处理采用乙酸乙酯萃取，正庚烷中重结晶，收率55.4%，节约了成本，提高了收率。制备(7)时，将亲和试剂异丙基氯化镁替换成环己基氯化镁，同时后处理采用异丙醚重结晶，在保持收率相当的情况下，排除了安全隐患，也使析晶更易进行。

图3 1的合成路线

Fig.3 Synthetic Route of 1

1 实验部分

1.1 6-氨基吡啶甲酰肼 (10)

将6-氨基吡啶甲酸甲酯(9)(上海拓莱化学科技有限公司，5.02，33 mmol)加至60 mL甲醇中，再加入水合肼(南京化学试剂股份有限公司，16.5 g，)，反应于80℃下加热回流3 h，TLC[展开剂：甲醇∶二氯甲烷(1∶10)]显示反应结束。将反应冷却到室温逐渐有固体析出，过滤，并用乙酸乙酯(20 mL*2)洗涤后于40℃烘箱中干燥，得黄色泡沫状固体(3.81 g，收率76.1%)。

mp 195～198℃。

ESI-MS：152.9[M+H]+。

1HNMR(DMSO-d6) δ：9.13(s，1H)，7.53-7.48(t，J=7.92Hz，1H)，7.12～7.10(d，J=7.17Hz，1H)，6.62～6.59(d，J=8.41Hz，1H)，6.05(s，2H)，4.47(s，2H)。

1.2 (E)-N'-(6-(2-((E)- (二甲氨基)亚甲基)酰肼-1羰基)吡啶-2-基)-N，N-二甲基甲酰胺(11)

将化合物(10)(5.01 g，32 mmol)加入DMF-DMA(萨恩化学技术(上海)有限公司，30 mL)中，并将反应于110℃条件下加热回流16 h。TLC[展开剂：甲醇∶二氯甲烷(1∶8)]显示反应结束。冷却到室温，减压除去溶剂，于残渣中加入乙酸乙酯(20 mL)，50℃反应半小时；冷却到室温，有固体析出，过滤，于40℃烘箱中干燥得黄色固体(7.07g，85.2%)。

mp 108～112℃。

ESI-MS：263.1[M+H]+。

1HNMR(DMSO-d6) δ：10.66(s，1H)，8.84(s，1H)，8.05(s，1H)，7.70～7.65(t，J=7.68Hz，1H)，7.50～7.47(d，J=7.34，1H)，6.92～6.89(d，J=7.82Hz，1H)，3.12(s，3H)，2.99(s，3H)，2.84(s，6H)。

1.3 6-(4-异丙基-4H-1，2，4-三氮唑-3-基)吡啶-2-胺(12)

将化合物(11)(4.00 g，15 mmol)加入至乙腈-乙酸(20 mL，4∶1)中，再加入异丙胺(上海凌峰化学试剂有限公司，4.84 g，82 mmol)，于95℃加热回流反应18 h，TLC[展开剂：甲醇∶二氯甲烷(1∶10)]显示反应已结束，冷却至室温，减压除去溶剂，向残渣中加入水(15 mL)，并用10%NaOH调节pH值至8，可观察到有固体析出；转移至0℃老化，过滤，异丙醇洗涤，于40℃烘箱中干燥得淡黄色固体(2.16 g，54.1%)。

mp 185～188℃。

ESI-MS：204.0 [M+H]+。

1HNMR(DMSO-d6) δ：8.74(s，1H)，7.53-7.48(t，J=7.84Hz，1H)，7.18～7.15(d，J=7.40Hz，1H)，6.54～6.51(d，J=8.3Hz，1H)，6.12(s，2H)，5.56～5.47(m，J=6.88Hz，1H)，1.43～1.41(d，J=6.66Hz，6H)。

1.4 溴甲基环丙基酮(3)

将环丙基甲基酮(南京协尊医药科技有限公司10.01 g，119 mmol)、甲醇(80 mL)加至反应瓶中，并将反应至于0℃的冷阱中，同时逐滴加入溴(上海凌峰化学试剂有限公司，19.26 g，120 mmol)，反应1.5 h，随后转至室温再反应半小时。加入150 mL水淬灭反应，二氯甲烷(80 mL*3)萃取，合并有机层；分别用NaHCO3水溶液(10 mL)、水(10 mL)、氯化钠溶液(10 mL)洗涤有机层，加入无水硫酸钠干燥。过滤，减压蒸除溶剂得浅棕色液体，于100℃下减压蒸馏，收集64℃～68℃的馏分得无色透明状液体(10.53g，54.3%)[8]。

ESI-MS：162.4 &164.5 [M+H]+。

1HNMR(DMSO-d6) δ：4.37(s，2H)，2.25～2.18(m，1H)，1.01～0.82(m，4H)。

1.5 2-((5-溴-4-氟-2-甲基苯基)氨基)-1-环丙基乙基-1-酮(4)

将3-氟-4-溴-6-氨基甲苯(18)(上海毕得医药科技有限公司，5.01 g，24 mmol)、二异丙基乙胺(DIPEA，6.50 g，50.4 mmol)加入DMF(70 mL)中，升温至95℃，并在氮气氛围下逐滴加入(3)(4.30 g，26.40 mmol)，反应2 h，TLC[展开剂：乙酸乙酯∶石油醚(1∶6)]显示反应完全。冷却至室温，加入水(50 mL)，二氯甲烷(40 mL*3)萃取，合并有机层，依次用NH4Cl水溶液(40 mL)、NaHCO3水溶液(40 mL)、氯化钠溶液(40 mL)洗涤有机层，加入无水硫酸钠干燥，减压蒸除大部分溶剂，残留物在正庚烷中重结晶，过滤，烘干得类白色固体(4.85 g，55.4%)。

mp 84～87℃。

ESI-MS：285.9 &287.9 [M+H]+。

1HNMR(DMSO-d6) δ： 7.04～7.01(d，J=9.3Hz，1H)，6.51～6.49(d，J=6.10Hz，1H)，5.26～5.22(t，J=5.6Hz，1H)，4.16～4.14(d，J=5.33Hz，2H)2.21～2.12(m，1H)，2.08(s，3H)，0.96～0.85(m，4H)。

1.6 N-(5-溴-4-氟-2-甲基苯基)-N-(2-环丙基-2-乙酰氧基)甲酰胺(5)

于0℃的冷阱中，将乙酸酐(国药集团化学试剂有限公司，4.27 g，41.96 mmol)加入到甲酸溶液(上海阿拉丁生化科技股份有限公司，20 mL)中，再将溶解在二氯甲烷中的(4)(3 g，10.49 mmol)加入其中，反应两小时。TLC[展开剂：乙酸乙酯∶石油醚(1∶1.8)]显示反应完全。加入水(20 mL)淬灭反应，并用40%NaOH溶液调节pH值至9，分离有机层，二氯甲烷(20 mL*2)萃取，合并有机相，加入无水硫酸钠干燥，过滤，柱层析分离得无色透明粘稠状液体(2.97 g，90.3%)。

ESI-MS：313.6&315.6[M+H]+。

1HNMR(DMSO-d6) δ：8.16～8.14(d，J=8.6Hz，1H)，7.64～7.62(d，J=5.8Hz，1H)，7.42～7.39(d，J=6.8Hz，1H)，4.7～4.67(d，2H)，2.50(s，3H)，2.14～1.99(m，1H)，0.95～0.86(m，4H)。

1.7 1-(5-溴-4-氟-2-甲基苯基)-4-环丙基-1-H-咪唑(6)

向化合物(5)(3 g，9.00 mmol)中加入冰醋酸(国药集团化学试剂有限公司，20 mL)溶解，再加入乙酸铵(国药集团化学试剂有限公司，2.70 g，35.10 mmol)，115℃下反应过夜。冷却到室温，减压除去溶剂，加入水(20 mL)，并用40%NaOH溶液调节pH值至9，乙酸乙酯(25 mL*3)萃取，合并有机层并用无水硫酸钠干燥，过滤，在50℃～60℃活性炭脱色半小时，浓缩，于残渣中加入3 mL N，N-二甲基乙酰胺(DMAC)，再加入10 mL水可得浆液形式的化合物；过滤，依次用水，正己烷洗涤，烘干，得白色固体(1.33 g，50.3%)。

mp 62～64℃。

ESI-MS：294.7&296.6[M+H]+。

1HNMR(DMSO-d6) δ：7.72～7.70(d，J=6.56Hz，1H)，7.66(s，1H)，7.51～7.49(d，J=9.55Hz，1H)，7.15(s，1H)，2.15(s，3H)，1.88～1.83(m，1H)，0.84～0.79(m，2H)，0.73～0.70(m，2H)。

1.8 5-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲酸(7)

于50 mL三口瓶中，加入化合物(6)(2 g，6.78 mmol)、THF(国药集团化学试剂有限公司，30 mL)，置于0℃的冷阱中，并缓慢滴加环己基氯化镁(1.45 g，10.17 mmol)，反应1 h，向体系中缓缓通入CO2，反应两小时；加入水(20 mL)淬灭反应，用6 mol/L HCl的水溶液调节pH值到4.8，乙酸乙酯(20 mL*3)萃取，合并有机相，加入无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物在异丙醚中重结晶，过滤，烘干得白色固体(0.71 g，40.5%)。

mp 235～239℃。

ESI-MS：260.7[M+H]+。

1HNMR(DMSO-d6) δ：7.72～7.70(d，J=6.64Hz，1H)，7.66(s，1H)，7.51～7.49(d，J=9.44Hz，1H)，7.15(s，1H)，2.15(s，3H)，1.88～1.83(m，1H)，0.84～0.80(m，2H)，0.73～0.70(m，2H)。

1.9 5-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲酸盐酸盐(8)

于50 mL单口瓶中，加入化合物(7)(0.5 g，1.92 mmol)、二氯甲烷(15 mL)，搅拌均匀，逐滴加入12 mol/L HCl至固体全部溶解后，停止滴加，室温继续反应1 h。减压除去溶剂，40℃烘干得白色固体(0.55，97.0%)。

mp 248～252℃。

ESI-MS：261.0[M+H]+。

1HNMR(DMSO-d6) δ：9.21(s，1H)，8.02～8.01(d，J=6.71Hz，1H)，7.73(s，1H)，7.57～7.55(d，J=11.16Hz，1H)，2.28(s，3H)，2.07～2.01(m，1H)，1.08～1.04(m，2H)，0.89～0.86(m，2H)。

1.10 Selonsertib(1)

将化合物(8)(0.3 g，1.01 mmol)加入二氯甲烷(20 mL)中，搅拌均匀，氮气氛围下，缓慢滴入草酰氯(国药集团化学试剂有限公司，0.115 mL，1.318 mmol)，然后加入N，N-二甲基甲酰胺(0.01 mL，0.145 mmol)。室温反应2 h，减压除去溶剂，并将溶剂替换成二氯甲烷，在氮气环境下快速加入化合物12(0.23 g，1.11 mmol)和4-二甲氨基吡啶(上海阿拉丁生化科技股份有限公司，0.124 g，1.01 mmol)，于室温反应2 h。加入饱和NaHCO3水溶液(10ml)继续搅拌15 min。分离有机层，并用二氯甲烷(20 mL*1)洗涤水层，合并有机层；无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩于硅胶板分离得白色固体(0.15 g，34.3%)。

mp 195～199℃。

ESI-MS(m/z)：446.0[M+H]+。

1HNMR(DMSO-d6) δ：10.94(s，1H)，8.88(s，1H)，8.22～8.20(d，J=8.17Hz，1H)，8.07～8.04(t，J=8.15Hz，1H)，7.92～7.91(d，J=7.73Hz，1H)，7.72(s，1H)，7.68～7.67(d，J=6.46Hz，1H)，7.51～7.49(d，J=10.67Hz，1H)，7.20(s，1H)，5.70～5.65(m，J=6.7Hz，1H)，2.27(s，3H)，1.90～1.85(m，1H)，1.50～1.45(d，J=6.7Hz，6H)，0.84-0.81(m，2H)，0.74～0.71(m，2H)。