RUNX3和p53在结直肠锯齿状病变及结直肠癌组织中的表达及意义

赵巍 李琳 张肖洁 何英 蒋萍 龙培滨 柳平平 王丹丹

[摘要]目的 探讨RUNX3和p53在结直肠锯齿状病变及结直肠癌组织中的表达及意义。方法 选择2012年1月～2018年1月我院病理科确诊的262例结直肠锯齿状病变，其中增生性息肉（HP）87例，广基锯齿状息肉/腺瘤（SSA/P）96例，传统锯齿状腺瘤（TSA）79例;另选取60例正常肠黏膜标本以及60例结直肠癌（CRC）标本。通过免疫组化染色对各标本中RUNX3和p53的表达进行分析和评价。结果 RUNX3阳性表达率在正常肠黏膜、HP、SSA/P、TSA、CRC中逐渐降低，在SSA/P、TSA及CRC中明显降低;SSA/P、TSA、CRC与正常肠黏膜及HP的RUNX3阳性率比较，差异有统计学意义（P<0.05）。p53阳性表达率在正常肠黏膜、HP、SSA/P、TSA、CRC中逐渐升高，在SSA/P、TSA及CRC中明显升高;SSA/P、TSA、CRC与正常肠黏膜及HP的p53阳性率比较，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 RUNX3和p53在锯齿状病变到CRC的发生过程中起作用，两者可能是促进锯齿状腺瘤恶变的危险因素，对锯齿状腺瘤的患者预测CRC的发生具有一定的临床价值。

[关键词]RUNX3;p53;结直肠锯齿状病变;免疫组化

[中图分类号] R734.2          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-4721（2019）7（b）-0040-03

[Abstract] Objective To investigate the expression and significance of RUNX3 and p53 in colorectal serrated lesions and colorectal cancer. Methods A total of 262 specimens of colorectal serrated lesions diagnosed in the pathology department of our hospital from January 2012 to January 2018 were selected， including 87 cases of hyperplastic polyps （HP）， 96 cases of sessile serrated adenoma/polyp （SSA/P）， and 79 cases of traditional serrated adenoma （TSA）. Another 60 normal intestinal mucosa and 60 colorectal cancer （CRC） specimens were selected. The expression of RUNX3 and p53 in each specimen was analyzed and evaluated by immunohistochemical staining. Results The positive expression rate of RUNX3 gradually decreased in normal intestinal mucosa， HP， SSA/P， TSA， CRC， and significantly decreased in SSA/P， TSA and CRC. The positive rate of RUNX3 between SSA/P， TSA， CRC and normal intestinal mucosa， HP was statistically significant （P<0.05）. The positive expression rate of p53 increased gradually in normal intestinal mucosa， HP， SSA/P， TSA， CRC， and increased significantly in SSA/P， TSA and CRC. The positive rate of p53 between SSA/P， TSA， CRC and normal intestinal mucosa， HP was statistically significant （P<0.05）. Conclusion RUNX3 and p53 play the roles in the occurrence of serrated lesions to CRC. They may be the risk factors of the progress of serrated adenoma to adenocarcinoma. The detection of RUNX3 and p53 in serrated adenoma patients can help to predict the occurrence of CRC.

[Key words] RUNX3; p53; Colorectal serrated lesion; Immunohistochemistry

結直肠癌（colorectal cancer，CRC）是我国最常见的恶性肿瘤之一。国外有研究显示大部分的CRC是由“腺瘤-癌”的经典途径发展而来，约35%的CRC是由锯齿状途径发展而来[1]。锯齿状腺瘤（serrated adenoma，SA）的恶变率较高，发展迅速，因此引起人们的广泛关注。WHO（2010）消化系统肿瘤新分类把锯齿状病变分为4类[2]：增生性息肉（hyperplastic polyp，HP）、广基锯齿状息肉/腺瘤（sessile serrated adenoma/polyp，SSA/P）、传统锯齿状腺瘤（traditional serrated adenoma，TSA）、锯齿状腺癌（serrated adenocarcinoma，SAC）。这些病变经历了多个阶段，有多种因素及多个基因共同参与，引起基因学及多种细胞信号转导通路的异常，最终导致锯齿状病变发展为CRC[3-7]。

RUNX3（runt-related transcription factor 3）是一种抑癌基因，国外研究显示[7]，其在人类肠道肿瘤中表达异常。RUNX3能指导TGF-β信号通路过程，通过抑制细胞增生、促进细胞凋亡，在CRC的发生发展过程中扮演着重要角色。p53基因是另一种抑癌基因，其能维持细胞的正常增殖，当发生突变时，抑制癌细胞的功能就会丧失，从而导致细胞出现恶性转化最终发展为CRC。本研究旨在探讨RUNX3和p53在结直肠锯齿状病变及CRC中的表达情况，为CRC的预防提供临床依据，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

收集2012年1月～2018年1月我院病理科確诊为息肉的2814例标本，进行回顾性阅片。根据WHO（2010）消化系统肿瘤分类标准，由3名病理科医师从上述标本中筛选出锯齿状病变262例，其中HP 87例，SSA/P 96例，TSA 79例。另选取正常肠黏膜及CRC各60例，进行免疫组化染色。HP病理诊断标准[8]：①膨胀细长的隐窝，表浅1/3～1/2为锯齿状结构，基底1/2为非锯齿状结构;②细胞核小并且一致，细胞形态规整，靠近基底侧排列规则;③被覆成熟的、结构正常的柱状细胞及杯状上皮细胞。SSA/P病理诊断标准[9]：①锯齿状隐窝结构明显异常，腺体扭曲扩张;隐窝基底部呈分枝状、L型或倒置T型;②多累及下1/3隐窝，上皮/间质>50%，底部的隐窝可见成熟的杯状细胞;③整个隐窝扭曲变形，增殖区位于隐窝侧壁，呈不对称分布。TSA病理诊断标准[10]：①腺体呈明显弥漫的锯齿状轮廓，具有明显异型增生，细胞质呈弥漫嗜酸性;②可见异位、扩张的隐窝。排除标准：病理切片不完整或不能完全符合上述诊断标准。本研究经医院医学伦理委员会批准，符合医学伦理学规定。

1.2主要试剂

RUNX3抗体购于日本MBL公司;p53抗体购于北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3方法

标本经4%中性甲醛固定，常规石蜡包埋，免疫组化染色采用Envision法，实验步骤按照试剂盒说明书进行，以PBS代替一抗设阴性对照，已知阳性结直肠腺体组织为阳性。

1.4评价标准

RUNX3和p53的阳性表达均定位于细胞核。3名病理科医师负责判读各免疫组化结果，阳性的标准定为棕褐色、棕黄色及黄色。以组织切片中细胞的染色程度和阳性细胞的比率进行评分。规定细胞染色用分数计算，细胞核的颜色越深则分数越高，棕褐色为3分，棕黄色为2分，黄色为1分，未着色为0分。在400倍显微镜下，随机观察5个高倍视野，每个高倍视野中计数100个阳性细胞，若阳性细胞所占比例为0%～9%，计为0分;10%～25%，计为1分，26%～50%，计为2分，51%～75%，计为3分，76%～100%，计为4分。将两种评分的结果相加，若最终得分为1～3分判定为阴性，4～7分判定为阳性。

1.5统计学方法

采用SPSS 22.0统计学软件进行数据分析，计数资料采用率表示，组间比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1 RUNX3在正常肠黏膜、锯齿状病变及CRC组织中的表达

RUNX3的阳性表达定位于细胞核。RUNX3在正常肠黏膜中阳性率为80.0%（48/60）;在锯齿状病变中阳性率降低，HP、SSA/P、TSA中RUNX3阳性率分别为74.7%（65/87）、49.0%（47/96）、40.5%（32/79）;在CRC中RUNX3表达明显减少，仅为35.0%（21/60）。RUNX3阳性表达率在正常肠黏膜、HP、SSA/P、TSA、CRC中逐渐降低，在SSA/P、TSA及CRC中明显降低。SSA/P、TSA、CRC与正常肠黏膜及HP的RUNX3阳性率比较，差异有统计学意义（P<0.05）;HP与正常肠黏膜的RUNX3阳性率比较，差异无统计学意义（P>0.05）;SSA/P、TSA与CRC的RUNX3阳性率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。

2.2 p53在正常肠黏膜、锯齿状病变及CRC组织中的表达

p53的阳性表达也定位于细胞核。p53在正常肠黏膜中阳性率较低，为21.7%（13/60）;在锯齿状病变中阳性率升高，HP、SSA/P、TSA中p53阳性率分别为24.1%（21/87）、47.9%（46/96）、51.9%（41/79）;在CRC中，p53表达明显升高，为60.0%（36/60）。p53阳性表达率在正常肠黏膜、HP、SSA/P、TSA、CRC中逐渐升高，在SSA/P、TSA及CRC中明显升高。SSA/P、TSA、CRC与正常肠黏膜及HP的p53阳性率比较，差异有统计学意义（P<0.05）;HP与正常肠黏膜的p53阳性率比较，差异无统计学意义（P>0.05）;SSA/P、TSA与CRC的p53阳性率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。

3讨论

CRC是严重危害人类健康的恶性肿瘤，发病率位居恶性肿瘤的第3位，死亡率位居第4位[11]。目前我国的CRC发病率呈现上升趋势[12]。研究表明，CRC发病率增长的主要原因之一是由HP转变为SSA，最终发展为SAC[3]，该通路涉及一系列基因学及多种细胞信号通路的异常。

RUNX3基因是近些年来发现的一种抑癌基因，其定位于人类染色体1号短臂1p36.1，在转化生长因子β（transforming growth factor beta，TGF-β）介导的细胞周期调控、细胞分化和细胞凋亡过程中发挥着重要作用[13-14]。Fainaru等[15]研究发现，在CRC的分子靶点中，TGF-β信号转导通路及其下游的信号分子是结直肠腺瘤转变为CRC的主要原因。RUNX3基因是一个调节TGF-β信号转导通路下游的重要因子，极可能是TGF-β信号转导通路的靶点，一旦RUNX3出现异常，就会引起TGF-β信号通路异常发生肿瘤[16]。Subramaniam等[17]研究发现，HP、TSA中RUNX3的阳性表达与正常肠组织及管状腺瘤相比有所下降。本研究结果显示，HP、SSA/P及TSA中RUNX3阳性表达率分别为74.7%、49.0%、40.5%，在CRC中仅有35.0%。SSA/P、TSA及CRC中RUNX3阳性表达率明显低于正常肠黏膜及HP，差异有统计学意义（P<0.05），提示RUNX3基因作为TGF-β细胞信号转导通路下游的一个重要因子，其参与了TGF-β对上皮细胞生长的负性调控，RUNX3基因的表达下调可能是锯齿状病变发展为CRC的原因之一。

p53基因是一种抑癌基因，定位于17号染色体的短臂上。p53基因的主要功能是监视细胞基因组的完整性，维持细胞的正常增殖，一旦细胞的基因被破坏，p53就能修复被破坏的基因。但是，如果p53自身发生突变，它的这种抑制癌细胞的功能就会丧失，从而导致细胞发生恶性转化[18-19]。p53分为野生型和突变型，由于野生型p53的半衰期非常短，用免疫组化的方法无法检测，而突变型p53的半衰期比较长，因此，本研究检测的是突变型的p53[20]。本研究结果显示，突变的p53在正常肠黏膜中表达阳性率为21.7%，而SSA/P及TSA的阳性表达率逐渐升高，达47.9%、51.9%，在CRC中陽性率达到60.0%，提示突变型p53可能发生在CRC的早期，与CRC的发生相关。

综上所述，RUNX3和p53在结直肠锯齿状病变到CRC的发生过程中起作用，两者可能是促进SA恶变的危险因素，对SA的患者预测CRC的发生具有一定的临床价值。

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（收稿日期：2019-02-19  本文编辑：任秀兰）