白芍水提物对牙周炎小鼠Th1/Th2极化的影响

李月梅 赵林 邝亦元 谢美玲 宋宁(通信作者)

518026深圳市儿童医院口腔科，广东深圳

白芍是芍药的干燥根，是我国著名的传统中药之一，临床上广泛用于类风湿性关节炎、肾病综合征等免疫性疾病的治疗。牙周病是口腔最常见的疾病之一，已经明确的是在牙周炎发病过程中，机体的免疫应答失衡，不仅加重了牙周组织的损伤，更会引起一系列的全身性疾病[1]。本研究思路基于中药白芍可介导抗炎及免疫调节，通过对小鼠血清抗体IgG2a 和IgG1 水平变化进行检测，从细胞免疫学角度反映Th1/Th2 偏移的变化[2]。

资料与方法

材料：清洁级12 周雄性昆明小鼠；白芍水提物(白芍水煮后干燥)；辣根过氧化物酶标记兔抗鼠IgG1 和IgG2a 抗体；脑心浸液(BHI)血琼脂培养基。

方法：分组：小鼠48只，体重(30±2)g。按随机数字表法分为正常对照组、牙周炎组、白芍治疗组各16 只。用5-0非吸收医用丝线嵌入第1 磨牙颈部，于近中牙龈处缝合结扎，制作小鼠实验性牙周炎模型。临床收集慢性牙周炎患者病变区龈下菌斑，并培养制作菌悬液(菌悬液为1.0×108CFU/mL)；在每只小鼠的结扎部位滴加菌悬液0.2 mL，每48 h 追加1 次，共追加3 次。4 周后牙齿松动，深牙周袋会出现在小鼠第1 磨牙牙周，牙槽骨吸收；小鼠牙周炎模型被成功建立。对照组无特殊处置，正常饮食。第5周起采用蒸馏水0.2 mL/d对对照组和牙周炎组进行灌胃；白芍治疗组每天用0.6 g/kg 白芍水提物混悬液0.2 mL 灌胃。分别在第4、6、8、10 周对各组进行分批处死4只小鼠。

观察指标：小鼠静脉血收集采用摘眼球法，收集血清，保存于-20℃冰箱待测。ELISA法检测血清抗体IgG1和IgG2a水平。用Bio-Rad 550 型酶标仪测量OD450值。

统计学方法：采用SPSS 13.0 统计学软件分析数据。各组方差齐时，多个样本均数间的两两比较采用最小显著法(LSD)检验；方差不齐时用Tamhane's T2法；多样本比较用完全随机设计的单因素方差分析(One-Way ANOVA)；P＜0.05为差异有统计学意义。

表1 各组小鼠血清IgG1水平(OD450值)变化比较(±s)

表1 各组小鼠血清IgG1水平(OD450值)变化比较(±s)

组别n4周(未治疗)6周(治疗2周)8周(治疗4周)10周(治疗6周)对照组40.392±0.0050.398±0.0040.399±0.0080.401±0.011牙周炎组40.259±0.0040.256±0.0050.245±0.0070.242±0.009白芍治疗组40.260±0.0050.287±0.0050.303±0.0580.336±0.006

表2 各组小鼠血清IgG2a水平(OD450值)变化比较(±s)

表2 各组小鼠血清IgG2a水平(OD450值)变化比较(±s)

组别n4周(未治疗)6周(治疗2周)8周(治疗4周)10周(治疗6周)对照组40.607±0.0210.614±0.0050.608±0.0090.616±0.005牙周炎组41.208±0.0141.353±0.0101.414±0.0151.449±0.013白芍治疗组41.223±0.0061.023±0.0320.851±0.0320.790±0.009

结 果

小鼠血清IgG1 水平变化：牙周炎组和白芍治疗组IgG1 水平在各时间点明显低于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)；白芍治疗组IgG1 水平在治疗后2、4 和6 周时明显升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

小鼠血清IgG2a 水平变化：牙周炎组和白芍治疗组IgG2a 水平在各时间点明显高于对照组，差异有统计学意义(P＜0.01)；白芍治疗组IgG2a 水平在治疗后2、4和6周时明显下降，差异有统计学意义(P＜0.01)，见表2。

讨 论

Th 细胞可分为2 个不同极向性的亚群。其中Th1 细胞亚群可以诱导产生抗体IgG2a，Th2 细胞亚群可以刺激产生抗体IgG1。实验结果显示，牙周炎组IgG2a水平在实验的各时间点上明显高于对照组，并逐渐升高，提示Th1型细胞因子的作用得到强化；而IgG1的水平逐渐降低，提示Th2型细胞因子的作用受到抑制。

常景芝等观察到白芍总苷能降低对大鼠血清中炎性细胞因子IL-1 β、TNF-α等水平和胶原性关节炎足爪组织基质金属蛋白9 表达，可明显抑制大鼠胶原性关节炎。但Zhao 等用TGP 对自身免疫性疾病系统性红斑狼疮患者进行治疗时观察到，TGP 能显著升高Th1 型细胞因子IFN-γ和IL-2 的水平，即促进Th1 型细胞因子分泌，缓解了患者的病情。实验可知，用药后2、4、6 周后，白芍水提提取物针对牙周炎有很好的治疗作用。