响应面法优化米炒党参炮制工艺研究

胡金梅 张姚飞 易珍奎 冯晓琴 杨正兵（通讯作者）

（重庆市永川区中医院 重庆 402160）

党参收载于《中国药典》2015年版[1]。其主要含苷类、甾体类、糖类、生物碱等[2]。有健脾益肺，养血生津之功效，生品以益气生津为主，米炒后益气健脾作用增强[3]。基于米炒党参的炮制工艺尚没有可量化的工艺参数，本研究旨在对其炮制工艺进行优化。

1.材料

1.1 仪器

Waters e2695-2489高效液相色谱仪；紫外分光光度计（UV-2600，岛津）；电子天平（万分子一，十万分之一，赛多利斯）；超声波清洗器（固特超声）。

1.2 药材与试剂

党参炔苷（111732-201607）、D-无水葡萄糖（110833-201707）、5-羟甲基糠醛（5-HMF，111626-201610），均购自中国食品药品检定研究院。乙腈、甲醇为为色谱纯，TEDIA；其他试剂均为分析纯。

2.方法和结果

2.1 党参炔苷与5-HMF的测定方法

Ultimate® AQ-C18（250×4.6mm，5μm），流动相：乙腈-水（27:73）；流速1.0ml/min；柱温30℃；进样体积10μl；检测波长267nm。结果供试品色谱中党参炔苷和5-HMF分离效果较好。

2.2 多糖的含量测定方法

2.2.1 显色及测定方法 移取溶液适量于具塞试管中，加水至2ml，加入蒽酮试液6ml，塞紧试管，摇匀，沸水浴10分钟，取出，冷却至室温，摇匀，625nm处测定吸光度。

2.2.2 对照品溶液 取无水葡萄糖适量，精密称定，加水溶解。

2.2.3 供试品制备方法 取党参粉末0.2g，加水40ml，回流提取2小时，取出放冷，滤过，取续滤液20ml，加乙醇使含醇量达75%，静置12小时，抽滤，沉淀加水溶解至5ml。

2.3 米炒党参炮制工艺研究

2.3.1 工艺的优化 以炮制温度、炮制时间、辅料用量为自变量，以党参炔苷的量（Y1）、5-HMF的量（Y2）、多糖的量（Y3）为评价指标，以综合评分（Y）为响应值进行设计。Y=（Y1+Y2）*50+Y3*0.5。实验设计及结果见表1和表2。

表1 实验因素水平

表2 实验设计及结果

2.3.2 模型拟合及方差分析

回归模型方程为：Y=49.11840+1.00154A-2.77109B-4.08988C-0.001952AB-0.003050AC+0.011238BC-0.003382A2+0.047317B2+0.19 4387C2，r=0.9026，该模型拟合度好，可用于炮制工艺的分析和预测。方差分析显示对炮制工艺的影响次序为：炮制时间＞炮制温度＞辅料用量，其中炮制时间影响最显著。

表3 方差分析

2.3.3 响应面优化与预测 利用Design-Expert 11软件绘制炮制温度、炮制时间、辅料用量对米炒党参的响应面图和二维等高线图。

由图可知，AB间交互作用显著。以Y最大为目标优化最佳炮制工艺，得A=138，B=3，C=20，即取党参药材，加20%的米，置138℃炒制3分钟。

2.3.4 验证试验：结果见表4。

表4 验证试验结果

由上表可知，优化出的最佳工艺综合评分较高，平行性较好。

3.讨论

党参米炒益气健脾作用增强，党参炔苷和多糖的量有所下降，而5-HMF有所增加，有学者推测5-HMF是健脾止泻的有效成分，笔者认为党参炔苷和党参多糖与健脾止泻的量效关系有必要进一步研究。