参菖益智胶囊的质量研究

张德珂，李 季，李 ，曲远均

（山东中医药大学附属医院，山东 济南 250014）

老年痴呆一种起病隐匿的进行性发展的神经系统退行性疾病，以记忆力下降、认知功能障碍、意识障碍、生活自理能力及社会活动能力下降甚至丧失为特征[1]。中医学认为本虚表实是老年痴呆病的重要发病机制之一，其次是痰瘀痹阻、肾精亏虚及心肾不交，治疗以滋补、交通心肾、疏肝解郁为大法[2]，治疗时大多采用补虚、清热、安神、活血化瘀、平肝息风、化痰止咳平喘之药[3]。用于治疗老年痴呆的中药材大多具有活血化瘀，补虚，清热等功效[4]。另外灸法[5]，食物疗法[6]等非药物的中医治疗手段也经常被应用。

参菖益智胶囊以开窍宁神、益智健脑为治则，由人参与石菖蒲两味中药组成；人参主补益，石菖蒲主开窍，二者相辅相成，临床疗效确切。未制定任何质量控制方法，为了保证药物质量和疗效，对复方中有效成分进行鉴别和含量测定。目前常用于中药及其制剂控制的方法包括薄层色谱法（TLC）、高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法和色谱质谱联用等[7]。本文对制剂中人参和石菖蒲进行TLC鉴别，对人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的含量进行HPLC测定，作为参菖益智胶囊质量控制的方法。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Aglient 1260型高效液相色谱仪；AV412电子天平；CP2250型分析天平；SHB-Ⅲ真空泵；LC-600B型数控超声波清洗机；XMTD-4000型电热恒温水浴锅。

1.2 材料与试药

人参皂苷Rg1对照品（含量91.7 %，批号：110703-201530），人参皂苷Re对照品（含量100 %，批号：110754-200421），人参皂苷Rb1对照品（含量100 %，批号：110704-200420），均购于中国食品药品检定研究院；参菖益智胶囊样品（自制，批号20171010，20171020，20171030）和阴性对照。甲醇，乙腈，磷酸为色谱纯，95 %乙醇为分析纯；水是娃哈哈纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司），其余试剂均为分析纯。

2 薄层色谱鉴别

2.1 人参的TLC鉴别

取本品内容物颗粒约5 g，加二氯甲烷40 ml，加热回流1 h，弃去二氯甲烷液，药渣挥干溶剂，加水饱和的正丁醇30 ml，超声处理30 min，吸取上清加3倍量的氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。取人参皂苷Rg1对照品，人参皂苷Re对照品及人参皂苷Rb1对照品，加甲醇制成每1 ml各约含2 mg混合溶液，作为混合对照品溶液。另取人参皂苷Rg1对照品，人参皂苷Re对照品及人参皂苷Rb1对照品，分别加甲醇制成每1 ml约含2 mg对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2015年版四部通则0502）试验，吸取上述5种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15:40:22:10）10 ℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10 %硫酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点显色清晰，见图1。

结果为在与混合对照品和对照品色谱相应位置上，供试品显相同颜色的斑点，且自制不含人参的阴性样品无干扰。

2.2 石菖蒲的TLC鉴别

取本品颗粒约5 g，加石油醚（60～90 ℃）20 ml，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加石油醚（60～90 ℃）1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取石菖蒲对照药材0.2 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2015年版四部通则0502）试验，吸取上述两种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯（4:1）为展开剂，展开，取出，晾干，放置约1 h，置紫外光灯（365 nm）下检视，见图2。

结果为在与对照药材色谱相应的位置上，供试品显相同颜色的荧光斑点，且自制不含石菖蒲的阴性样品无干扰。

图1 处方中人参的TLC鉴别

图2 处方中石菖蒲的TLC鉴别

3 含量测定[8-11]

3.1 色谱条件

Agilent TC-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm)，以乙腈（A）-0.1 %磷酸水溶液（B）为流动相，梯度洗脱0～35 min：19 %A（81 %B）；35～55 min：19 % A→29 % A（81 % B→71 % B）；55～70 min：29 % A（71 % B）；70～100 min：29 % A→40 %A（71 % B→60 % B）；流速为1.3 ml/min；柱温：30 ℃；检测波长：203 nm；进样量：10 μl。

3.2 溶液配制

对照品溶液：分别取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml各约含200 μg的溶液，即得。

供试品溶液：取本品颗粒5 g，精密称定，置索氏提取器中，加二氯甲烷加热回流3 h，弃去二氯甲烷液，药渣挥干溶剂，移入250 ml圆底烧瓶，精密加入蒸馏水100 ml，回流加热1 h，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液25 ml，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10 ml量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

阴性对照溶液：按处方比例，不加人参药材，制得缺人参的模拟制剂，按上述方法制备。

3.3 系统适应性试验

精密量取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照液各10 μl，注入高效液相色谱仪，见图3。结果供试样品在混合对照品色谱峰相应的位置有相应色谱峰出现，阴性样品无干扰。

图3 参菖益智胶囊高效液相色谱图

3.4 线性试验

精密吸取混合对照品溶液2，4，6，8，10，12 μl注入高效液相色谱仪中进行分析，记录峰面积。以峰面积Y对进样量X（μg）进行线性回归，见表1，结果表明各成分在考察浓度范围内线性良好。

表1 人参皂苷Rg1、Re、Rb1的回归方程、线性范围

3.5 精密度试验

仪器精密度实验：精密吸取混合对照品溶液，按重复进样6次，分别测定人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的峰面积。结果：人参皂苷Rg1的平均峰面积为623.30，RSD=0.11 %；人参皂苷Re的平均峰面积为545.48，RSD=0.16 %；人参皂苷Rb1的平均峰面积为508.32；RSD=0.12 %；表明仪器的精密度良好。

重复性试验：取同一批次样品（批号：20171010）适量，按3.2项下供试品溶液制备方法，平行制备6份供试品溶液进行测定，采用外标法以峰面积计算含量。结果：人参皂苷Rg1的含量平均值为0.16 %，RSD=0.80 %，人参皂苷Re的含量平均值为0.15 %，RSD=0.84 %；人参皂苷Rb1的含量平均值为0.16 %，RSD=1.78 %；表明本法重复性良好。

中间精密度试验：取同一批次样品（批号：20171010）适量，按3.2项下供试品溶液制备方法，平行制备6份供试品溶液，3名人员、2台仪器、不同日期按确定的方法进行测定，采用外标法以峰面积分别计算人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的含量。结果：人参皂苷Rg1的含量平均值为0.15 %，RSD=0.90 %，人参皂苷Re的含量平均值为0.16 %，RSD=0.92 %；人参皂苷Rb1的含量平均值为0.16 %，RSD=1.48 %；结果表明本方法的中间精密度良好。

3.6 稳定性试验

取同一批次样品（批号：20171010）适量，按制备供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，12，24 h进样，记录峰面积，考察供试品溶液稳定性。结果：人参皂苷Rg1的峰面积平均值为613.74，RSD=0.10%；人参皂苷Re的峰面积平均值为423.30，RSD=0.19 %；人参皂苷Rb1的峰面积平均值为498.02，RSD=0.10 %；表明供试品溶液在24 h稳定。

3.7 加样回收率试验

取本品（批号：20171010，已知样品中人参皂苷Rg1的含量为1.58 mg/g，折0.47 mg/粒；人参皂苷Re的含量为1.48 mg/g，折0.44 mg/粒；人参皂苷Rb1的含量为1.58 mg/g，折0.48 mg/粒）40粒，研细，取约1 g，精密称定，共6份，分别置索氏提取器中，加二氯甲烷加热回流3 h，弃去二氯甲烷液，药渣挥干溶剂，移入250 ml圆底烧瓶，各精密加入混合对照品溶液（Rg1的浓度为0.1586 mg/ml，Re的浓度为0.1506 mg/ml，Rb1的浓度为0.1602 mg/ml）10 ml，再精密加入蒸馏水90 ml，称定重量，按供试品制备方法制备。依法测定，结果见表2。

表2 人参皂苷Rg1、Re、Rb1加样回收率试验结果

Re 1 1.0024 1.480 1.506 3.001 101.02 102.10 1.76 2 1.0025 1.480 1.506 3.018 102.13 3 0.9982 1.473 1.506 3.036 103.76 4 1.0052 1.484 1.506 3.016 101.77 5 0.9994 1.475 1.506 3.047 104.41 6 1.0027 1.480 1.506 2.987 99.50 Rb1 1 1.0024 1.589 1.602 3.223 102.00 101.44 1.55 2 1.0025 1.589 1.602 3.206 100.94 3 0.9982 1.582 1.602 3.179 99.67 4 1.0052 1.593 1.602 3.256 103.80 5 0.9994 1.584 1.602 3.224 102.34 6 1.0027 1.589 1.602 3.190 99.91

结果表明，人参皂苷Rg1的平均回收率为100.48 %，RSD=1.79 %；人参皂苷Re的平均回收率为102.10 %，RSD=1.76 %；人参皂苷Rb1的平均回收率为101.44 %，RSD=1.55 %；表明方法准确度良好。

3.8 样品含量测定

取3批参菖益智胶囊内容物颗粒适量，按3.2项下配制供试品溶液和对照品溶液，并按3.1项下色谱条件进样测定，采用外标法以峰面积计算胶囊中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1的含量，结果见表3。

表3 样品含量测定结果

结果3批样品的含量范围分别是人参皂苷Rg1为0.47～0.48 mg/粒，人参皂苷Re为0.44～0.45 mg/粒，人参皂苷Rb1为0.48 mg/粒，考虑人参皂苷的质量差异，综合本制剂复方环境，暂定含量限度见表3。

4 结论与讨论

4.1 参照2015年版《中国药典》胶囊剂项下相关的规定，对3批样品进行了性状、水分、装量差异和崩解时限的检查，结果3批样品均符合规定。

4.2 建立了参菖益智胶囊成品中人参和石菖蒲两味药的薄层鉴别方法，结果供试品在与对照品或对照药材相应位置上，斑点均显示相同颜色，阴性对照无干扰，方法重复性良好。

4.3 采用高效液相色谱法测定参菖益智胶囊中3种人参皂苷的含量，人参皂苷的含量测定方法虽然已有大量报道，但是大多数都是单味药研究，复方中人参皂苷含量测定研究报道较少，通过查阅相关文献以及反复的实验探究，建立了参菖益智胶囊中人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rb1的含量测定方法。根据方法学考察表明该方法精密度、重复性、稳定性和加样回收率良好，以此方法对3批样品进行测定，结果3批样品中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1的含量不得少于0.40 mg/粒。结果表明，该方法简便、重现性好、灵敏度高、结果准确可靠，可用于参菖益智胶囊的质量控制。