青龙衣化学成分的研究

周媛媛，宋红娟，李 健，郭 爽，王 莹，高蕙蕊，刘 艳，刘雨新，张晓娟，付起凤

（1.黑龙江中医药大学药学院，黑龙江 哈尔滨 150040；2.哈尔滨市中医院，黑龙江 哈尔滨 150599；3.黑龙江中医药大学学术理论研究部，黑龙江 哈尔滨 150040；4.黑龙江中医药大学实验中心，黑龙江哈尔滨 150040）

青龙衣为胡桃科胡桃属植物核桃楸Juglans mαndshuricaMaxim 的未成熟外果皮。我国现有的胡桃属植物主要有8 种［1］，其中药用品种主要为核桃、核桃楸2 种。药材的枝、叶、树 皮、根 皮、坚果内隔、外果皮等部位均可入药［2］。其不仅具有补气益血、调燥化痰、益智健脑等保健功能，还具有治疗皮肤病、子宫脱垂、高血压、糖尿病等多种临床病症的作用［3-5］，尤其是该属植物显著的抗肿瘤作用已经成为医药领域的研究热点。目前研究报道表明青龙衣抗肿瘤作用尤为显著，且该资源每年以废物形式大量丢弃不仅污染环境，也不利于药用资源合理利用。本实验对青龙衣开展系统成分研究，从中分离得到14 个化合物，其中化合物1～5、7～8、10、12～14 为首次从青龙衣中分离得到。

1 材料

NE-1101 型旋转蒸发仪（日本东京理化株式会社）；AV-400 型超导核磁共振仪（美国Bruker 公司）；Q-TOF（ESI）高分辨质谱仪（美国Waters公司））；Sephadex LH-20（瑞 士Pharmacia 公司）；Anton Paar-MCP 600 旋光仪（奥地利Anton Paar 公司）；柱色谱硅胶（200～300 目）和薄层色谱硅胶（青岛海洋化工厂）；515-2414 半制备型高效液相色谱（美国Waters 公司）。用于半制备液相的试剂为色谱纯；其余均为分析纯。

青龙衣药材于2017 年7 月采自吉林省长白山地区，经黑龙江中医药大学药学院王振月教授鉴定为胡桃科植物核桃楸Juglαns mαndshuricαMaxim 的未成熟外果皮，标本（20170715）保存于黑龙江中医药大学中药化学教研室。

2 提取与分离

将阴干的青龙衣药材（10.0 kg）适当粉碎，以8 倍量95%乙醇溶液室温浸泡7 d，收集滤液，上述操作重复3 次，减压浓缩得到浸膏（695.5 g）。浸膏加适量蒸馏水分散后，二氯甲烷、乙酸乙酯及水饱和的正丁醇多次萃取，得到二氯甲烷萃取部位浸膏（270.2 g）、乙酸乙 酯萃取 部位浸 膏（180.6 g）。

取二氯甲烷组分，采用硅胶柱层析法以石油醚-乙酸乙酯（100∶0～0∶100）梯度洗脱，每一流份经薄层检识后相近者合并，共得到Fr.1～Fr.7。Fr.1 经硅胶柱色 谱，石油 醚-乙酸乙酯（100∶0～20∶1）系统进行梯度洗脱，重结晶，分离得化合物14（14.2 mg）、13（10.5 mg）。Fr.3经硅胶柱色谱，石油醚-乙酸乙酯（50∶0～10∶1）梯度洗脱，分离得化合物11（5.8 mg）、10（13.6 mg）。Fr.5 经硅胶 柱色谱，石油醚-乙酸乙 酯（20∶1～0∶1）梯度洗脱，Sephadex LH-20（甲醇-水=80∶20），分离得化合物4（12.6 mg）。

取乙酸乙酯组分，通过硅胶柱层析法以二氯甲烷-甲醇（100∶0～0∶100）梯度洗脱，每一流份经薄层检识后相近者合并，共得到Fr.1～Fr.5。Fr.1 经硅胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇（50∶1～15∶1）梯度洗脱，分离得化合物12（13.1 mg）、9（8.9 mg）、8（10.2 mg）、7（6.7 mg）。Fr.2 经硅胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇（30∶1～20∶1）梯度洗脱，Sephadex LH-20（甲醇），分离得化合物6（14.3 mg）、5（13.2 mg）。Fr.4 经硅胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇（20∶1～5∶1）梯度洗脱，分离得化合物3（8.2 mg）、2（9.5 mg）。Fr.5 经硅胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇（15∶1～0∶1）梯度洗脱，结合反相ODS 柱色谱（甲醇-水=60∶40）和半制备型HPLC（甲醇-水=50∶50）分离得化合物1（4.5 mg）。

3 结构鉴定

化合物9：淡黄色油状物质。HR-ESI-MSm/z：327.157 8 ［M+H］+，分子式 C20H22O4。IH-NMR（CDCl3，400 MHz）δ：7.08（2H，d，J=8.6 Hz，H-2′，H-6′），6.81（1H，d，J=8.0 Hz，H-5″），6.78（1H，d，J=16.6 Hz，H-5），6.71（2H，d，J=8.6 Hz，H-3′，H-5′），6.64（1H，brs，H-2″），6.63（1H，brd，J=8.0 Hz，H-6″），6.06（1H，d，J=16.6 Hz，H-4），5.82（1H，brs，4′-OH），5.57（1H，brs，4″-OH），3.82（3H，s，3-OCH3），2.83（2H，t，J=7.2 Hz，H-1），2.82（2H，t，J=7.2 Hz，H-2），2.66（2H，m，H-7），2.50（2H，m，H-6）；13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ：200.3（C-3），153.6（C-4′），146.8（C-5），146.3（C-3″），143.4（C-4″），132.6（C-1′），132.6（C-1″），130.8（C-4），129.3（C-2′，C-6′），120.7（C-6″），115.5（C-3′，C-5′），114.2（C-5″），110.7（C-2″），56.1（3″-OCH3），42.1（C-2），34.8（C-6），34.2（C-7），29.6（C-1）。以上数据与文献［13］基本一致，故鉴定为1-（4′-羟基苯 基）-7-（3″-甲基苯 基-4″-羟基苯基）-4-烯-3-庚酮。

4 讨论

二芳基庚烷类化合物是2 个不同程度氧化或取代的芳香环，被一具有7 个碳原子的氧化脂肪链通过1，7-位连接形成的一类化合物的总称。由于其特殊的结构特征和抗肿瘤的药理活性较为显著，近年来受到国内外学者的广泛关注［17-18］。目前为止，课题组在青龙衣中发现的二芳基庚烷类多为环醚型（化合物1、4、10～11），除此之外还有直线型（化合物5～7、9、12）和大环联苯型（化合物8、12），以期为进一步开展构效关系以及抗肿瘤药理活性研究奠定了药效物质基础。