ALDH1和PLK4蛋白表达水平变化与卵巢肿瘤良恶性的关系

(武汉大学人民医院妇科，湖北 武汉 430060)

部分地区的流行病学研究发现，卵巢癌的发病率可超过485/10万人[1]，在合并有遗传易感高危因素的人群中，卵巢癌的发病率可进一步的上升。临床上卵巢癌的发生，能够导致患者近期高肿瘤负荷的发生，并能够增加患者远期病死的风险[2]。在研究卵巢癌的发病机理的过程中，发现细胞因子的变化，或者肿瘤相关蛋白的改变，能够通过影响到卵巢上皮细胞的异常分裂、增殖等过程，进而促进卵巢癌的发生。乙醛脱氢酶(ALDH1)能够通过其对于卵巢上皮细胞转录基因的激活，从而促进上皮细胞早期异常持续增殖，并能够降低癌细胞的错配修复能力[3]；Polo样蛋白激酶4(PLK4)是着丝粒调节蛋白，其能够通过对于着丝粒的调控，增加非整倍体发生的风险，最终促进癌细胞的发生和肿瘤的进展[4]。为了揭示ALDH1和PLK4的表达与卵巢癌的病情关系，从而为临床上卵巢癌的诊疗提供理论方面的参考，本次研究选取2017年1月至2018年1月本院收集的卵巢癌组织标本100例，探讨了ALDH1和PLK4的表达及其与卵巢癌的病情关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取本院经病理学检查确诊的卵巢癌组织100例、卵巢良性肿瘤组织200例(良性组)，标本收集时间2017年1月至2018年1月。

卵巢癌，年龄32～65岁，平均53.8±6.6岁，参考国际妇产联盟分期(FIGO)标准：其中Ⅰ期卵巢癌16例、Ⅱ期卵巢癌30例、Ⅲ期卵巢癌38例、Ⅳ期卵巢癌16例；根据病学分化程度：高、中、低分化分别为27例、35例、35例；黏液性囊腺癌73例、其他23例。良性组，年龄29～65岁，平均51.5±8.0岁，浆液性囊腺瘤78例、粘液性囊腺瘤68例、成熟性囊性畸胎瘤34例、其他类型20例。两组年龄比较均衡，具有可比性(P>0.05)。

纳入标准：(1)卵巢恶性肿瘤的诊断依据病理学检查结果进行判断，参考《外科学》人卫第八版中的标准[5]；(2)既往无放化疗及免疫学治疗病史；(3)两组患者的各项资料收集完善，可进行统计学分析；(4)研究方案涉及患者隐私等因素均予以保密，并申请医学伦理委员会批准。

排除标准：(1)合并其他部位恶性肿瘤；(2)类风湿、免疫学疾病患者；(3)肝肾功能疾病患者；(4)合并其他系统的重大疾病。

1.2 免疫组化染色法

石蜡包埋，连续性切片厚度3 μm，60 ℃烤片60 min，常规脱水后，采用EDTA进行抗原修复，加入10ul蒸馏水，加入10%过氧化氢5il，室温下孵育30min,磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤3次*3 min，加入ALDH1和PLK4蛋白的单克隆抗体(1∶1 000购自罗氏检测公司)，37 ℃孵育60 min，PBS洗涤3次*3 min，加入HRP标记的ALDH1和PLK4蛋白二抗(1∶2 000 购自罗氏公司)，37 ℃孵育20 min，PBS洗涤3次*3 min，加入DAB后，PBS冲洗和复染，脱水后在显微镜下进行观察。

1.3 SP染色结果评价标准[6]

PLK4表达于细胞核，ALDH1表达于细胞浆，阳性染色分别为黄色、棕黄色、褐色或者黑色，(1)根据染色强度评分：无色(0分)、淡黄色(1分)、棕黄色(2分)、褐色或者黑色(3分)；(2)依据阳性细胞所占的比例：比例≤10%(1分)、占比范围11%～50%(2分)、占比范围51%～75%(3分)、占比范围>75%(4分)，染色强度积分与阳性细胞占比积分之乘积<3分为阴性、≥3分为阳性。

1.4 统计学方法

采用SPSS16.0版本软件包进行分析统计。年龄等计量资料采用均数±标准差表示，比较分析采用t检验或单因素方差分析法；计数资料用百分率(%)表示，分析采用χ2检验；以P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 卵巢癌组织与卵巢良性肿瘤组织中的ALDH1和PLK4蛋白阳性表达率比较

卵巢癌组织中的ALDH1和PLK4蛋白阳性表达率分别为65.00%、70.00%，良性组卵巢癌组织中的ALDH1和PLK4蛋白阳性表达率分别为21.50%、19.50%，两组ALDH1和PLK4蛋白阳性表达率差异具有统计学意义(P<0.05)；(表1、图1)。

表1 卵巢癌组织与卵巢良性肿瘤组织中的ALDH1和PLK4蛋白阳性表达率比较 (例，%)

图1 ALDH1表达的SP染色结果(SP 200×)A为卵巢良性肿瘤组织、B为卵巢癌组织

图2 PLK4表达的SP染色结果(SP 200×)A为卵巢良性肿瘤组织、B为卵巢癌组织

2.2 ALDH1和PLK4蛋白阳性表达在不同病理学特征卵巢癌组织中的表达差异

卵巢癌组织中的ALDH1和PLK4蛋白在不同FIGO分期、不同的组织分化程度、是否发生淋巴结转移的组织中表达差异具有统计学意义(P<0.05)；见表2、表3。

表2 ALDH1蛋白阳性表达在不同病理学特征卵巢癌组织中的表达差异

3 讨 论

异常病理状态下卵巢生发上皮细胞的持续性增殖，能够显著促进卵巢癌的发生，在游离性激素受体敏感性上升或者雌孕激素波动明显的群体中，卵巢癌的发生风险可进一步的上升[6]。临床上的观察发现[7-8]，卵巢癌患者的5年生存率不超过35%，不同措施治疗后卵巢癌患者的病情进展率仍然超过了25%。现阶段缺乏对于卵巢癌病情评估的血清学肿瘤蛋白指标，虽然部分研究者主张通过糖链蛋白125(CA125)进而评估患者的病情。但国外有研究发现[9]，依靠CA125评估卵巢癌病情或者临床转归的一致性率仍然较低，其评估的灵敏度不超过45%。本次研究通过对于卵巢癌患者病灶组织中ALDH1和PLK4的表达分析研究，能够在深入揭示卵巢癌病情进展机理的同时，为临床上卵巢癌的诊疗提供理论方面的参考。

表3 PLK4蛋白阳性表达在不同病理学特征卵巢癌组织中的表达差异

ALDH1是脱氢酶家族成员，其能够通过诱导癌细胞内结构蛋白的脱氢，进而导致肿瘤生物学特征的恶化。ALDH1结构上含有的丝氨酸-脯氨酸重复结构，能够诱导癌细胞内肿瘤信号通路MAPK的激活，加剧癌细胞的异常转录和复制。相关基础方面的研究认为，ALDH1能够提高癌细胞的浸润和粘附能力，增加癌细胞突破卵巢基底膜组织的风险，并最终促进卵巢恶性肿瘤的发生和转移[10]；PLK4是着丝粒调控蛋白，其不仅能够通过影响着丝粒的功能状态，进而导致卵巢上皮细胞的恶变，同时还能够干预到上皮细胞的周期，从而增加G1/S期的细胞比例[11]。国外有学者[12]已经探讨了ALDH1的表达与卵巢癌的病情关系，认为在卵巢癌患者中，ALDH1蛋白的表达阳性率明显上升，但对于PLK4的分析较少。

本组研究中，卵巢癌组织中的ALDH1和PLK4蛋白阳性表达率显著高于良性组卵巢癌组织中的ALDH1和PLK4蛋白阳性表达率，差异具有统计学意义，提示了ALDH1和PLK4的高表达均能够影响到卵巢癌的发生发展过程。分析ALDH1和PLK4的高表达对于卵巢癌的发生内在影响，考虑由于下列因素有关[13-14]：(1)ALDH1的表达上升，能够促进癌细胞转录上游启动子的激活，提高了其对于癌细胞异常转录的激活作用；(2)PLK4的上调，能够提高上皮细胞异常有丝分裂的风险，导致上皮细胞癌基因突变风险的上升，从而促进了卵巢癌的发生。俞岚等[15]研究者也发现，在卵巢癌患者病灶组织中，ALDH1蛋白的表达阳性率可平均上升45%以上，在合并有明显的肿瘤恶病质或者远处转移的患者中，ALDH1蛋白的表达阳性率可进一步的上升。免疫组化的染色分析可见，ALDH1和PLK4蛋白均主要表达于细胞核或者细胞浆，特别是在癌细胞异型性较为明显的区域，ALDH1和PLK4蛋白的染色强度更深。进一步的研究发现，卵巢癌组织中的ALDH1和PLK4蛋白在不同FIGO分期、不同的组织分化程度、是否发生淋巴结转移的组织中表达差异具有统计学意义，提示了ALDH1和PLK4的表达与卵巢癌患者的临床病理特征密切相关，这主要由于ALDH1和PLK4的上升，能够通过导致癌细胞生物学特征的恶化，提高癌细胞的上皮-间质转换能力，促进癌细胞对于淋巴结组织的粘附，提高了癌细胞的浸润深度，从而最终促进了淋巴病理特征的进展。临床上可以通过检测ALDH1和PLK4，进而评估卵巢癌的临床病情。本次研究未探讨ALDH1和PLK4的表达与卵巢癌患者远期预后的关系，存在一定的不足。

综上所述，在卵巢癌患者病灶组织中，ALDH1和PLK4蛋白的表达阳性率均明显上升，同时ALDH1和PLK4的表达与卵巢癌患者的组织学分级、临床分期等临床病理特征密切相关。