山东省日照市规模禽场禽流感免疫效果监测

陈修香 韩 勇 李 英

1.山东省东港区动物疫病预防控制中心，山东东港276800；2.山东省日照市畜牧兽医管理服务中心，山东东港276800；3.山东省五莲县畜牧兽医服务中心叩官畜牧兽医站，山东五莲262300

禽流感是禽流行性感冒的简称，因其致病性和毒性的不同，可分为非致病性、低致病性和高致病性三大类。其中高致病性禽流感最为严重，不仅可导致易感动物90%～100%死亡，还可以感染人类，甚至致人死亡，严重危害家禽业和公共卫生安全[1]。通过免疫监测，根据免疫抗体水平科学地进行综合免疫预防，可以及时了解禽流感免疫后的效果，准确掌握疫情动态，以便预测疫病的动态，控制疫病的发展。日照市畜牧兽医管理服务中心为了掌握全市禽流感抗体水平，在全市禽场进行随机抽样，开展免疫效果监测。本试验采取禽流感血凝和血凝抑制试验方法，检测H5（Re-8）禽流感抗体水平，了解日照市H5 禽流感免疫后抗体水平情况。

1 材料与方法

1.1 试验地点、方法

本试验于2018 年11 月10-20 日在日照市动物疫病预防控中心进行，采取禽流感血凝和血凝抑制试验方法。

1.2 血清样品

为配合日照市秋季防疫检查工作，进行禽流感的免疫效果监测，日照市于2018 年11 月中下旬对全市4 个区（县）8 家规模化禽场进行了抽样检测，共抽查240 份血清。

1.3 检测试剂

H5（Re-8）禽流感抗原、标准阳性血清和标准阴性血清均购自哈尔滨维科生物技术有限公司，生产批号为2018001。

1.4 仪器设备

振荡器为金坛市医疗器械生产，型号为78-2；移液器为Sartorius 公司生产。

1.5 血凝试验操作程序

测抗原的血凝价：在微量反应板的1～12 孔加入25 μL 的PBS；换滴头，吸取25 μL 的抗原加入到第1 孔，然后倍比稀释至11 孔，并弃去剩下的25 μL，换滴头；每孔再加入25 μL 的PBS，混匀后，每孔加入25 μL 的1%体积比鸡红细胞悬液；震荡混匀，在室温下作用30 min 后观察结果。

HA 试验的判定方法：将板倾斜，观察红细胞有无呈泪滴状流淌。完全血凝（不流淌）的抗原的最高稀释倍数代表1 个血凝单位（HAU）。

1.6 血凝抑制试验操作程序

HI 抗体滴度：根据HA 试验结果配制4HAU，在微量板上的第1～11 孔加入25 μL 的PBS，第12孔加50 μL 的PBS；吸取25 μL 待检血清加入到第1 孔内，充分混匀后倍比稀释至第10 孔；在第1～11 孔加入25 μL 的4HAU，室温作用30 min；然后每孔加入25 μL 的1%体积比的鸡红细胞悬液，震荡混匀，在室温下作用30 min 后观察结果。

HI 试验的判定方法：以完全抑制4 个HAU 抗原的血清最高稀释倍数作为HI 滴度。HI 效价≥4 log2 判为阳性，＜4 log2 判为阴性。

2 结 果

1）禽流感血凝试验结果。H5（Re-8）禽流感血凝效价为9。

2）H5（Re-8）禽流感抗体检测结果。血清检测240 份，免疫合格230 份，抗体总体合格率95.8%。

3 讨 论

1）监测情况分析。从检测结果来看，抽检的4个区（县）8 家规模化禽场禽流感总体免疫合格率为95.8%，符合国家要求。

2）疫苗免疫效果分析。通过养殖户了解到有个别群体的免疫效果一般，不同个体即使是相同的免疫程序，所产生的免疫效果也不一样，主要与群体先天状况和养殖场环境、饲养管理水平有关。

3）高抗体水平的鸡群可以有效抵抗禽流感病毒的攻击，但也有试验证明，高抗体的鸡群仍可分离到AI 强毒并排毒，但发病症状较轻。而没有感染AI 强毒的鸡群则分离不到AIV，因此对种禽场不能掉以轻心，更应加强生物安全等综合防治措施[2]。