马蓝多糖和总糖提取液含量的测定

杨文学

贵州省黎平县肇兴镇初级中学 贵州 黎平557300

1 引言

黔东南蕴藏着丰富的植物资源，苗侗民族从马蓝、蓼蓝、菘蓝、木蓝等植物中可以提取靛蓝色素，主要用于靛染。其实，靛蓝还是一种优良的中医药，在治疗小儿癫痫、口舌生疮、热毒、喉痹、发斑等方面有显著的效果[1]。

王艳[2]从靛蓝中提取分离出了十种化合物，并分析了它们的化学成分和结构。李东[3]等人研究了靛蓝的阵痛和抗炎药效，证实靛蓝具有一定的阵痛、抗炎的效果。为进一步研究靛蓝的化学成分，拓宽靛蓝的利用价值，我们以黔东南地区植物马蓝为原料，对其中的多糖、总糖含量进行测定。

2 实验方法

2.1 材料、仪器与试剂 材料：马蓝叶(新鲜，采至贵州黎平县肇兴侗寨农户种植地)。

仪器：FA2004电子分析天平(上海良平仪表有限公司)、UV-2550紫外-可见分光光度计(日本岛津)、202-2电热恒温干燥箱(上海和呈仪器制造有限公司)、R-200旋转蒸发仪、SHZ-III型循环水真空泵(上海亚荣生化仪器厂)、恒温水浴锅。

试剂：苯酚、硫酸、乙醇、无水葡萄糖，均为AR级。

2.2 靛蓝的提取 从植物马蓝中吸附提取靛蓝的方法见参考文献[4]。用电子分析天平准确称取5g靛蓝粉末，置于圆底烧瓶中，加入蒸馏水100 mL，用加热套加热回流提取2小时，趁热过滤，再重复提取2小时，残渣用蒸馏水润洗，将润洗后的液体和之前回流的液体混合，用旋转蒸发仪加热浓缩，将浓缩后的液体转移到100 mL容量瓶中，稀释至刻度，即得到靛蓝。

2.3 试样的制备靛蓝多糖试样的制备：在盛有2.0 mL靛蓝溶液的试管中，加入10 ml 80%的乙醇，离心30 min后，取底部沉淀转移到50 mL容量瓶中，加蒸馏水稀释到刻度线，摇匀使其混合，在精密量取稀释液1 mL到试管中，加入1 mL水，再向其中加入1 mL 4%的苯酚，摇匀，快速加入7 mL浓硫酸，摇匀，把得到的液体放在在40℃的水浴锅中保温30 min，再把保温后的液体取出，放到冷水浴中，使它冷却30 min，得到的即为靛蓝多糖的试样。

靛蓝总糖试样的制备：在盛有3.0 mL靛蓝溶液的100 mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，再移取该溶液2.0 mL，慢慢向其中滴入1 mL 4%的苯酚溶液并摇匀，立刻加入7 mL 浓硫酸溶液并摇匀。在40℃的水浴中加热30 min，然后把它取出来，转移到零度以下的冰水浴中，冷却30 min，得到的溶液就是靛蓝总糖的试样。

2.4 测定条件的选择在盛有2.0 mL蒸馏水的试管中，滴加1 mL 4%的苯酚溶液，立刻加入7 mL浓硫酸，震荡之后放入40℃的恒温水浴锅中，加热30 min后移至冰水浴中，冷却30 min后取出，即得对照液。取该试液适量，测定440n m～510n m 范围内的吸光度。

2.5 标准曲线的绘制 将无水葡萄糖在105℃下烘干至恒重，准确称取样品50.0 mg于100 mL容量瓶中，用蒸馏水溶解，并稀释至刻度。分别移取葡萄糖溶液0.0 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL于50 mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度并摇匀，配制成不同浓度梯度的溶液。用紫外-可见分光光度计测定各溶液在最大吸收波长处的吸光度，测定前按2.4 操作，加入苯酚溶液和浓硫酸。以浓度c对吸光度A作图，绘制靛蓝溶液标准曲线。

2.6 试样中糖含量的测定按2.5 操作，用紫外分光光度计测定多糖试样和总糖试样在最大吸收波长处的吸光度。

3 结果与分析

3.1 最大吸收波长的确定表1给出了按2.4 操作，对照液在440n m～510n m 范围内的吸光度值。

表1 波长与吸光度的关系表

由表中可以看出，在440nm-510nm 波长范围内，吸收度随着波长的变化关系呈抛物线，在波长为490n m处取得极大值，因此选取490n m为测定的最大吸收波长。

3.2 葡萄糖溶液标准曲线的绘制根据2.5 的实验结果，以吸光度A为纵坐标，以葡萄糖溶液浓度c为横坐标作图，得到葡萄糖溶液的标准曲线见图1。

图1 葡萄糖溶液标准曲线

3.3 多糖和总糖的测定 表2为试样中多糖和总糖的测定结果。每个试样做3次平行实验，取平均值。

表2 靛蓝中总糖和多糖含量测定结果(n=3，%)

4 结论

(1)采用苯酚-硫酸比色法成功地测定了靛蓝中多糖和总糖含量，操作简便、灵敏度高、重现性较好；

(2)水浴加热时间、冰水浴时间是影响测定结果准确性的重要因素；

(3)n=3，植物马蓝中总糖含量为67.82%，多糖含量为5.22%。