杜鹃花活性提取物镇痛抗炎作用的初步研究

陈利军，王利平，冯丁丁

（1.江苏卫生健康职业学院，江苏南京 210029；2.江苏省中医院麻醉科，江苏南京 210000）

杜鹃花属是杜鹃花科的一个大属，在我国分布广泛、资源丰富，具有较高的药用价值，已引起国内外的重视。近几年从杜鹃花中提取的主要成分黄酮类化合物的药理活性受到很大的关注[1]，目前很多学者在心血管病、呼吸系统、神经系统研究领域研究颇多[2]，且满山红提取物具有抗炎镇痛作用[3]，但由于其溶解性差、造成难以吸收，临床上受到限制。研究报道黄杜鹃花镇痛作用显著，但是剂量大效果反而减弱，药效不稳定[4]。以上表明各种局限性导致杜鹃花属植物尚没有开发出临床上适合的药物。

目前抗炎镇痛药在发挥止痛和抗炎作用外，还会出现相应的毒副作用，不良反应如凝血障碍、心脑血管疾病、肾毒性、肝损伤、粒细胞缺乏、胃肠道损伤等。文献报道杜鹃花具有治疗风湿顽痹、折伤疼痛、皮肤顽癣等症，结合前期研究，本实验通过探究杜鹃花活性提取物的镇痛抗炎作用，为临床上开发新型的安全性较高的镇痛抗炎药物奠定基础。

1 实验材料与仪器

1.1 实验动物

ICR 小鼠，体重（20±2）g，SD 大鼠（200±20）g，雌雄各半，扬州大学比较医学中心，许可证号：SCXK（苏）2017-0007。

1.2 实验药品

杜鹃花提取物（江苏卫生健康职业学院化学教研室提取，总黄酮含量＞50.0%）；双氯芬酸钠肠溶片（北京诺华制药有限公司）；弗氏完全佐剂（浙江联硕生物科技有限公司）。

1.3 实验仪器

ATY-224型分析天平（上海双旭电子有限公司）；药品冷藏箱YC-1500L（山东博科有限公司）；GJ-8402型热板测痛仪（南京卡尔文生物科技有限公司）；足趾肿胀测量仪（安徽正华生物仪器设备有限公司）。

2 实验方法

2.1 镇痛实验研究

实验前选取60只ICR 小鼠，将热板仪预热至温度为（55±0.5）℃挑选热板仪上10s 以上、40s 以内出现舔足的小鼠，时间大于40s 或者跳跃者淘汰。合格的小鼠随机分为6组，分别为生理盐水对照组，杜鹃花低、中、高剂量组，阳性药组（双氯芬酸钠），给药前预先测定每只小鼠的痛阈值。连续灌胃给药7d，末次给药后，分别记录30min、60min、90min 小鼠自放于热板测痛仪上至出现疼痛反应的时间（热板上出现舔足所用的时间），作为痛阈的指标。比较基础痛阈与给药后痛阈的差异，评价杜鹃花提取物的镇痛作用。

2.2 抗炎实验

实验前选取SD 大鼠60只，适应性喂养1周后，分空白组（10只）和造模组（50只）。空白组的大鼠右侧后肢足趾皮下注射生理盐水0.1mL，其余各组大鼠右侧后肢足趾皮下注射弗氏完全佐剂0.1mL，制成下肢关节炎模型，造模成功后将模型组随机分为5组，分别为模型组，杜鹃花组低、中、高剂量组，阳性对照组。造模前用足趾测量仪测定大鼠造模肢足趾容积，并在给药第1、7、14、21d 分别测量足趾容积，比较各组肿胀度差异。末次给药1h 后，10%水合氯醛麻醉，腹主动脉取血，迅速剥离足趾关节皮毛，取大鼠踝关节上1cm 处，剥除趾骨关节，制备肌肉及增生组织匀浆，离心取上清液，以备研究其作用机制。

2.3 统计方法

采用SPSS17.0数据统计软件的t检验进行数据分析，结果用（+s）表示，组间差异的比较用t检验。

3 结果与分析

3.1 杜鹃花对小鼠热板致痛的影响

实验表明，给药后杜鹃花中、高剂量组有较好的镇痛作用，与生理盐水对照组比较，均可明显延长痛阈值，具有统计学差异（p＜0.01），高剂量与阳性药组相比，没有统计学差异（p＞0.05），但杜鹃花在给药60min 表现较强的镇痛效果，且有一定的量效关系（见表1）。

表1 杜鹃花对小鼠热板法痛阈的影响（n=10，+s）

表1 杜鹃花对小鼠热板法痛阈的影响（n=10，+s）

注：与空白组相比，*p＜0.01；与给药前相比，#p＜0.01.

给药前 给药后不同时间痛阈（min）痛阈 30 60 90空白对照组 14.51±3.4 14.67±3.6 15.33±5.2 16.83±4.3阳性对照组 60 14.67±2.9 35.24±5.1*# 38.42±4.3*# 40.34±5.1*#低剂量 30 16.77±3.7 19.23±4.2* 19.63±5.2* 18.81±4.3中剂量 60 15.57±3.2 25.83±4.3*# 24.42±3.22*# 22.39±5.5*#高剂量 120 16.17±3.3 30.67±3.7*# 36.83±5.64*# 35.17±3.43*#组別 剂量（mg/kg）

3.2 杜鹃花对大鼠足趾肿胀的影响

实验表明，造模后，空白组与模型组相比，模型组的足趾容积存在显著性差异（p＜0.01）。给药后，杜鹃花可明显减轻大鼠足趾的肿胀度，与模型组相比，具有显著性差异（p＜0.01），给药组肿胀度均低于模型组。高剂量组与低、中剂量组相比，具有显著性差异（p＜0.05），抗炎效果显著，且有一定的量效关系，剂量增加，效果显著（见表2）。

4 结论

本实验结果显示杜鹃花活性提取物具有明显的抗炎镇痛作用，且有一定的量效关系，尤其可降低氟氏完全佐剂所致关节炎大鼠的肿胀度，改善关节滑膜组织增生，提示本药具有较好的抗炎作用。抗炎机制有可能通过下调肿瘤坏死因子TNF-α，抑制T细胞产生各种炎症因子，进而抑制炎症反应。镇痛作用机制研究表明，可能通过提高脑组织及血清NO 含量，因为NO 是一种重要的神经递质，在外周和中枢不同水平上参与痛觉的调控。但对于杜鹃花确切的抗炎镇痛作用机制及具体成分的分析鉴定有待进一步研究。杜鹃花活性提取物药物的开发具有广阔的应用前景，本实验可为抗炎镇痛药物的研发提供坚实的实验依据，为后续进一步药物剂型的开发及应用奠定坚实的基础。

表2 杜鹃花对大鼠足趾肿胀的影响（n=10，+s）

表2 杜鹃花对大鼠足趾肿胀的影响（n=10，+s）

注：与模型组相比，*p＜0.01；与低剂量组相比，#p＜0.05；与中剂量组相比，▲p＜0.05.

致炎后不同时间足跖容积（mL）1d 7d 14d 21d空白对照组 0.93±0.55* 0.95±0.42* 0.97+0.26* 1.92±0.43*模型组 2.55±0.23 2.36±0.64 2.25±0.72 2.07±0.86阳性对照组 60 1.02±0.13* 0.99±0.21* 1.03±0.46* 1.19±0.12*低剂量组 30 1.91±0.27* 1.88±0.76 1.98±0.54 1.86±0.95中剂量组 60 1.66±0.42* 1.54±0.22* 1.67±0.14* 1.57±0.35*高剂量组 120 1.06±0.43*#▲1.13±0.33*#▲1.17±0.32*#▲1.08±0.15*#▲组別 剂量（mg/kg）