不同采收期绞股蓝中总皂苷的含量比较研究

◎王珊 许海燕 侯敏娜 刘艳红 王青

绞股蓝Gynostemma pentaphyllum（Thumb。）Makino为葫芦科多年生草质藤本植物，绞股蓝药材产地分布较为广泛，全世界约有16种2变种，我国有14种2变种，主要分布在秦岭及长江以南地区。曾被列为待开发的第一位的“名贵中药材”，且其也是药食两用常用药材。研究发现绞股蓝皂苷为绞股蓝的主要活性成分，主要含达玛烷型皂苷，其具有较好的调血脂、保肝等作用。目前绞股蓝绞股蓝以其独特的身份，在医药、保健、养殖等行业已有较好的应用。但绞股蓝的品种较为混乱，不同采收期的绞股蓝的质量差别较大，因此开展不同采收期绞股蓝的质量评价具有重要意义，因此本研究主要对不同采收期的绞股蓝总皂苷的含量进行比较研究，该研究为绞股蓝的采收加工及质量评价提供一定的理论依据。

一、材料

T6-新世纪紫外分光光度计（北京普析通用股份有限公司）、十万分之一电子天平（METTLER-XP-205，深圳市盛美仪器有限公司）、KQ-5200E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）、WELCH真空泵LVS 302 Z（伊尔姆真空设备贸易有限公司）、SB-1100型EYELA水浴锅（东京理化器械株式会社）。

人参皂苷Re对照品（批号：110754-201834，中国食品药品检定所），水为纯净水，石油醚、香草醛、冰醋酸、高氯酸、乙醇、正丁醇等其余试剂均为分析纯。

绞股蓝样品均为2019年从道地产区直接收集，经陕西国际商贸学院雷国莲教授鉴定为为葫芦科绞股蓝属植物绞股蓝（Gynostemma pentaphyllum（Thumb。）Makino的干燥全草。

二、方法与结果

1.对照品溶液制备。精密称取人参皂苷Re对照品适量，加甲醇溶解制成浓度为0.501 mg.mL-1的对照品溶液，备用。

2.供试品溶液的制备。分别称取5、6、7、8、9五个不同采收期绞股蓝药材干燥粉末（过20目筛）约1g，加石油醚适量，超声处理两次每次30 min，弃去石油醚，加60%乙醇50 mL，超声处理两次，每次45min，过滤，合并滤液，挥至无醇味，水溶液加水饱和正丁醇30 mL萃取3次，合并正丁醇溶液，蒸干，残渣加甲醇溶解并定容至25 mL，即得不同采收期绞股蓝总皂苷供试品溶液。

3.最大波长的确定。将显色后的供试品和对照品在200～700 nm波长范围下扫描，结果发现最大波长为550 nm。

4.标准曲线制定。精密量取人参皂苷Re对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，分别置于 10 mL 试管中，挥干溶剂，分别精密加入0.2 mL5%的香草醛冰醋酸溶液和0.8 mL的高氯酸，混匀，密塞，置于60℃水浴锅中15 min，取出后、冷却，再加5 mL冰醋酸，混匀，以空白试剂为对照，在550 nm波长处测定吸收度。绘制标准曲线，其中以吸光度A为纵坐标（Y），以对照品取样量（mg）为横坐标（X），进行线计算回归方程为：Y=3.145X-0.0289，R2=0.998（n＝5）。实验结果结果显示，人参皂苷Re在0.967～0.501 mg范围内线性关系良好。

5.精密度试验。精密吸取同一份人参皂苷Re对照品溶液，按照2.4项下方法操作，在同一条件下连续测定6次吸光度，计算人参皂苷Re吸光度的RSD为0.4%，表明仪器精密度良好。

6.稳定性实验。取同一批绞股蓝样品，按照2.2项下方法，按照 2.4 项下方法操作，分别于 0、0.5、1、1.5、2.5、3 h 测定吸光度，计算人参皂苷Re吸光度的RSD为0.3%，表明绞股蓝样品在3 h内稳定性良好。

7.重复性试验。取同一批绞股蓝样品，按照2.2项下方法，平行制备6个批次供试品溶液，按照2.4项下下方法操作，重复测定6次，计算人参皂苷Re吸光度的RSD为0.6%，表明该方法重复性良好。

8.加样回收率试验。取已知含量（23.1 mg）的绞股蓝药材样品6份，每份0.5g，精密称定，每份分别精密加入一定量（23.1 mg）的人参皂苷Re对照品，按照2.2项下方法，按照2.4项下方法操作，测定吸光度，计算回收率，结果平均回收率为98.3%，RSD为2.13%（n=6），结果表明该方法的回收率良好。

9.样品测定。分别精密量取不同采收期的绞股蓝供试品溶液，按照2.4项下方法操作，平行测定3次测定吸光度，结果如表1所示。从表1结果可以看出，不同采收期对绞股蓝皂苷的含量影响较大，随着绞股蓝生长时间的延续总皂苷的含量呈上升趋势，在7月份的时候总皂苷的含量（平均含量为4.519%）达到最高，之后呈下降趋势。该研究结果为绞股蓝的产地采收加工及质量控制提供理论依据。

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