HPLC法测定参志颗粒中五味子醇甲含量

陶贵斌，李昕曈，蒋常鹏，高红梅*

（长春中医药大学·吉林长春·130117）

参志颗粒是由远志、五味子、当归、菊花、人参、甘草等6味中药制成的纯中药复方制剂。其中远志为主药，五味子为臣药。具有安神、益智等功效。参志颗粒作为新药，在上市之前需要对其进行工艺研究、质量标准和相关检查等一系列的研究[1]。为较好地控制制剂的相关质量，实验室进行了大量的实验研究工作，采用薄层色谱法对方中的远志、菊花、甘草、人参等进行了定性鉴别，为了能够更好地规范制剂的质量，我们参照2015年版《中国药典》进行了质量标准研究，为该制剂质量控制提供依据[2～7]。

复方新药质量标准研究是药学研究的主要内容之一，也是新药药学评价的重点内容[8]。近年来中药复方新药的研究水平有了较大提高[9]，中药复方新药的质量不是仅质量标准本身就可以解决的[10]，但质量标准是保证产品质量的关键环节和重要内容[11]，产品质量的提高离不开质量标准的提高[12]。随着科学技术的不断发展，在基于质量源于设计的理念指导下，中药复方新药质量标准系将日臻科学、系统和完善[13]。

1 仪器与设备

1.1 仪器

HH-2数显恒温水浴锅 （国华电器有限公司）；KQ-250B型超声波清洗器 （江苏省昆山市淀山湖镇仪器有限公司）；101-31SS电热鼓风干燥箱型烘箱（邦西仪器科技上海有限公司）；ZF-20D暗箱式紫外分析仪（上海宝山顾村电光仪器厂）；FA1204B电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；岛津LC-2030型高效液相色谱仪（中国岛津公司）；色谱柱（大连依利特分析仪器有限公司）。

1.2 试药

参志颗粒为实验室自制。五味子醇甲（中国食品药品检定研究院，批号：11857-201714，HPLC纯度98.5%）。乙腈（色谱纯，赛默飞世尔北京有限公司）；纯净水。

1.3 供试品与对照品

2 方法与结果

2.1 色谱条件

依利特 C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），梯度洗脱，柱温为 40℃，流动为乙腈（A）-0.1%磷酸（B）（0～20min，15%A；20.01～24min，20%～25%A；24.01～26min，25%～30%A；26.01～30min，30%～35%A；30.01～240min，35%～40%A；40.01～45min，40%～48%A；45.01～53min，48%～53%A）；流速 1ml/min；检测波长 348nm，进样量15μl。

2.2 对照品溶液的制备

取五味子醇甲对照品26.31mg，精密称定，置于25ml容量瓶中，甲醇定容，再吸取2.85ml定容于100ml容量瓶中，制成0.03mg/ml。五味子醇甲对照品溶液，摇匀，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取样品10g，研细，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加甲醇100ml，称量其重量，超声处理30min，冷却至室温后加入甲醇补足失重，滤过，取续滤液50ml水浴锅上蒸干，加20ml水溶解其残渣，再用水饱和正丁醇萃取3次，每次20ml，合并水饱和正丁醇层，蒸干后残渣加甲醇溶解定容至50ml，作为供试品溶液。

2.4 五味子阴性供试品的制备

按处方比例制备去除五味子以外方药材中其他成分药材，按制备工艺制备阴性样品，再按“2.3”项下方法制备阴性供试品溶液。

2.5 线性及范围

依照“2.1”项下的色谱条件，分别精密吸取不同浓度五味子醇甲对照品溶液（10、20、50、100、200、300μg/ml）10μl，注入高效液相色谱仪，以峰面积和浓度进行线性回归。回归方程为y=6283.3x-12607（r=0.9995）

2.6 精密度考察

密吸取供试品溶液10μl，依照“2.1”项下的色谱条件，连续进样6次，记录对照品的峰面积，计算RSD值为1.03，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性考察

精密吸取供试品溶液15μl，依照“2.1”项下的色谱条件，分别于 0、2、4、6、8、12h 测定峰面积并计算其RSD值为1.03%，表明五味子醇甲在12h内稳定。

2.8 重复性考察

取同一批参志颗粒10g，研细，精密称定，按“2.3”项下的方法制备供试品溶液，重复6次，测定五味子醇甲含量并计算其RSD值为1.24，表明该制备方法重复性良好。

2.9 加样回收率实验

取9份已知含量参志颗粒粉末5g，精密称定，在每3份中分别加入五味子醇甲对照品溶液，使其相当于样品中五味子醇甲含量的0.5、1、1.5倍，按“2.3”项下的方法制备成供试品溶液，测定并计算加样回收率及其RSD值[20]，结果见表1。

测量结果表明，92%＜回收率＜105%，且回收率RSD值＜2%，测定结果与真实值接近，回收率符合标准。

图1 五味子对照品溶液

图2 供试品溶液

图3 五味子阴性供试品溶液

图4 空白对照溶液

2.10 样品含量测定

取三批参志颗粒，每批各3份，每份10g，按照“2.3”项下方法制成供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样分析，通过外表一点法计算五味子醇甲的含量，三批颗粒中五味子醇甲含量见表2。

表6 含量测定结果

测定结果测定五味醇甲的平均含量为0.81mg/g，暂定其含量要求不得低于0.65 mg/g。

3 讨论

3.1 复方中指标性成分的确定

本文采用高效液相色谱方法对参志颗粒中五味子的有效成分五味子醇甲进行含量测定，复方中五味子为君药，在处方中所占比重最多，选其作为指标成分。

3.2 色谱条件选择

分别考察了甲醇超声提取、甲醇回流提取等不同的处理条件，通过比较目标化合物的含量、与相邻峰之间的分离度，结果显示本实验操作方法下，待测组分含量高，分离度好，因此确定样品提取方法。

通过DAD二极管阵列检测器在200～400nm处扫描，发现五味子醇甲在348nm处具有最大吸收，因此确定检测波长为348nm。