酸枣仁加锌合剂对睡眠剥夺大鼠下丘脑星形胶质细胞活性的影响

张红石 马天姝 祝恩智 (长春中医药大学创新实践中心，吉林 长春 130017)

睡眠剥夺(SD)状态势必会严重影响员工的职业能力和职业寿命〔1～3〕。目前临床上还没有明确针对SD的调养方案。中药酸枣仁有较好的促进睡眠、养心安神的效果，可以有效促进人体睡眠〔4，5〕。酸枣仁加锌合剂可以有效改善SD后小鼠的学习记忆能力〔6～8〕，但缺乏基础研究。下丘脑为人体多种生物调节节律中枢，星形胶质细胞(AS)对其有明确的保护作用〔9〕。

AS广泛分布于脑的各个部位。在丘脑，AS占整个胶质细胞的30%～40%。AS参与了人体生物钟的调节作用。目前AS分原浆性AS和纤维性AS。两者虽然形态、分布不完全一样，但功能上几乎相同。本研究拟分析酸枣仁加锌合剂对SD大鼠下丘脑AS细胞活性的影响。

1 材料与方法

1.1一般材料 清洁级10月龄Wistar大鼠50只，雌雄各半，体重(180±20)g，均购于维通利华(许可证号：SCXK(京)2011-0004)，实验动物饲养于洁净动物笼中，相对湿度50%～60%，温度(22±3)℃，人工照明，食用标准饲料，自由饮水。试剂及仪器：改良Bielschowsky银神经染色试剂盒：Leagene Biotechnology CoDK0015.Ltd：试剂(A)Bielschowsky 硝酸银溶液50 ml；试剂(B)：还原剂 250 ml；试剂(C)：Bielschowsky氨银溶液50 ml；试剂(D)：氯化金溶液 50 ml；试剂(E)：海波溶液 50 ml。酸枣仁加锌合剂组制备：按专利酸枣仁加锌合剂专利配方进行制作。酶标仪：伯腾酶标仪BIOTek-SMAT;组织切片机：LEICA EG1150H；酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒:Rat GFAP ELISA KIT30024153。

1.2造模 水上站立法〔10〕造模。剥夺强度为24 h/d。将大鼠放入水深2～5 cm的塑料笼内，每笼放5只大鼠，出现节律性垂头触水而觉醒，如此反复从而造成大鼠难以进入睡眠状态导致SD。

1.3分组与给药 按体重随机分为空白组、模型组、阳性药组、高剂量组、低剂量组，每组10只。模型组:连续7 d灌胃(清水)；阳性药组：连续7 d灌胃葡萄糖酸锌口服液；高剂量组：连续7 d灌胃高剂量的酸枣仁加锌合剂；低剂量组：连续7 d灌胃低剂量的酸枣仁加锌合剂；以上各组正常喂养，7 d后进行24 h SD。ELISA检测血清胶原纤维酸性蛋白(GFAP)水平，并进行银染。计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

1.4统计学方法 采用SPSS13.0软件行t检验。

2 结 果

2.1各组血清GFAP水平比较 空白组、阳性药组、低剂量组及高剂量组GAFP水平(OD值：0.31±0.09、0.52±0.12、0.49±0.11、0.52±0.17)与模型组(0.37±0.11)差异有统计学意义(t=3.78、2.91、2.44、2.34、均P<0.05)。

2.2AS银染 空白组下丘脑AS细胞排列整齐，细胞大小均匀，细胞间突触连接较少。模型组细胞排列杂乱，细胞内蛋白表达活跃，出现杂乱、新的突触连接。阳性药物组、低剂量组、高剂量组与模型组比较，细胞排列相对整齐，突触连接较为规律，见图1。

图1 SD 24 h后大鼠AS银染(×400)

3 讨 论

SD机制研究较为少见，阻碍了其临床应用〔11～13〕。神经胶质细胞数量是神经元的10～50倍，在睡眠过程中，AS可以在谷氨酸诱导下以钙离子依赖的胞吐方式释放ATP，参与脑的能量代谢〔14,15〕。AS对睡眠-觉醒周期的维持及AS对睡眠能量代谢的作用，说明该细胞与睡眠存在较为密切的关系〔16〕。GFAP是AS的骨架蛋白，被公认为是AS的特征性标志物。

本研究表明，当实验动物处于SD状态时，AS开始发挥对神经细胞的保护作用，活性开始升高，且药物有提高AS活性的作用。进而对脑组织起到保护、支持、营养的作用。

中药饮食调理是中医“治未病”的重要体现，其不同于药物治疗和心理暗示，是将药物融于食物，有效缓解疾病状态的一种有效方法，目前针对性的基础研究较为少见。本课题组发现酸枣仁加锌合剂有较好的对抗SD状态的作用，可以起到养心安神保护大脑各项功能的作用，减少SD带来的脑组织损伤，其作用机制与AS活性密切相关。