2019 年夏季成都市病死猪圆环病毒II 型感染情况分析

李敏，周潇潇，肖金鹏，向晓雪，黄迪，李俐睿

（四川省成都市动物疫病预防控制中心，四川 成都 610041）

猪圆环病毒II 型（PCV2）主要引起猪断奶后多系统衰竭综合征（PMWS）［1-2］，母猪繁殖障碍［3］、断奶猪和育肥猪的呼吸道疾病［4］、猪皮炎和肾病综合征［5］（PDNS）以及猪先天性震颤［6］等一系列疫病，被称为猪圆环病毒相关疾病（PCVAD）。在我国猪群中，圆环病毒感染普遍存在，猪群血清阳性率可达20%～80%［7］。2002 年，杨汉春［8］对北京、天津、广东、深圳、山东、山西等地规模化猪场的临床发病情况进行了调查，结合PCR 诊断，结果发现11 个猪场发生了由PCV2 感染所致的PMWS，1个猪场表现为PDNS。近两年来，成都地区夏季的病死猪呈一定程度的上涨趋势。为详细了解病死猪群中的PCV2 感染情况，笔者从成都地区三个无害化处理场采集了病死猪的淋巴结、脾脏和肝脏样品，对圆环病毒II 型（PCV2）进行检测，结果报告如下：

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品来源 样品采集于成都市3个无害化处理场，来源于15个区（市）县。于2019年6月～9月每月在每个区（市）县各采集5头病死猪的淋巴结、脾脏和肝脏混合样，共计236份。

1.1.2 主要试剂 磁珠法病毒DNA/RNA 提取试剂盒、猪圆环病毒（PCV2）单重荧光RT-PCR检测试剂盒，均购自北京世纪元亨生物技术有限公司。

1.2 PCV2荧光定量RT-PCR检测方法

1.2.1 样品处理 向无菌的2 mL Lysing Matrix组织研磨管中加入1 mL PBS液，再加入适量组织混合样品，置于FastPrep-24™5G 研磨仪中研磨30 s 后取出，再置于离心机以8 000 r/min 离心1 min，取上清备用。

1.2.2 DNA抽提 采用磁珠法病毒DNA/RNA提取法通过KingFisher DUO 自动化提取仪对病毒DNA 进行提取，执行Tian_KingFisher_Duo.bdz 程序进行DNA 抽提。程序执行完毕，取出DNA，用封口膜封好并保存于-20 ℃备用。

1.2.3 荧光定量RT-PCR反应 从试剂盒中取出无菌无核酸酶水、PCR反应液、荧光探针，振荡混匀后，瞬时离心备用。向PCR反应管内依次加入无菌无核酸酶水5.9 μL、PCR 反应液10 μL、荧光探针2.1 μL、DNA模板2 μL，配制成20 μL反应体系，并设立阴、阳性对照。反应条件如下：95 ℃2 min；循环95 ℃2 min，60 ℃35 s，共40个循环；在60 ℃延伸时收集荧光信号，报告基团“FAM”，淬灭基团“NONE”。

1.2.4 结果判定 若阳性对照Ct 值≤30，阴性对照无Ct值，则实验结果成立。如Ct值≤30并出现特定的扩增曲线，判为PCV2阳性；如30＜Ct值＜37，需重新提取DNA进行扩增，如仍为可疑，则判定为阳性；如Ct值≥37判为阴性。

2 结果

2019 年6 月至9 月，共检测病死猪内脏样品236 份，其中猪圆环病毒II 型（PCV2）核酸阳性有160 份，平均阳性率达68%。具体测定结果见表1。

3 分析

根据检测结果可以看出，病死猪中猪圆环病毒II型（PCV2）的阳性率高达68%，说明猪群中猪圆环病毒II型普遍存在。而PCV2又常与多种病原混合感染，造成猪只消瘦、皮肤苍白、腹泻、呼吸障碍及轻度黄疸，还包括神经症状、繁殖障碍、皮炎等临床症状。成都市作为四川的养猪大市，必须对猪圆环病毒II型进行重点防控。

2006年，北美广泛使用PCVAD 疫苗，报道显示，超过98%的猪只在断奶前后免疫，提高了猪只的生产性能，降低了死亡率［9］。2007 年，有研究表明，对断奶仔猪实施PCV2免疫，虽然能有效控制PCVAD 发生，降低血液中的病毒水平，降低育成猪的死亡率，但却并不能根除感染发生［10］，PCV2 在主动免疫的情况下依然可以感染猪只。通常4～11周龄的猪对PCV2较为易感，而哺乳仔猪的感染率较低［11］。实际生产中，育肥猪的PCV2 感染在各阶段均存在，甚至高效价抗体的猪群也可感染PCV2，表明控制PCV2感染仅靠免疫无法解决，而且成年母猪可能是该病的重要传染源［12］。

表1 2019年夏季成都市无害化处理场猪圆环病毒II型的检测结果

4 防控建议

PCVAD 的发生往往不单是因为PCV2 感染造成的，需要其他条件或共同因素才得以诱发临床病症，但其相互作用和致病的机制非常复杂，因此不能完全依赖免疫等特异性防制措施，只有同时采取有效的综合防控措施，才能起到更好的效果。

4.1 做好相关疫苗免疫接种 同猪呼吸道疾病综合征（PRDC）有关的猪病往往是由PRRSV、猪流感病毒（SIV）、猪肺炎支原体、猪细小病毒（PPV）、多杀性巴氏杆菌等多种病原混合感染引起的。因此，除接种PCV2疫苗以外，猪场应结合自身情况，做好PRRSV和PPV等相关疫病的疫苗接种。

4.2 做好饲养管理 本病的发生与猪群的日常管理密切相关，高密度的集中养殖方式本身就易引起疾病。故养殖场内应制定规范和科学的养殖程序和饲养标准，加强猪舍的通风换气和防暑降温；注意饲料的营养和质量，保持清洁的饮水；及时清运粪污，降低猪舍内有害气体浓度；做好驱虫、防蚊、防鼠工作；加强生产母猪的产前和产后保健。一旦猪群感染PCV2 后，可适当增强营养，以降低发病率和病死率。

4.3 加强消毒工作 加强猪场内外的环境卫生与消毒工作，是防止感染的最有效措施。在进入生产区的门口必须设立消毒池，配制有效消毒液，对来往车辆的轮胎和人的鞋底进行消毒。禁止饲养狗、猫等小动物，加强灭蚊蝇和灭鼠，控制疫病传播。严格执行消毒制度，做好日常消毒工作，做到“全进全出”，每批猪出栏后彻底清洗、消毒圈舍，并空栏1周以上。

4.4 做好无害化处理工作 一旦舍内发生猪只死亡，应将死猪装入专用的防渗漏尸体袋中，联系无害化处理公司对死猪收集处理，不得私自掩埋或高温处理。同时，要对圈舍和尸体堆放地点进行一次彻底的清洗消毒，防止病原微生物二次污染。