益母缩宫颗粒对药物不全流产大鼠子宫匀浆NO、NOS的影响

吴敏　何青兰　李虹秀　李品英　黄正迎　杨婷　毛惠

【摘要】目的 通过研究益母缩宫颗粒对药物不全流产大鼠子宫匀浆中NO含量、NOS活力的影响以探究本药对模型大鼠的作用机制。方法 通过灌服米非司酮+米索前列醇造成药物不全流产大鼠模型，造模成功后分别灌服不同剂量实验药物及对照药物，然后检测各组大鼠子宫匀浆中NO含量及NOS活力。结果 与模型组相比，益母缩宫颗粒高剂量组、新生化颗粒组大鼠子宫组织匀浆中NO含量降低，差异有统计学意义（P<0.05）;新生化颗粒组及益母缩宫颗粒各组NOS活力与模型组相比均无统计学差异（P>0.05）。结论 ①高剂量益母缩宫颗粒能降低模型大鼠子宫匀浆中NO含量，效果与新生化颗粒相当。

【关键词】益母缩宫颗粒;药物不全流产;子宫匀浆;NO含量

【中图分类号】R714.21 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095.6681.2020.7..02

全世界每年大约有8500万例非意愿妊娠，其中50%以流产告终[1]。近年来，由于米非司酮联联合索前列醇终止早孕具有成功率高、使用方便、经济的特点而成为药物流产的常用方法。但药流后常有药流不完全而导致阴道流血时间长和阴道流血量多的并发症。我院院内制剂益母缩宫颗粒由《傅青主女科》生化汤化裁而来，由益母草、川芎、枳壳、当归、炮姜、桃仁、生蒲黄组成，具有活血化瘀、促进宫缩的作用，前期研究证实其能有效减少药物流产后阴道流血时间，有促进恶露排出及辅助子宫复旧的作用[2][3]，但其对药物流产后子宫的作用机制尚未完全明确，本实验按照王晓东[4]所述实验方法造成药物不全流产大鼠模型，检测大鼠子宫匀浆中NO含量及NOS活力寻找本药对于模型大鼠子宫可能的作用机制，为该药的临床应用提供依据，也为本药的进一步研究提供参考。

1 材料与方法

1.1 实验动物

SPF级别SD大鼠，雌性60只，雄性30只，由成都达硕实验动物有限公司提供，许可证号 SCXK（川）2015-030。雌性大鼠体重210～240 g，雄性大鼠体重250～280 g，饲养于西南医科大学实验动物中心，许可证号SYXK（川）2018-065。

1.2 实验药物

益母缩宫颗粒，10 g/袋，西南医科大学附属中医医院，批号20181005，大鼠给药量为低剂量组3.125 g/（kg.d），中剂量组6.25 g/（kg.d），高剂量组12.5 g/（kg.d）。

新生化颗粒，9 g/袋，江苏仁寿药业有限公司，批号181211，大鼠服药剂量为2.813 g/（kg.d）。

米非司酮，内含米非司酮25 mg/片，华润紫竹药业有限公司，批号431904011，大鼠给药量为8.3 mg/kg。

米索前列醇，内含米索前列醇0.2 mg/片，华润紫竹药业有限公司，批号43190302，大鼠灌胃量为0.1 mg/kg。

水合氯醛，100 g/瓶，天津大茂化學试剂厂，批号20181201，使用时用生理盐水配制成10% 溶液。

所有灌胃药物均根据人鼠剂量比换算成大鼠灌胃剂量，成人体重按60 kg计算。

1.3 实验所需试剂及仪器

实验试剂：总蛋白（TP）测试盒，A045-2-1;一氧化氮（NO）测试盒，A012-1-2;总一氧化氮合成酶（NOS）测试盒，A014-2-2，均由南京建成生物工程研究所提供。

实验仪器：恒温电子水浴锅，型号DZKW-4，北京中兴伟业仪器有限公司;酶标仪，型号SpectraMAX Plus384，美谷分子仪器有限公司;722可见分光光度计，UV752N紫外可见分光光度计，上海佑科仪器仪表有限公司;优普超纯水制造系统，型号UPH-Ⅱ-10T，成都超纯科技有限公司;手提式不锈钢压力蒸汽灭菌器，型号SYQ-DSX-280B，上海申安医疗器械厂。

2 实验方法

2.1 造模

按照王晓东[4]所述实验方法造模，将雌雄大鼠于每日下午18：00按2：1合笼，次晨08：00检查雌鼠阴道，查见阴栓或者阴道分泌物涂片于镜下查见精子则视为该雌鼠受孕d1，未受孕雌鼠于下午18：00继续合笼，连续合笼一周。

将受孕雌鼠取8只作为空白组分笼喂养，其余受孕雌鼠受孕d7统一造模，受孕d7日晨08：00灌胃米非司酮混悬液0.83 mg/ml，下午18：00灌胃米索前列醇混悬液0.01 mg/ml，空白组大鼠灌胃动物实验中心饮用水，灌胃浓度均为1 ml/100g。灌胃米索前列醇后于雌鼠阴道内置入定量棉球1枚，次晨检查大鼠阴道内棉球，查见血迹认定为造模成功。将造模成功大鼠分为益母缩宫颗粒高剂量组、中剂量组、低剂量组、模型组及新生化颗粒组。

各组大鼠均于受孕d8灌胃药物，实验组分别灌胃高、中、低浓度益母缩宫颗粒，对照组灌胃新生化颗粒，模型组及空白组大鼠灌服动物实验中心饮用水。连续灌胃7天，每天1次。

2.2 动物标本的采集

各组大鼠于开始灌胃第8天用水合氯醛按0.35 ml/100 g剂量腹腔注射麻醉大鼠，麻妥后将大鼠固定于台上，腹部正中行纵切口，逐层开腹，钝性分离周围组织，找到子宫，用眼科剪分离子宫，下自宫颈口，上自子宫末端，离断子宫，置于天平上进行称重，称重后将子宫组织置于-80℃冰箱里保存以备制备组织匀浆。

2.3 子宫匀浆中NO含量及NOS活力的检测方法

取出子宫组织，梯度温度解冻，称取组织块0.1 g～0.2 g在冰生理盐水中漂洗除去多余血液及杂质，用滤纸拭干组织，称重，然后放入5 mL的EP管内。量取0.9%生理盐水，按组织质量与生理盐水体积m：v比为1：9的比例加入生理盐水，然后剪碎组织，用匀浆机研磨，制成10%组织匀浆。将制备好的组织匀浆用离心机以3500 r/min转速离心10分钟，然后留取上清液以备检测。按硝酸酶还原法检测上清液中NO含量及NOS活力，按照指示盒说明进行操作。