‘黑虎香’葡萄离体快繁技术研究

王婷 肖慧琳 唐美玲 卢建声 刘万好 郑秋玲 刘珅坤 张超杰* 谭洋洋

(1山东省烟台市农业科学研究院，烟台 265500；2蓬莱国宾葡萄酒庄有限公司，蓬莱 265600）

‘黑虎香’葡萄别名紫壳园、药香，欧美杂种，浆果着生紧，粒小，具草莓香味。植株生长势强，萌芽率高，抗病性与适应性均强，鲜食、制汁两用品种[1]。目前，国内外对于葡萄再生体系建立工作已取得了较大的进展，许多鲜食葡萄品种、砧木都已获得组培苗[2-5]，并且许多研究以组培苗为试验材料进行植物生理、生化方面的研究[2-3]。本试验通过探索启动培养、生根培养环节的关键技术，初步建立‘黑虎香’葡萄离体快繁体系，使其种质资源得到保存与繁殖。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验材料采集自山东省烟台市农业科学研究院葡萄资源圃。

1.2 试验方法

5月份采集温室内萌发的‘黑虎香’新梢，带回试验室消毒。剪取单芽茎段，置于75%的酒精中消毒15 s，然后用0.1%的HgCl2（升汞）消毒 8 min、10 min、12 min，用无菌水冲洗干净，接种到9种启动培养基上（WPM、GS和MS三种基本培养基，分别添加 2.0 mg/L、1.0 mg/L、0.5 mg/L的6-BA，同时添加0.2 mg/L的IBA），20 d后统计不定芽形成率和不定芽生长情况，从中筛选出适宜的启动培养基。待初代苗生长至高2 cm以上时，将不定芽移至3种生根培养基中。3 种培养基配方为，T1:1/2MS+IBA（0.2mg/L）；T2:1/2MS+IBA（0.2 mg/L）+KT(0.5 mg/L)；T3:1/2MS+IBA（0.2 mg/L）+KT(1.0 mg/L)。 45 d 后统计调查组培苗的苗高、增殖倍数和生根情况，从中筛选出适宜增殖生根的培养基配方。

2 结果与分析

2.3 不同培养基与激素配比对‘黑虎香’葡萄芽诱导的影响

表1 不同配方的启动培养基对‘黑虎香’葡萄不定芽再生的影响

5 6 GS GS 1 2 14 20 12 18 75.0 87.5叶色淡绿，生长势弱。叶色淡绿，生长势弱。7 MS 0.5 18 14 77.8 长势不整齐，部分芽随生长逐渐褐化、死亡。8 MS 1 15 9 60.0 生长健壮，多数芽生长后期褐化、死亡。9 MS 2 10 4 45.0 随着生长，许多芽褐化、死亡，存活的芽生长势强。

由表1可知，WPM基本培养基的不定芽萌芽率最高，都在90%以上。其次是GS培养基，萌芽率为72.2%～87.5%，MS培养基总体上不定芽形成率最低，为45%～77.8%。多数培养基上诱导的不定芽生长势弱，叶色淡绿，且随生长不定芽褐化严重，只有1、8、9培养基上的不定芽生长旺盛，而8和9培养基上的不定芽生长后期出现褐化并逐渐死亡。综合比较，配方1，即WPM+6-BA(0.5 mg/L)+IBA（0.2 mg/L）为‘黑虎香’最适宜的启动培养基。

表2 不同浓度激素配比培养基对‘黑虎香’增殖与根系生长的影响

由表2可知，3种培养基都能使‘黑虎香’茎段增殖生根。T1和T3培养基中的根系萌发较晚，且根系萌发过程中产生大块的愈伤组织。T2培养基中的根系萌发早，且无大块愈伤组织形成，根系生长快速，须根多，根系发达。3种培养基中T1的增殖倍数最低，T2增殖倍数最高（为2.44），且T2培养基中的组培苗45 d后平均苗高3.38 cm。因此，T2：1/2MS+IBA（0.2 mg/L）+KT(0.5 mg/L）为最适宜‘黑虎香’增殖生根的培养基配方。

3 结论

培养基与激素种类、浓度共同影响着不定芽的再生，对某一特定的基因型来说，不定芽的再生依赖于细胞分裂素和生长素的种类及比值[4]。植物生长调节剂对不同植物的敏感性不同，因此植物生长调节剂的选择应因植物基因型而异[5-6]。通过试验确定了‘黑虎香’葡萄的最适启动培养基为WPM+6-BA(0.5mg/L)+IBA（0.2 mg/L），增殖生根的最适宜培养基：1/2MS+IBA(0.2 mg/L)+KT(0.5 mg/L)。