厦门市新发现HIV-1感染者病毒载量及外周血T淋巴细胞检测分析

李 莉，张荣秋，马桂林，欧阳雪

人类免疫缺陷病毒(human immunodeficientcy virus，HIV)进入人体后，主要侵犯CD4+辅助性T淋巴细胞并复制增殖，导致机体细胞免疫功能受损乃至缺陷，引发获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)，最终并发各种严重机会性感染和肿瘤。血浆中HIV病毒载量及外周血中CD4+T淋巴细胞(CD4+细胞)水平分别反映HIV病毒在体内复制情况及机体细胞免疫功能，可用于HIV感染者和AIDS患者病程的判定、临床进展及抗病毒治疗效果的评价。厦门市自1991年首次报告HIV-1感染者以来，HIV/AIDS疫情呈现逐年上升的趋势，截至2018年12月，厦门地区HIV/AIDS报告1 819例，累计治疗1 742例。本研究旨在了解厦门市新发现HIV-1感染者未经抗病毒治疗状况下体内病毒复制情况及机体细胞免疫功能水平，为当地艾滋病的防治工作提供基础数据。

1 对象与方法

1.1对象 收集2017年1月—2018年6月经厦门市疾病预防控制中心蛋白免疫印迹实验确证为HIV-1抗体阳性、排除“艾滋病综合防治信息系统”中既往报告病例、按《艾滋病病毒感染者随访工作指南》要求完成首次随访，并于抗体确证阳性后2周内采血进行首次CD4+细胞检测的HIV-1感染者共269例。

1.2方法

1.2.1样本采集 采用EDTA-K2 抗凝管采集静脉血5 mL×2管，一管于24 h内检测外周血T淋巴细胞，一管于4 h内分离血浆并存放于-80 ℃冰箱用于检测病毒载量。

1.2.2病毒载量检测 基于实时荧光定量RT-PCR方法(TaqMan荧光探针法)，使用罗氏 COBAS AmpliPrep核酸提取仪、COBAS TaqMan 48病毒载量仪(试剂为TaqMan48 HIV检测试剂)，严格按照说明书进行测定，并根据试剂盒说明书判定结果。HIV-1病毒载量线性范围：20～10 000 000 HIV-1 RNA拷贝/mL。

1.2.3外周血T淋巴细胞检测 采用单平台法检测(FC500流式细胞仪，德国贝克曼公司)，应用CD45-FITC/CD4-PE/CD8-ECD/CD3-PC5 四色荧光标记抗体和Flow-Count绝对计数荧光微球，通过流式细胞仪淋巴细胞亚群分析软件，获得T细胞亚群的相对数(百分比)和绝对数。

2 结 果

2.1基本情况 269例新发现的HIV-1感染者中，男性244例(90.7%)，女性25例(9.3%)；年龄(33.4±11.0)岁(16～75岁)，主要集中在20～40岁(75.1%)；未婚140例(52.8%)，已婚有配偶82例(30.9%)，离异或丧偶33例(12.5%)；文化程度以大专及以上为主，为106例(40.0%)；传播途径以性传播为主，为228例(84.8%)。

2.2病毒载量检测情况 269份血浆样本中，2份(0.74%)未检测到目标，2份(0.74%)病毒载量低于检测下限(<20拷贝/mL)，其余样本病毒载量为23～1.76×106拷贝/mL，对数平均值为(4.43±0.79)log/mL。93.69%(252/269)样本的病毒载量≥103拷贝/mL，其中103～104拷贝/mL 46份(17.10%)，104～105拷贝/mL 153份(56.88%)，105～106拷贝/mL 49份(18.22%)，≥106拷贝/mL 4份(1.49%)。不同性别、年龄、婚姻状况、文化程度、传播途径的新发现HIV-1感染者的病毒载量水平构成情况比较，差别无统计学意义(P>0.05，表1)。

表1 不同特征人群血浆HIV病毒载量基线检测结果构成情况

Tab 1 Distribution of plasma HIV viral load in different groups

n(%)

2.3外周血CD4+T淋巴细胞和CD4+/CD8+比值检测情况 269例中，CD4+细胞计数范围为3～1 736 μL-1，平均值为(423±219)μL-1，中位数为397 μL-1。半数以上(61.7%，166/269)样本的CD4+细胞≥350 μL-1，29例(10.8%)<200 μL-1。CD4+/CD8+比值范围为0.01～1.95，平均值为(0.39±0.23)，中位数为0.33，大部分样本(77.0%，207/269)CD4+/CD8+比值<0.50，仅5例(1.9%)CD4+/CD8+比值≥1.0(表2)。

表2 外周血CD4+T淋巴细胞和CD4+/CD8+检测情况

Tab 2 Distribution of peripheral blood CD4+T-lymphocytes and CD4+/CD8+

CD4+细胞数量μL-1n(%)<20029(10.8)200～35074(27.5)350～50085(31.6)>50081(30.1)合计269(100.0)CD4+/CD8+比值n(%)<0.2584(31.2)0.25～0.50123(45.7)0.50～1.057(21.2)>1.05(1.9)合计269(100.0)

2.4血浆病毒载量与外周血T淋巴细胞数量相关性 对265例血浆病毒载量在检测限范围内的样本进行分析，结果显示：血浆病毒载量值不同，外周血CD3+T淋巴细胞(CD3+细胞)总数、CD8+T淋巴细胞(CD8+细胞)计数差别无统计学意义(P>0.05)；病毒载量值越高，则CD4+细胞数量越少、CD4+/CD8+比值越低，差别有统计学意义(P<0.05，表3)。Spearman检验结果显示，血浆病毒载量对数值与CD3+细胞总数、CD8+细胞计数无显著相关性，与CD4+细胞数量(r=-0.276，P<0.01)和CD4+/CD8+比值(r=-0.355，P<0.01)呈负相关。

3 讨 论

本研究对HIV-1感染者在抗体确证阳性后2周内采集血样进行血浆HIV病毒载量及外周血T淋巴细胞检测，能较好地反映HIV-1感染者在接受高效抗逆转录病毒治疗前体内病毒复制和机体细胞免疫水平的初始状况。98.51%(265/269)的研究对象血浆中可检测到病毒核酸，病毒载量平均值为4.42 log/mL，主要集中在4～5 log/mL，提示绝大多数新发现HIV-1感染者体内HIV病毒有不同程度复制，且大部分感染者体内病毒复制活跃，与文献报道基本一致[1]。Mellors等报道，基础HIV-1 RNA水平可以预测感染者发展成为AIDS及死亡的风险。基础HIV-1 RNA 水平高于30 000 拷贝/mL的人群中，6年内有80%发展成为AIDS，70%死于AIDS[2]。据此推测，本次调查中135例(50.2%)血浆HIV病毒载量高于30 000 拷贝/mL的感染者，倘若不及时进行治疗，很有可能在6年内发病。张超等报道HIV/AIDS患者接受抗病毒治疗后影响血浆病毒载量水平的有民族、教育程度、传播途径等因素[3]。本研究中，不同性别、年龄、婚姻状况、文化程度和传播途径的新发现HIV-1感染者的病毒载量基线检测结果构成情况无差别，提示HIV病毒在未接受抗病毒治疗的感染者群体中的复制不受上述因素的影响。

表3 不同病毒载量HIV-1感染者外周血T淋巴细胞检测情况

与病毒载量<103拷贝/mL组比较，★：P<0.05；与病毒载量103～104拷贝/mL组比较，▲：P<0.05；与病毒载量104～105拷贝/mL组比较，◆：P<0.05；与病毒载量≥105拷贝/mL组比较，●：P<0.05.

外周血T淋巴细胞亚群测定是检测机体细胞免疫功能的重要指标，HIV感染人体后攻击、破坏CD4+细胞，造成CD4+细胞进行性减少，而CD8+细胞异常激活呈现增长趋势，导致CD4+/CD8+比值倒置。越来越多的研究证据表明，CD4+/CD8+比值可作为评估病毒学成功抑制的HIV感染者临床预后以及非AIDS相关并发症风险的指标[4]。本研究结果提示，血浆病毒载量与外周血CD3+T淋巴细胞总数、CD8+细胞计数无统计学意义上的相关性；血浆病毒载量对数值与外周血中CD4+细胞数量呈总体负相关，与国内相关报道一致[5]；血浆病毒载量越高，CD4+/CD8+比值越低，与季亚勇等的报道不同[6]。本研究的调查对象CD4+细胞平均值为423 μL-1，CD4+细胞<200 μL-1者占10.8%，同比分别高于、低于欧阳雪等的报道[7]。结果不同，从侧面反映了近3年来厦门市在艾滋病扩大检测覆盖面、增加高危人群检测频率等方面工作略见成效，更多HIV感染者在感染早期就得以确诊。

病毒载量检测费用高，且对实验室条件和检测人员素质要求较高。我国目前对HIV/AIDS患者抗病毒治疗前开展血浆病毒载量基线评估未作强制要求，只是建议有条件者进行检测[8]。有报道认为，根据病毒载量与CD4+细胞数量的负相关性，检测CD4+细胞在一定程度上可以间接评价病毒载量水平[9]。笔者则认为，二者虽然存在负相关性，但结果并非完全匹配，CD4+细胞数量反映机体免疫功能，病毒载量反映病毒复制活跃程度，故CD4+细胞检测不能替代病毒载量检测。本研究中，26例感染者CD4+细胞≥350 μL-1，而病毒载量>105拷贝/mL，这部分感染者虽然免疫功能未受到明显破坏，但体内病毒复制活跃、传染性高，如果仅以首次CD4+细胞检测结果评估抗病毒治疗的必要性，可能会忽略这部分感染者。有研究表明，在用于指示一线抗逆转录病毒治疗的起始、评估效果时，联合应用病毒载量检测比单独使用CD4+细胞计数效果更好[10]，应根据当地的社会经济发展水平选择合适的检测技术。厦门作为经济发展水平较好的地区，应考虑为HIV感染者提供抗病毒治疗前病毒载量基线检测服务，以便于观测其抗病毒治疗后病毒抑制的效果，更好地指导其抗病毒治疗。

综上所述，厦门市大部分新发现HIV-1感染者体内HIV病毒复制活跃。作为社会经济发展水平较好的地区，应考虑联合应用病毒载量和外周血T淋巴细胞基线检测结果指导抗病毒治疗和观测抗病毒治疗效果。