饲料中添加芦荟粉对哲罗鲑生长和血清生化指标的影响

张洪，刘永虎，赵学伟，王常安，陆绍霞，刘红柏，徐奇友

（1.中国水产科学研究院黑龙江水产研究所，黑龙江 哈尔滨 150070；2.大连市现代海洋牧场研究院，辽宁 大连 116087；3.湖州师范学院，浙江 湖州 313000）

近年来，免疫增强剂在水产养殖上的应用越来越广泛[1]。其中，中草药免疫增强剂比疫苗和抗生素等药物更具有潜在的优势。中草药价格低廉，分布广泛，容易获取。相比较而言，疫苗价格较高，适用受限，操作繁琐，并不适用于各种疾病[2]。抗菌药物和消毒剂的滥用会明显产生抗菌菌株[3]。因此，中草药免疫增强剂能增强机体的非特异性免疫防御机制，成为有效的控制鱼类疾病的替代方法。

芦荟的药理活性和生物活性组分较多，主要有蒽醌类物质、多肽、多糖、有机酸、氨基酸、维生素、矿物质、生物活性酶等[4]，其主要功效成分是蒽醌类化合物和多糖（约占总固体质量的60%以上）[5]。已有研究表明，芦荟具有抗菌、抗病毒、抗衰老、健胃缓泻等作用[6]。芦荟在鱼类中的应用研究主要集中在生长和免疫方面[7-15]，但是，不同种类间的研究结果差异较大。哲罗鲑Hucho taimen 为我国土著鲑科鱼类代表种，其规模化养殖已获成功，但有关其免疫增强剂的资料缺乏。本试验通过研究芦荟粉对哲罗鲑生长、免疫和抗氧化力的影响，以期丰富鲑鳟鱼类的中草药免疫增强剂的研究资料，并为研制哲罗鲑免疫增强剂提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

试验饲料用鱼粉和豆粕为蛋白源，鱼油和磷脂为脂肪源。饲料的配方及营养水平见表1[15]。原料均过80 目筛后用鼓型混合机混合，制粒（直径为1.5 mm），然后置于-20℃冰箱中保存待用。

试验用哲罗鲑初始体质量为（16.24±0.10）g。选取健康、规格一致的鱼体放入室内流水系统中。用基础饲料驯养14 d 后开始养殖试验。库拉索芦荟Aloe barbadensis 全叶冻干粉（规格100∶1）购自云南元江万绿生物有限公司[16]。

1.2 方法

本试验采用单因子梯度试验设计。试验分为G1～G5 处理组，芦荟冻干粉的添加量分别为0%（对照组）、0.125%、0.25%、0.5%和1.0%。每个处理设3个重复，每个重复50 尾鱼。试验鱼饲养在室内200L流水水族箱中，分别投喂G1～G5 饲料，养殖56d。水源为地下涌泉水，水温8.3～17.2℃，溶氧＞6.0mg/L。日饱食投喂2 次（9:00 和16:00）。投喂1h 后回收所残饵并烘干称重。将定量饲料投入水中1h 后回收、烘干，称重计算残饵回收率，并据此校正饲料摄入量。养殖试验结束时，鱼体饥饿24h，用苯氧乙醇（0.5mL/L）麻醉，称重，测量体长，采集样品。

每水族箱随机取4 尾鱼，尾柄部采血，4℃静置30min，3000r/min 离心15min，取上清液，装入1.5mL离心管中，放入-80℃超低温冰箱中保存待测。超氧化物歧化酶（Superoxidedismutase，SOD）和酸性磷酸酶（Acidphosphatase,ACP）的活性及丙二醛（Malondialdehyde，MDA）含量采用南京建成生物工程有限公司试剂盒测定，其中SOD 用黄嘌呤氧化酶法、MDA 以硫代巴比妥酸法、ACP 采用比色法测定。谷丙转氨酶（Alaninetransaminase，ALT）、谷草转氨酶（Aspartate aminotransferase，AST）、碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP）、血糖（Blood glucose，GLU）、总蛋白（Total protein，TP）、白蛋白（Albumin，ALB）、高密度脂蛋白（High density lipoprotein，HDL）、低密度脂蛋白（Low density lipoprotein，LDL）、胆固醇（Cholesterol CHOL）和补体C3 和C4 含量利用全自动生化分析仪（贝克曼ProCX4，美国）测定。ALT、AST 和ALP 活性采用速率法测定；TP 和ALB 含量采用化学法测定；HDL 和LDL 含量为直接法测定；GLU 和CHOL 含量用酶法测定；补体C3 和C4 用免疫比色法测定；球蛋白（Globulin,GLB）、A∶G 和AST∶ALT 为计算值。

表1 基础饲料配方及营养水平（风干基础）Tab.1 Ingredients and approximate composition of the test diets（air-dry basis）

1.3 统计分析

生物学指标计算方法如下：

增重率（Weight gain rate,WGR）（%）=100×（Wt-W0）/W0；

成活率（Survival rate）（%）=100×Nf/Ni×100；

肥满度（Condition factor）=100×Wt/Lt3；

饲料系数（Feed conversion ratio,FCR）=Wf/（Wt-W0）；

其中：Wt为鱼终末体质量（g）；W0为鱼初始体质量（g）；Nf为终末尾数；Ni为初始尾数；Lt试验鱼终末体长（cm）；Wf为饲料摄入量（g）。

数据以平均值±标准差（Mean±SD）表示。用软件SPSS for Windows 23.0 进行单因素方差分析和Duncan’s 多重比较，显著性水平P=0.05。

2 结果与分析

2.1 饲料中添加芦荟粉对哲罗鲑生产性能的影响

由表2 可知：试验结束时，各处理组哲罗鲑幼鱼的增重率、特定生长率、成活率、肥满度和饲料系数均差异不显著（P＞0.05）。可见，饲料中添加芦荟粉对哲罗鲑幼鱼生产性能无明显的影响（P＞0.05）。

2.2 饲料中添加芦荟粉对哲罗鲑抗氧化力指标的影响

由表3 可知：随着饲料中芦荟粉水平的增加，哲罗鲑血清超氧化物岐化酶（SOD）活力明显升高（P＜0.05）。饲料中高比例添加芦荟粉（1.0%）时，血清SOD 活性与对照组差异不显著（P＞0.05）。芦荟粉添加量为0.25%时血清丙二醛含量最小，而添加量为0.5%和1.0%时，丙二醛含量与对照组差异不明显（P＞0.05）。

2.3 饲料中添加芦荟粉对哲罗鲑非特异性免疫指标的影响

由表4 可知：各组间哲罗鲑的血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性、谷草和谷丙转氨酶比、酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性、补体C3、补体C4 含量均无明显变化（P＞0.05）。

2.4 饲料中添加芦荟粉对哲罗鲑血清代谢物的影响

表2 饲料中添加芦荟粉对哲罗鲑生产性能的影响Tab.2 Effects of dietary aloe powder on growth performance in taimen Hucho taimen in various groups during the experiment（n=3,±SD）

表2 饲料中添加芦荟粉对哲罗鲑生产性能的影响Tab.2 Effects of dietary aloe powder on growth performance in taimen Hucho taimen in various groups during the experiment（n=3,±SD）

注：同列中上标未标有字母表示组间差异不显著（P＞0.05）

表3 饲料中添加芦荟粉对哲罗鲑血清抗氧化力的影响Tab.3 Effects of dietary aloe powder on serum antioxidant capacity in taimen Hucho taimen in various groups（n=3,±SD）

表3 饲料中添加芦荟粉对哲罗鲑血清抗氧化力的影响Tab.3 Effects of dietary aloe powder on serum antioxidant capacity in taimen Hucho taimen in various groups（n=3,±SD）

注：同行中标有不同字母的平均值间差异显著（P＜0.05）；标有相同字母者或未标有字母者表示组间差异不显著（P＞0.05）,下同

表4 饲料中添加芦荟粉对哲罗鲑非特异性免疫指标的影响Tab.4 Effects of dietary aloe powder on serum non-specific immunity in taimen Hucho taimen in various groups（n=3,±SD）

表4 饲料中添加芦荟粉对哲罗鲑非特异性免疫指标的影响Tab.4 Effects of dietary aloe powder on serum non-specific immunity in taimen Hucho taimen in various groups（n=3,±SD）

表5 饲料中添加芦荟粉对哲罗鲑血清代谢物的影响Tab.5 Effects of dietary aloe powder on serum indices in taimen Hucho taimen in various groups（n=3,±SD）

表5 饲料中添加芦荟粉对哲罗鲑血清代谢物的影响Tab.5 Effects of dietary aloe powder on serum indices in taimen Hucho taimen in various groups（n=3,±SD）

由表5 可知：各组间哲罗鲑的血清总蛋白、球蛋白、白蛋白、白球比、血糖、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白和胆固醇含量均差异不显著（P＞0.05）。

3 讨论

3.1 饲料中添加芦荟粉对鱼类生长性能的影响

一般认为，芦荟粉作为一种饲料添加剂可改善鱼类的生长性能。饲料中添加1%～2.5%芦荟粉后，鲤Cyprinus carpio 摄食量增加，增重率明显提高[8]。芦荟粉促进鱼类生长的原因可能是：抑制肠道内有害微生物的繁殖和生长；提高机体的免疫力；含有促生长的化学成分[17-19]。然而，芦荟粉促生长的作用因鱼的种类而有所不同。对西伯利亚鲟Acipenser baerii[15]、虹鳟Oncorhynchus mykiss[20]等鱼类的研究表明，饲料中添加芦荟粉并不能提高其生长性能。本研究也表明，饲料中添加芦荟粉对哲罗鲑的增重率、饲料系数、成活率和肥满度无显著影响（P＞0.05）。同时，哲罗鲑血清中的总蛋白、白蛋白、胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白和血糖均未发生明显改变。相比而言，罗非鱼Oreochromis niloticus[13]、鲫Carassius auratus[21]等饲喂芦荟粉后血清中胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平较低，高密度脂蛋白含量升高，进而促进脂类等营养物质的吸收。因此，芦荟粉不具有促生长效应的原因可能与鱼的种类差异有关。饲料中高比例、长期地添加芦荟粉，芦荟中的芦荟素和蒽醌类化合物也会对机体产生不良影响。长期用芦荟粉饲喂大鼠Rattus norvegicus 时生长减缓，肾滤过通透性增强，出现肾炎、肾功能障碍等症状[22]。

3.2 饲料中添加芦荟粉对鱼类免疫力和抗氧化力的影响

芦荟中的多糖和蒽醌类化合物具有增强鱼体免疫力的作用。饲料中添加0.1%～0.5%芦荟粉后，许氏平鲉Sebastes schlegeli 幼鱼头肾吞噬细胞化学发光反应显著下降，成活率显著升高，有效控制了溶藻弧菌Vibrio alginolyticus 感染[3]。饲料中添加1%～2.5%芦荟粉也可改善鲤的抗应激能力[8]。Zodape[23]发现，饲料中添加芦荟粉显著降低肌肉和肝脏的谷丙转氨酶、谷草转氨酶、酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性，有效保护了肝和肌肉组织。但是，对虹鳟的研究表明，饲料中添加0.5%芦荟粉后，鱼体的免疫并没有改善，表现为白细胞呼吸爆发，血清溶菌酶、补体水平和免疫相关基因等表达量均无明显变化[10]。类似的是，添加芦荟粉对哲罗鲑血清球蛋白、补体C3 和补体C4 含量、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性亦无显著影响（P＞0.05）。可见，饲喂0.125%～1.0%芦荟粉可能对哲罗鲑的非特异性免疫改善程度有限。然而，饲料中添加芦荟粉后，哲罗鲑的抗氧化力增强，血清的超氧化物岐化酶活性显著升高和丙二醛含量显著降低（P＜0.05），这与罗非鱼[13]、西伯利亚鲟[15]等的研究结果一致，这可能是芦荟粉抑制鱼体脂类过氧化的结果。也有研究者认为，芦荟粉提高抗氧化力是提高了维生素C 和维生素E 生物利用率的结果[24]。

总之，饲料中添加芦荟粉（0.125%～1.0%）对哲罗鲑幼鱼的促生长效应不明显；对血清的非特异性免疫力和营养代谢物亦无显著影响。然而，饲料中添加0.25%和0.5%芦荟粉显著提高了血清抗氧化能力，因此这种调节机制需要进一步研究。