右美托咪定对大鼠脑缺血再灌注晚期胶质瘢痕的抑制作用分析

马家玲 高艳平（通讯作者）

（苏州大学附属张家港医院 江苏 张家港 215600）

右美托咪定(Dexmedetomidine，DEX)是一种临床中常见的辅助镇静药物。近年来多数动物实验和临床研究均表明DEX 对脑缺血再灌注损伤具有一定保护作用[1]。但DEX 对脑缺血再灌注损伤晚期星形胶质瘢痕的形成的影响，相关报道较少，因此本研究通过给予DEX 来探究其对胶质瘢痕的抑制作用。

1.实验方法

1.1 动物模型及分组

90 只健康雄性SD 大鼠（300±20g），购置于xxx 实验动物有限公司，体重在250 ～300g，日龄49 ～63d；随机分为空白组，模型组和实验组。其中空白组仅接受右侧颈总、内、外动脉游离术，而另外两组则采用改良线栓法[2]建立短暂性大脑中动脉阻塞模型。实验组于栓塞前30min 予以腹腔注射DEX 20ug/kg，而空白组及模型组则予以同等剂量的生理盐水。

1.2 行为学评分

参照NDS 评分[3]于术后1 天进行。

1.3 脑梗死体积

术后1 天将大鼠断头取脑，行TTC 染色，拍照，ImageJ 进行测量，并计算脑梗死体积[4]。

1.4 Westernblot 检测

于术后1d、7d、14d 取梗死周围脑皮质检测。经过裂解、离心取得上清蛋白，BCA 法测定并调节蛋白浓度。加热变性后的蛋白经电泳，转膜封闭后分别加入GFAP(1：500)、neurocan(1：500)、β-actin(1：5000)等一抗，于4℃冰箱孵育过夜，经TBST 洗膜后，加入HRP 标记的二抗（1：5000）室温孵育1h，再次洗膜。经ECL 化学发光成像系统中摄像并分析。

1.5 统计学方法

数据采用SPSS21.0统计学软件分析处理，计数资料采用率（%）表示，行χ2检验，计量资料用均数±标准差（±s）表示，行t检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2.结果

2.1 行为学评分及脑梗死体积

术后1d，与空白组行为学评分（0.13±0.13）分比较，模型组行为学评分（1.88±0.13）分更高（P＜0.05）、实验组行为学评分（2.5±0.19）分更高（P＜0.05）；且与空白组脑梗死体积（0±0）%比较，模型组脑梗死体积（27.42±0.65）%、实验组脑梗死体积（23.8±1.45）%差异显著（P＜0.05）。同时，实验组行为学评分（2.5±0.19）分更高于模型组（1.88±0.13）分、脑梗死体积（23.8±1.45）%显著小于模型组（27.42±0.65）%（P＜0.05），见表1。

表1 三组行为学评分及脑梗死体积的比较（±s）

表1 三组行为学评分及脑梗死体积的比较（±s）

注：与空白组比较，模型组行为学评分t=42.569、脑梗死体积t=188.655，实验组行为学评分t=46.039、脑梗死体积t=73.405，*P ＜0.05；与模型组比较，行为学评分t=12.044，脑梗死体积t=10.188，#P ＜0.05。

组别 n 行为学评分(分) 脑梗死体积(%)空白组 30 0.13±0.13 0±0模型组 30 1.88±0.13* 27.42±0.65*实验组 30 2.5±0.19*# 23.8±1.45*#P＜0.05 ＜0.05

2.2 GFAP 及neurocan 的表达

与空白组术后1d GFAP（0.20±0.02）、Neurocan（0.20±0.05）相较，模型组术后1d GFAP（0.24±0.03）、Neurocan（0.29±0.08）及实验组术后1d GFAP（0.21±0.07）、Neurocan（0.23±0.07）皆见有增高趋势，但增高差异不显著（P＞0.05）；与空白组术后7d 、14d 相较，模型组术后7d GFAP（0.57±0.09）、Neurocan（0.63±0.07）及实验组术后7d GFAP（0.50±0.09）、Neurocan（0.51±0.12）表达，术后14d模型组GFAP（0.59±0.09）、Neurocan（0.55±0.1） 及 实 验 组GFAP（0.51±0.07）、Neurocan（0.44±0.1）表达更明显（P＜0.05）；但本组之间比较，模型组、实验组7d 与14d 之间无显著差异（P＞0.05）；同时相较于模型组7d、14d 的GFAP、Neurocan，实验组7d、14d的GFAP、Neurocan 明显下降（P＜0.05），见表2。

表2 三组GFAP、neurocan 的灰度值比较（±s）

表2 三组GFAP、neurocan 的灰度值比较（±s）

注：与空白组比较，模型组7d GFAP t=22.357、14d GFAP t=16.941,7d Neurocan t=18.070、14d Neurocan t=12.800，实验组7d GFAP t=10.983、14d GFAP t=13.101,7d Neurocan t=9.014、14d Neurocan t=7.694，*P ＜0.05；与模型组比较，实验组7d GFAP t=2.460、14d GFAP t=3.138,7d Neurocan t=3.863、14d Neurocan t=3.479，#P ＜0.05。

组别 GFAP Neurocan 1d 7d 14d 1d 7d 14d空白组 0.20±0.02 0.22±0.07 0.20±0.05 0.20±0.05 0.23±0.07 0.23±0.05模型组 0.24±0.03 0.57±0.09* 0.59±0.09* 0.29±0.08 0.63±0.07* 0.55±0.1*实验组 0.21±0.07 0.50±0.09*# 0.51±0.07*# 0.23±0.07 0.51±0.12*# 0.44±0.1*#P ＞0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＞0.05 ＜0.05 ＜0.05

3.讨论

本研究通过比较大鼠脑缺血再灌注损伤后神经行为学评分及脑梗死体积发现，在脑损伤早期，DEX 具有一定的脑保护作用，这与之前的报道是一致的。目前认为，早期胶质瘢痕可防止损伤的进一步扩大，对脑功能的恢复具有积极的作用，而随着胶质瘢痕的逐渐成熟，在损伤后期其反而会抑制轴突的生长从而阻碍神经功能的恢复。GFAP 作为星形胶质细胞的标志性蛋白，其表达上调，是星形胶质细胞活化和胶质瘢痕形成的重要标志。而neurocan 主要由成熟胶质瘢痕产生，会抑制轴突的生长。这两种蛋白在脑损伤后表达均有明显的升高，而给予DE X 后它们的表达会有所下降，说明D EX 在一定程度上抑制了星形胶质细胞的过度活化，且减少了有害蛋白的表达。综上所述，DEX 对脑缺血再灌注损伤早期具有脑保护作用，并可能在一定程度上会减少晚期胶质瘢痕的产生。