银翘解表口服液提取工艺优选研究

李保仁 孙凤利

北京怀柔医院，北京101400

银翘解表口服液是我院临床使用多年的医院制剂，其处方由银花、连翘、桑叶、菊花、薄荷、淡竹叶、板蓝根、蒲公英等八味中药材组成，具有疏风清热、泻火解表功效，治疗风热型感冒疗效显著。为有效利用药材资源，缩短生产周期，降低生产成本，增加制剂中有效成分含量，提高制剂提取工艺的科学性，本研究以方中主药金银花、连翘中具有显著功效的成分绿原酸［1］、连翘酯苷［2］为控制指标，在加水量、煎煮时间、煎煮次数、醇沉浓度等不同条件下，采用正交试验法［3］和高效液相色谱法［4］，优选银翘解表口服液最佳提取工艺，为科学生产提供依据。

1 仪器与材料

Agilent1200 型高效液相色谱仪（美国，Agilent 公司）；Agilent 色谱工作站；BT25S 型赛多利斯电子天平。甲醇（色谱纯，批号MS1923804，Merck 公司），乙腈（色谱纯，批号AS184207，Merck 公司）；无水乙醇、磷酸为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）；实验用水为纯化水。

银花、连翘、桑叶、菊花、薄荷、竹叶、蒲公英、板蓝根等八味中药材（北京燕北饮片厂）

绿原酸（中国食品药品检定研究所，批号：110753-201817）、连翘酯苷（中国食品药品检定研究所，批号：111810-201806）

2 方法与结果

2.1 色谱条件

2.1.1 绿原酸。色谱柱：Kromasil C18 柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈：0.4%磷酸溶液（13：87）；检测波长：327nm；流速：1.0mL/min。

2.1.2 连翘苷。色谱柱：Kromasil C18 柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈：水（25：75）；检测波长：278nm；流速：1.0mL/min。

2.2 溶液制备

2.2.1 标准品。分别精密称取干燥至恒重的绿原酸对照品3.26mg、连翘苷对照品15.25mg，放入25mL 的容量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，各精密量取1mL，至10mL 容量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度作为对照品溶液。

2.2.2 供试品。按处方10 倍量称取各味药材，按表1、表2 条件进行提取试验，分别按药材总量加8 倍、10倍、12 倍量自来水，依次煎煮0.75 小时、1 小时、1.5 小时，各煎煮1 次、2 次、3 次，以含乙醇量60%、70%、80%乙醇提取浓缩液，定容至1000mL，精密量取10mL，浓缩至干，加50%甲醇定容于50mL 容量瓶中，超声提取［5］30 分钟，补50%甲醇至刻度，摇匀，放置，经0.45μm 滤膜过滤，得供试品溶液。

2.3 标准曲线的绘制 分别取以上浓度的绿原酸、连翘苷标准溶液5.0、10.0、15.0、20.0、25.0μL，注入高效液相色谱仪，得其标准色谱图见图1、图2，测定其峰面积，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得绿原酸回归方程y=0.0348x+0.0004，线性相关系数0.9995；连翘苷回归方程y=0.0618x+0.0242，线性相关系数0.9996。

2.4 样品含量测定 取不同条件下提取得到的药品溶液，按2.2 拟定试验方法，得供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定其峰面积，分别由标准曲线计算被测溶液中的绿原酸、连翘苷的含量。

实验以煎煮时间、加水量、煎煮次数、醇沉浓度为考察因素，各按3 种不同水平来考察，分别按药材总量加8 倍、10 倍、12 倍自来水，依次煎煮0.75 小时、1小时、1.5 小时，各煎煮1 次、2 次、3 次，以含60%、70%、80%的乙醇提取。见表1。

按表2 中正交试验设计的因素水平，分别提取、浓缩、净化精制，按2.4 样品含量测定方法，测得各样品中绿原酸、连翘苷的含量。

因处方中金银花、连翘均为主药，其成分绿原酸、连翘酯苷皆为重要有效成分，X1、X2指标重要性相当，因此取加权系数B1=B2=1，对以上数据进行逐一分析，其中K 为各因素在各水平下的平均值，R 为极差，X 为总平均值，BR/X 为相对极差。见表3。

根据各因素相对极差BR/X 项可知，在X1中各因素从大到小依次为C-A-B-D，即各因素重要性依次为煎煮次数＞煎煮时间＞加水量＞醇沉浓度，在X2中各因素从大到小依次为A-B-C-D，即各因素重要性依次为煎煮时间＞加水量＞煎煮次数＞醇沉浓度，综合X1，X2考虑各因素相对极差之和∑BR/X，可知各因素重要程度依次为A-C-B-D，即各因素重要性依次为煎煮时间＞煎煮次数＞加水量＞醇沉浓度。根据各因素相对极差之和，银翘解表口服液最佳提取工艺为A3C2B2D2，即加10 倍量水，煎煮2 次，每次1.5 小时，用70%乙醇醇沉为最佳提取工艺。

图1 绿原酸标准色谱图

图2 连翘苷标准色谱图

表1 试验因素水平表L9（34）

表2 正交试验设计及结果

表3 各指标单一分析及综合比较表

3 讨论

在实施新工艺生产后，不仅缩短了产品生产周期，提高了制剂产量，节约了水电气的资源，减少了乙醇的用量，降低了生产成本，患者在使用新工艺生产的制剂后，发热、咽痛等症状较以往减轻明显，病程较以往平均缩短一天，相应的用药量也较以往减少五分之一左右。之所以出现这种现象，可能与实施新工艺后，制剂中绿原酸、连翘酯苷等有效成分含量提高呈正相关。通过对银翘解表口服液提取工艺的优选实验，充分达到了有效利用药材资源，缩短生产周期，降低生产成本，增加制剂中有效成分含量，提高药品疗效，提高制剂提取工艺的科学性的目的，由此，本研究认为银翘解表口服液提取工艺优选值得推广。