高效液相色谱法测定黄瓜果实中6-苄基腺嘌呤残留量

摘 要：建立了测量黄瓜果实中6-苄基腺嘌呤残留量的高效液相色谱法。样品经甲醇提取，C18固相萃取柱净化，浓缩定容后上样分析。该方法在0.04～10.0 μg/mL范围内线性良好，R2为0.999 8，检出限为0.1 mg/kg，定量限为0.2 mg/kg，精密度为0.90%，回收率在86.77%～96.45%范围内，重复性为3.69%。该方法适用于黄瓜果实中6-苄基腺嘌呤残留量的测定。

关键词：6-苄基腺嘌呤（6-BA）;黄瓜;高效液相色谱法

苄基腺嘌呤（6-BA）是一种植物生长调节剂，属于人工合成细胞分裂素，在水果、蔬菜的保鲜等方面有重要应用。6-BA在黄瓜种子发芽、幼苗幼果生长等过程中也有应用，可促进黄瓜果实生长发育，提高果实品质和产量[1-2]。但6-BA具有一定毒性，人体过量摄入会刺激皮肤黏膜，出现食道和胃黏膜损伤、恶心、呕吐等症状[3]。

因此检测黄瓜果实中6-BA残留量很有必要，蔬菜中6-BA的检测主要有高效液相色谱法和高效液相色谱-质谱法等方法[4-5]。本试验利用甲醇提取，固相萃取柱净化，高效液相色谱-标准曲线外标法定量，操作简便、准确性好，可用于黄瓜果实中6-BA残留量的测定。

1 材料与方法

1.1 试剂耗材与仪器

6-苄基腺嘌呤标准品（98.51%，Dr.Ehrenstorfer）;甲醇（色谱级，Dikma）;乙酸铵（色谱级，科密欧）;冰乙酸（分析纯，开封化学试剂总厂）;C18固相萃取柱（1 g/6 mL，上海安谱实验科技股份有限公司）。

U3000高效液相色谱仪（Thermo）;BSA224S-CW电子天平（赛多利斯）;3K15高速冷冻离心机（Sigma）;旋转蒸发仪（IKA）;KQ-400DE数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）;JYL-Y85高速破壁调理机（九阳）。

1.2 仪器条件

色谱柱：XBridge?C18柱，4.6 mm×

250 mm×5 μm（waters）;检测器：紫外检测器;波长：267 nm;流动相：甲醇+乙酸铵溶液（0.02 mol/L）=

50+50;柱温：30 ℃;流速：1.0 mL/min;

进样量：10 μL。

1.3 标准溶液的配制

准确称取6-BA标准品0.010 0 g，用甲醇溶解定容至100 mL，混匀，即得浓度为100 μg/mL的溶液。分别精密量取100 μg/mL溶液10.0、5.0 mL和2.0 mL，用甲醇定容至100 mL，即得浓度分别为10.0、5.0 μg/mL和2.0 μg/mL的标准储备溶液。

分别精密量取2.0 μg/mL的标准储备溶液5.0、2.0、1.0、5.0 mL和

2.0 mL，用甲醇定容至10、10、10、100 mL和100 mL，即得浓度分别为1.0、0.4、0.2、0.1μg/mL和0.04 μg/mL的标准溶液。

1.4 样品的制备和测定

称取10 g（精确到0.001 g）均质后的样品于50 mL离心管中，加20 mL甲醇，超声提取15 min，以10 000 r/min离心10 min，上清液转入200 mL梨形瓶中，樣品再次用20 mL甲醇超声提取15 min，离心合并上清液，于

50 ℃旋转蒸发至尽干，残液以2 mL/min的流速过预先活化好的固相萃取柱，用少量水洗涤梨形瓶，洗液过固相萃取柱，再用5 mL水洗涤固相萃取柱，去除杂质后用甲醇洗脱并定容至

5 mL，混匀后过0.22 μm微孔滤膜，供检测用。

2 结果与分析

2.1 色谱图

将样品按照“1.2仪器条件”进样检测，所得图谱如图1所示，在目标物时间附近不出峰，为阴性样品。将标准储备液按照“1.2仪器条件”进样检测，目标物在7.490 min出峰，见图2。

2.2 线性范围和检出限、定量限

选取浓度为0.04、0.1、02、0.4、1.0、2.0、5.0 μg/mL与10.0 μg/mL的6-BA标准溶液，按“1.2仪器条件”进样测峰面积，绘制标准曲线，进行线性分析，结果表明该方法在0.04～10.0 μg/mL线性范围内线性良好，见表1。检出限定量限的确定方法：向阴性样品中加入从低到高不同浓度的标准溶液进行测定，以3倍和10倍信噪比（S/N）对应的6-BA浓度作为检出限和定量限。

2.3 精密度试验

用0.4 μg/mL的标准溶液连续进样测定8次，测定峰面积，计算精密度。结果见表2，测得精密度为0.90%，符合要求。

2.4 回收率试验

向10 g阴性样品中添加一定量标准溶液，每个添加水平设定3次平行，结果见表3，加标水平在99.4951 μg/mL（0.5 mL）时的色谱图见图3，

平均回收率在86.77%～96.45%内，符合回收率要求。

3 结论

本试验采用高效液相色谱法测定黄瓜果实6-BA残留量，在0.04～10.0 μg/mL范围内建立标准曲线，确定方法检出限、定量限，验证了回收率、精密度、重复性等指标。该方法准确高效，满足试验要求，为黄瓜果实6-BA残留量的检测提供了有效参考。

参考文献

[1]刘运正，于洋，等.6-苄基腺嘌呤对黄瓜幼果生长及其激素含量的影响[J].北方园艺，2006（6）：13-15.

[2]张平.GA和6-BA对黄瓜产量和果实生长发育的影响[D].沈阳：沈阳农业大学，2005.

[3]穆娇娇，崔相勇.高效液相色谱-串联质谱法检测豆芽中的6-苄基腺嘌呤含量[J].食品安全导刊，2016（8）：66-67.

[4]王成梅，张广昊.液相色谱-质谱联用仪测定蔬菜中6-苄基腺嘌呤的研究[J].食品安全导刊，2016（9）：139-140.

[5]马雪丰，陈果，等.QuEChERS-高效液相色谱法对蔬菜中6-苄基腺嘌呤残留量的测定[J].农药，2016（2）：124-126.

作者简介：袁晓转（1988—），女，河南洛阳人，硕士，助理工程师。研究方向：食品检测。