循环肿瘤DNA在胃肠间质瘤诊治中的应用

柳长明 崔国利 潘宁 赵广阳 程开

摘 要 目的：探讨循环肿瘤DNA（circulating tumor DNA， ctDNA）在胃肠间质瘤诊治中的应用。方法：选取80例胃肠间质瘤患者，所有患者均接受外周ctDNA检测，通过实时定量PCR（qRT-PCR）和高通量测序法分析胃肠间质瘤基因病变类型与性别、肿瘤原发部位、肿瘤直径、Fletcher分级和核分裂象之间的关系。结果：ctDNA与性别无明显相关性（P>0.05），ctDNA与肿瘤原发部位、肿瘤直径、Fletcher分级和核分裂象有显著相关性（P<0.05）；ctDNA阳性患者无进展生存期低于阴性患者（P<0.05）。结论：ctDNA可能为胃肠间质瘤患者预后不良因素，可作为动态监测指标，临床意义显著。

关键词 循环肿瘤DNA 胃肠间质瘤 诊治

中图分类号：R735 文献标志码：B 文章编号：1006-1533（2020）15-0058-03

Application of ctDNA in the diagnosis and treatment of gastrointestinal stromal tumors*

LIU Changming1**， CUI Guoli2， PAN Ning3， ZHAO Guangyang4， CHENG Kai5（1. Department of General Surgery， Shenzhen Samii Medical Center， Guangdong Shenzhen 518118， China； 2. Department of Clinical Laboratory； 3. B Ultrasound Room； 4. the Third Department of Cardiovascular Internal Medicine； 5. the Second Department of Gastroenterology， the First Hospital affiliated to Jiamusi University， Heilongjiang Jiamusi 154007， China）

ABSTRACT Objective： To investigate the application of circulating tumor DNA （ctDNA） in the diagnosis and treatment of gastrointestinal stromal tumors （GIST）. Methods： Eighty patients with GIST were selected and underwent peripheral blood ctDNA detection. The relationship between the type of GIST gene lesions and sex， oncology primary site， oncology diameter， Fletcher grade， and mitotic figures were analyzed by real-time quantitative PCR （qRT-PCR） and high-throughput sequencing. Results： There was no significant correlation between ctDNA and gender （P>0.05）， but there was significant correlation between ctDNA and oncology primary site， oncology diameter， Fletcher grade and mitotic figures （P<0.05）. Progression-free survival was lower in ctDNA-positive patients than in ctDNA-negative patients （P<0.05）. Conclusion： CtDNA may be a poor prognostic factor for patients with gastrointestinal stromal tumors and can be used as a dynamic monitoring index and has significant clinical significance.

KEY WORDS circulating tumor DNA； gastrointestinal stromal tumor； diagnosis and treatment

胃肠间质瘤（gastrointestinal stromal tumors， GIST）是临床常见的一种肿瘤，发生于消化道的任何部位，胃肠间质瘤治疗首选方法是手术，但术后复发或转移是影响患者无进展生存期的重要因素，通常在术后予以伊马替尼、舒尼替尼等辅助治疗[1]。现阶段监测术后肿瘤复发和转移的方法有螺旋CT、超聲内镜等，但时效性差，发现病灶早期转移效果不佳，患者易错过最佳治疗时机。循环肿瘤DNA（circulating tumor DNA， ctDNA）可在早期肿瘤进展异常变化，用于监测胃肠间质瘤早期诊治效果明显，其具体是指肿瘤细胞DNA经脱落或者当细胞凋亡后释放进入到循环系统，随着生物学技术的发展，通过监测血液中ctDNA发现肿瘤复发或转移成为可能[2]。ctDNA从肿瘤细胞的体细胞病变中得到，是一种具有典型特征的肿瘤生物标记物。为进一步准确评价ctDNA在胃肠间质瘤诊治中的应用，本次研究选取我院80例胃肠间质瘤患者，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2019年1月—2020年1月深圳市萨米医疗中心普外科收治的80例胃肠间质瘤患者，所有病例均接受胃镜或肠镜检查，经病理学证实确诊。男46例，女34例；年龄28～79岁，平均年龄（55.72±4.63）岁；肿瘤部位：胃41例、小肠29例、十二指肠5例、结直肠3例、肠系膜2例；Fletcher分级标准：低危18例、中危27例、高危35例。所有患者均签署知情同意书。

1.2 方法

所有患者均接受外周血ctDNA检测，通过高通量（next generation sequencing， NGS）方法进行定量分析。ctDNA检测方法如下：采取外周血，运用实时定量PCR（real-time quantitative PCR， qRT-PCR）法提取单个核细胞RNA。引物序列：正义链5-AGCCACCTCTrCGACAAC-3，反义链5-GACAGCCTCCTcTTCCTCT-3，以b-Actin作为内参照。扩增以95 ℃预变性10 min，后94 ℃变性15 s，58 ℃退火1 min，72 ℃延伸30 s，共45个循环。根据Ct值来判断对定量DOGl的表达水平。

1.3 观察指标及判定标准

治疗后由专人通过微信、电话等方式随访，观察患者有无出现复发或病灶转移。低危、中危和高危患者每月定期采集外周血样本。高危患者相对低危、中危患者病灶转移及复发风险更高，因此每月接受CT检查次数2次，低危、中危患者1次。以DOGl表达量最高为3×10-5为参考标准，高于该数值者为ctDNA阳性。

1.4 统计学处理

应用统计学软件SPSS 22.0对本组研究进行数据处理，计数资料用n（%）表示，进行χ2检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ctDNA定性表达与临床病理资料相关性

80例患者中，ctDNA阳性占51.25%（41/80），阴性占48.75%（39/80）。与临床病理资料相关性进分析得出，ctDNA定性表达与性别无显著相关性，不具有统计学意义（P>0.05）；ctDNA定性表达与肿瘤原发部位、肿瘤直径、Fletcher分级和核分裂像分类有显著差异，差异具有统计学意义（P<0.05，表1）。

2.2 随访分析

对所有患者随访分析，截至2020年3月31日，无失访病例，ctDNA阳性患者无进展生存期为9.6个月，显著低于ctDNA阴性患者的13.2个月，差异具有统计学意义（χ2=5.649，P=0.016）。

3 讨论

检测外周血ctDNA作为一种液体激活形式，在未来医学研究中有着良好的发展前景，尤其是在诊断早期恶性肿瘤患者，可以准确评估患者术后预后质量、病灶复发及转移等。胃肠间质瘤是间叶组织来源肿瘤，属于消化道肉瘤，其特异性标志物是KIT和DOGl，但正常造血祖细胞也可以表达KIT[3]，含量约为85%和10%左右，因此不适合作为循环肿瘤的靶基因。从临床实践角度，难以准确获取活检穿刺标本，通过临床影像学检查对病变程度不敏感，特异性和敏感度较低，且影像学检查结果较血液学指标变化具有滞后性，因此无法实现实时动态检测[4]。现阶段监测胃肠间质瘤复发或远处转移的方法是定期CT检查，但其价格昂贵、操作复杂、放射性强[5]。本研究采用的实时动态检测方法可用于胃肠间质瘤用于患者外周血单核细胞中的表达，以期能从分子生物学水平检测出具有临床意义的循环肿瘤。因此在对肿瘤复发或转移的早期诊断应用中具有局限性。本次研究结果显示，ctDNA与肿瘤原发部位、肿瘤直径、Fletcher分级和核分裂像分类有着密切关系，在十二指肠中阳性率高于胃、小肠和结直肠；随肿瘤直径增大，阳性率表达升高；Fletcher分级高危患者中阳性率升高；核分裂像较高患者阳性率高于较低患者，差异均有统计学意义（P<0.05）。因此ctDNA检测可用于胃肠间质瘤诊治中，具有动态、无创、廉价的优点[6]，可为早期发现肿瘤复发或转移提供参考依据。

综上所述，ctDNA在胃肠间质瘤诊治中可作为动态监测指标，临床意义显著。

参考文献

[1] 赵倩， 李健. 循环肿瘤DNA在胃肠间质瘤诊治中的应用及意义[J]. 中国实用外科杂志， 2018， 38（5）： 571-574.

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