鲁山县H5、H7亚型禽流感血清学调查

任光辉

[摘 要] 为了解河南省鲁山县使用重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗免疫效果，为今后科学决策免疫程序提供依据，本文随机选取鲁山县家11个乡镇共50个场群为调查对象，采用血凝抑制试验方法对1 670份血清进行H5、H7亚型禽流感免疫抗体检测。结果显示，使用（H5+H7）二价灭活疫苗场群占64.0%，H5、H7亚型群体合格率分别为76.0%和50.0%，个体合格率分别为86.3%和59.5%;未使用（H5+H7）二价灭活疫苗的风险是使用该疫苗的3.8倍。这表明使用（H5+H7）二价灭活疫苗免疫效果较好，建议对不合格抗体的养殖场户及时补免。

[关键词] H5亚型;H7亚型;禽流感;血清学;鲁山县

[中图分类号] S855.3 [文献标识码] B [文章编号] 1674-7909（2020）21-113-2

禽流感是由A型流感病毒引起的一種禽类（家禽和野禽）传染病[1]。病毒根据血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）的抗原性不同进行分类，目前HA分为H1～H16亚型，NA分为N1～N9亚型。由H5、H7亚型毒株引起的疾病称为高致病性禽流感（HPAI），发病急，发病率和病死率可达100%，被世界动物卫生组织（OIE）列为法定通报动物疫病，被我国列为优先防控和重点防范的一类动物疫病[2]。2004年和2017年，我国分别对H5、H7亚型禽流感实行强制免疫和抗体监测，并要求采用重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗（H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株）集中免疫[3]。为了解河南省鲁山县高致病性禽流感免疫效果，制订科学合理的免疫程序，开展评价工作，正确判断禽流感防控形势，2019年10月鲁山县畜牧局组织开展本次免疫效果监测，以便提供可靠的基础数据参考。

1 材料与方法

1.1 抽样设计

抽样设计方法采用先群体抽样再个体抽样[4]。根据《2019年平顶山市动物疫病监测与流行病学调查计划》，按照估计免疫抗体阳性率方法，设85%的预期免疫抗体合格率（p），10%的可接受误差（d），在95%的置信水平（CL）下，根据公式N=1.962×p×（1-p）/d 2计算出抽样场数N=49个。并结合鲁山县春秋季强制免疫实际，对11个乡镇随机抽样50个场群开展集中监测。场群内采取系统抽样，依据场群分类不同，在家禽养殖场抽取1 490份、活禽交易场所抽取150份、散养户抽取30份，共采集样品1 670份。具体抽样设计见表1。

1.2 样品采集

无菌操作翅静脉采集鸡血液，每只2～3 mL，3 000 r/min离心10～15 min，析出血清，做好标记，-20 ℃保存备检。

1.3 检测试剂

禽流感H5亚型病毒（Re-8株）血凝抑制试验抗原，批号2019062;禽流感H7亚型病毒（H7N9株），批号2019071。以上2种试剂均为哈尔滨维科生物技术开发有限公司产品。

1.4 检测方法与判断标准

按照《高致病性禽流感诊断技术》（GB/T 18936—2003）[5]中血凝抑制试验（HI）检测H5、H7亚型禽流感免疫抗体。判断标准按照个体HI抗体效价≥24为免疫合格个体，群体免疫抗体合格率≥70%为免疫合格群体，H5和H7群体免疫抗体合格率均≥70%为免疫合格场群[6]。

2 结果与分析

2.1 H5、H7亚型禽流感免疫整体情况

在50个场群中，有32个场群使用重组禽流感（H5+H7）二价灭活疫苗，占场群数量的64.0%（32/50）;H5亚型场群合格率为76.0%（38/50），个体合格率为86.3%（1 442/1 670）;H7亚型场群合格率为50.0%，个体抗体合格率为59.5%（993/1 670）。养殖场的H5、H7亚型群体合格率和个体合格率均高于散养户和活禽交易点，且差异显著（P<0.05）。

2.2 使用不同疫苗的场群抗体合格率比较

在50个场群中，32个使用（H5+H7）二价灭活疫苗，18个使用其他禽流感类型疫苗和未免疫。比较使用（H5+H7）二价灭活疫苗场群与使用其他疫苗和未免疫场群的H5、H7亚型免疫抗体，可以看出前者个体免疫抗体合格率均大于70%，分别比后者高出27.5%、187.3%，差异极显著（P<0.01）;同时，前者群体合格率也大于未使用的群体合格率，分别高于37.9%、124.8%，差异极显著（P<0.01）。不使用（H5+H7）二价灭活疫苗导致禽流感群体免疫合格率低于70%的风险是使用（H5+H7）二价灭活疫苗的2.6倍（OR=2.6，95%CL：1.1～13.0）。

2.3 群间分布

家禽种类不同，H5、H7亚型禽流感场个体免疫抗体情况存在差别。鸡和其他禽类（鸭、鹅）全部场群合格率分别为50%和0，无统计学意义。鸡和其他禽类（鸭、鹅）的H5亚型个体合格率分别为86.1%、91.4%，差异不显著（P>0.05）;H7亚型个体合格率分别为62.1%、0，差异极显著（P<0.01）。

2.4 空间分布

分析鲁山县高致病性禽流感空间分布，结果显示，鲁山县11个乡镇区域内群体合格率和个体合格率不均衡，存在较大差异。D、F、K乡镇的H5、H7亚型场群合格率和个体合格率均高于70%，占乡镇总数的27.3%（3/11），符合国家要求;而A、E、H、I和J乡镇的H7亚型免疫抗体未检测到，占乡镇总数的45.5%（5/11）。

3 讨论

高致病禽流感对养禽业危害巨大，我国将高致病性禽流感纳入强制免疫计划，实行H5亚型和H7亚型高致病性禽流感100%免疫。2017年秋季，农业农村部要求使用H5+H7二价灭活疫苗替代重组禽流感病毒H5二价或三价灭活疫苗，对家禽实施免疫[3]。鲁山县按照平顶山市统一部署，要求家禽养殖场户使用H5+H7二价灭活疫苗开展高致病性禽流感免疫。本次检测对鲁山县高致病性禽流感免疫抗体水平进行初步整体情况了解和判断，为下一步做好禽流感免疫工作打下基础。

本次检测是在秋季强制免疫21 d后进行的抽样抗体检测，从本调查检测数据看，场群免疫密度达不到100%。进一步对抽样检测点进行调查发现，主要是对该病重视度不够，部分养禽场户没有按照要求替换使用（H5+H7）二价灭活疫苗。从群间分布看，鸡的H5亚型个体免疫抗体合格率低于其他家禽（鸭、鹅），差异不显著（P>0.05），而H7亚型个体免疫合格率远高于其他家禽，这可能与疫苗种类不同，其疫苗毒株的免疫原性存在差别有关。根据空间分布调查来看，全区有3个乡镇的H5、H7个体免疫抗体水平符合国家要求，其余乡镇未达标。因此，建议开展免疫普查，强化免疫效果监测与评价，积极落实“先打后补”，对未达标乡镇进行补免。

对比使用（H5+H7）二价灭活疫苗和未使用场群的个体免疫抗体合格率，前者H5、H7亚型个体抗体免疫合格率均符合国家的规定，高于70%，而后者虽然H5个体抗体免疫合格率符合国家要求，但是H7亚型不符合要求，甚至没有检测出抗体。这与钱昌银等[7]调查结果一致。风险分析也进一步证实了使用（H5+H7）二价灭活疫苗的安全可靠性。

4 结论

本次血清学调查结果表明，使用（H5+H7）二价灭活疫苗免疫可以达到免疫保护水平，效果优于未使用的。建议加大宣传力度，要求家禽养殖场户使用（H5+H7）二价灭活疫苗，对免疫不合格者进行补免。

参考文献

[1]甘孟候.禽流感[M].2版.北京：中国农业出版社，2002.

[2]王家敏，沈武玲，于国伟.禽流感研究进展[J].吉林农业学科，2012（5）：62-65.

[3]中华人民共和国农业农村部.关于切实做好全国高致病性禽流感秋季免疫工作的通知[EB/OL].（2017-08-20）[2020-06-16].http：//www.moa.gov.cn/nybgb/2017/dbq/201801/t20180103_6134000.htm.

[4]刘华，占松鹤，何长生，等.安徽省规模禽场高致病性禽流感血清学横断面研究与风险因素分析[J].中国动物检疫，2019（12）：1-7.

[5]中国人民共和国国家质量监督检验检疫总局.高致病性禽流感诊断技术：GB/T 18936—2003[S].北京：中国标准出版社，2003.

[6]中华人民共和国农业农村部.《2019年国家动物疫病监测与流行病学调查计划》的通知[EB/OL].（2019-05-30）[2020-06-16].http：//www.xmsyj.moa.gov.cn/gzdt/201905/t20190530_6315850.htm.

[7]钱昌银，程晓峰，刘华，等.2017年安徽省合肥市禽流感抗体检測[J].中国动物检疫，2018（12）：26-28，42.