流式细胞仪筛选环磷酰胺诱导骨髓嗜多染红细胞微核的技术方法分析

张雯　赵康　汪梅花

【摘要】  环磷酰胺;骨髓嗜多染红细胞;微核;流式細胞仪;技术方法

引言

微核实践研究是临床用于细致检查被检测物所含遗传性毒物的专业性测验形式，目前在临床实践病毒检测中使用效果显著，已得到较大范围的使用。由于传统人工方式在微核数值检测的具体性检测中工作量较大，找寻相对准确的微核率较为困难，且存在一定程度上的干扰因素。流式细胞仪在实际使用中效率高、操作简便等优势较为突出，且其实际检测结果较为准确，因此常用于骨髓嗜多染红细胞微核率的数值检验之中。

一、资料与方法

（一）一般资料

本次实践探究的主要研究对象包括符合研究条件的雄性SD大鼠和雄性KM小鼠各10只，小鼠的实际体重在20克左右，大鼠的实际体重在200克左右，大鼠与小鼠的最大生存月龄为一个半月。抽调的所有实践研究对象经检测全部符合相关研究标准，对参与实践研究的对象进行标识处理，同时进行科学化的小组分配，确保实践研究效率的充分保障。

（二）研究方法

本次实践研究中涉及的主要试剂包括：环磷酰胺、Sorensens缓冲液、AO水溶液、氯化钠、戊二醛水溶液等。主要使用仪器包括：临床流式细胞仪、离心机械、显微镜等。环磷酰胺药物使用时需配合生理盐水进行调和。对分配完成的各个实验小组进行差异性的药物剂量投入，明确注射体积，对实验对象的腹部进行药物注射，药物注射完成24小时后进行标本样本收集[1]，以此为基础进行后续实践研究。借助单一性质的AO与FCM进行骨髓嗜多染红细胞微核的数值检测，与此同时，将流式细胞仪筛选出来的环磷酰胺用以处理SD大鼠和KM小鼠，将二者体内骨髓内部含有的骨髓嗜多染红细胞以及较为成熟的骨髓红细胞的微核数量进行测定，计算出相应微核率后及时进行对比分析。

（三）实验观察指标

借助流式细胞仪对相关实验提取物进行细胞数值分析，将流式细胞仪筛选出来的环磷酰胺用以处理SD大鼠和KM小鼠，将二者体内骨髓内部含有的骨髓嗜多染红细胞以及较为成熟的骨髓红细胞的微核数量进行测定。借助流式细胞仪进行相关监测的同时，医疗技术人员同时借助显微镜完成镜检工作。

二、结果

实践研究过程中当环磷酰胺的实际含量升高时，SD大鼠和KM小鼠骨髓中的骨髓嗜多染红细胞以及较为成熟的骨髓红细胞的实际数值逐渐增加，并且呈现出具有一定规律性的数量关系，采用多种计数方式进行实践研究环节的数值评定，并未发现较大的数据研究差异（P>0.05）。参与实践调查研究的小鼠中检测到多数的细胞群分布现象[2]，其中包括：骨髓嗜多染红细胞、较为成熟的骨髓红细胞、含微核的较为成熟的骨髓红细胞等。通过观察可有效区分微核细胞与未含微核细胞之间的区别。以此确定流式细胞仪对于此类微核细胞的区分存在一定程度上的主管性质。与此同时，借助实践研究发现不同使用剂量的环磷酰胺对于实验对象的影响。实践研究样本经AO试剂染色后，待观察的细胞状态显示为良好，骨髓嗜多染红细胞与较为成熟的骨髓红细胞相比二者在染色后存在显著差异，其中骨髓嗜多染红细胞可发出荧光，而较为成熟的骨髓红细胞无此类现象。人工镜检检测中发现，与常规性的细胞相比，含有微核的红细胞实际体积较大，借助WinMDI软件对细胞群体的占据比例进行检测过程中，可发现当CP的实际含量增多且其浓度上升到一定程度后，随机出现了细胞抑制性情况。

三、讨论

AO作为一种荧光性染料剂，因其对生物基因所具有的亲和度，当与单链核算或者双链核酸进行有效结合后将产生差异性的荧光反应。环磷酰胺（cyclophosphamide）在进入生物体内后将于生物肝脏内部进行分子转化，其在生物体外并无明显的抗肿瘤活性功能，但在生物体内将氧化酶转化为醛磷酰胺后，存在一定程度上的不稳定性，其在生物肿瘤细胞中还可进一步分解成丙烯醛、酰胺氮芥等。探究临床流式细胞仪筛选环磷酰胺以此诱导骨髓嗜多染红细胞微核的有效技术形式的主要目标为提升流式细胞仪器在临床探究中的实际使用性能。临床探究中生物的骨髓细胞与其他细胞相比极具特异性，有核细胞的实际数值将在一定程度上对MN的检测数值进行存在影响，本次实践探究活动中借助借助单一性质的AO与FCM进行骨髓嗜多染红细胞微核的数值检测，可在保存检测样本完整性的同时进行数值测定，有效对微核及不微核的红细胞进行测定，检测大鼠骨髓中的嗜多染红细胞数量，将医疗器械检测结果与人工镜检结果相对比，其统计学上的数值差异不大。

综上所述，临床流式细胞仪在临床应用中具有一定程度上的实用价值[3]，可用以筛选环磷酰胺以此诱导骨髓嗜多染红细胞微核的具体数值检测，并值得在医疗服务研究领域进行更深一步的拓展。

【参考文献】

[1]张孝全，孙雯雯，李海生.浅析临床流式细胞仪筛选环磷酰胺以此诱导骨髓嗜多染红细胞微核的有效技术形式以及结果研究[J].现代化医疗诊断，2017，04（14）：104.

[2]张晓强，王记奇，邓苗苗.简述临床流式细胞仪检测骨髓嗜多染红细胞微核的有效技术形式改进策略分析[J].中国民族民间医药，2017，34（14）：278-290.

[3]黄西夏，刘楠灵，张启东.小议临床流式细胞仪用以检测小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的有效技术方法探究[J].现代化医学医药杂志，2018，34（15）：382.