HPLC-RID法测定门冬氨酸洛美沙星葡萄糖注射液中葡萄糖

陈 希，鄢雷娜，吴燕红，刘绪平，段和祥,刘卫德

（江西省药品检验检测研究院，江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心，江西 南昌 330029）

门冬氨酸洛美沙星主要用于治疗敏感细菌引起的呼吸道、泌尿生殖道、肠道等组织感染以及中耳炎和鼻窦炎等疾病的治疗[1]。相应的制剂有门冬氨酸洛美沙星注射液（小针剂）和门冬氨酸洛美沙星葡萄糖注射液（大输液），大输液的执行标准有A公司的国家食品药品监督管理局标准YBH30102005和B公司的国家食品药品监督管理局标准YBH15122004[2,3]。门冬氨酸洛美沙星葡萄糖注射液含有5%的葡萄糖和一定量的门冬氨酸洛美沙星。

目前，注射液中葡萄糖含量的测定方法主要有3种：滴定法、旋光法和示差折光检测法等[4-11]，上述两个标准均采用滴定法测定大输液中葡萄糖的含量，前期研究发现滴定法测定门冬氨酸洛美沙星葡萄糖中葡萄糖含量比企业实际投料计算结果偏高1%～2%——按法定标准采用滴定法测定葡萄糖含量，空白试验和阴性样品试验分别消耗Na2S2O3滴定液25.05mL和24.91mL，相差0.14mL，说明门冬氨酸洛美沙星也会消耗碘滴定液，方法专属性不高。另外，因葡萄糖具有旋光性，其含量测定还可以采用旋光法；但门冬氨酸洛美沙星原料也具有旋光性，即采用旋光法测定葡萄糖含量同样会存在干扰，专属性也差。

高效液相色谱示差折光检测法（HPLC-RID）采用高效液相色谱仪进行分离待测化合物，以示差折光检测器（RID）为检测器进行检测分析的一种方法，RID是为通用型检测器，通过测定色谱柱流出液的折射率而对样品进行检测的，对无紫外吸收的化合物也可检测，多用于糖类等无紫外吸收化合物的分析检测[11-15]。采用滴定法和旋光法测定门冬氨酸洛美沙星葡萄糖注射液中葡萄糖含量时，门冬氨酸洛美沙星均存在干扰；但采用HPLC-RID法检测时由于色谱柱的分离作用，门冬氨酸洛美沙星不会干扰葡萄糖的测定，所以本研究采用HPLC-RID法测定了门冬氨酸洛美沙星葡萄糖注射液中葡萄糖的含量，并进行了方法学验证。

1 材料

1.1 仪器与试剂

Agilent 1200高效液相色谱仪（配RID）；METTLERMS205DU电子天平。

1.2 药品与试剂

门冬氨酸洛美沙星葡萄糖注射液 [规格：100mL∶门冬氨酸洛美沙星0.2g与葡萄糖5.0g，生产企业：武汉大安制药有限公司（以下简称“A公司”）和湖北康沁制药有限公司（以下简称“B公司”）]；D-无水葡萄糖对照品（批号：110833-201205，含量：99.5%中国食品药品检定研究院）；门冬氨酸洛美沙星原料药（批号20151201 A公司）；水（纯化水）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

流动相：水；流速：0.5mL·min-1；色谱柱：Carbomix H-NP 10:8%（7.8mm×300mm，10μm）；柱温55℃；RID检测池温度50℃；进样量10μL。

2.2 溶液的制备

精密称取D-无水葡萄糖对照品49.49mg，置10mL容量瓶中，加5mL水溶解后再用水稀释至刻度并摇匀，制成浓度约为5mg·mL-1的对照品溶液。精密称取门冬氨酸洛美沙星原料药20.40mg，置100mL容量瓶中，加5mL水溶解后再用水稀释至刻度并摇匀，作为原料药对照溶液。精密量取门冬氨酸洛美沙星葡萄糖注射液10mL，加水稀释至100mL并摇匀，作为供试品溶液。

2.3 专属性考察

取供试品溶液、对照品溶液和原料药对照溶液，按“2.1”中色谱条件进行测定，色谱图详见图1。

图1 高效液相色谱图Fig.1 HPLCchromatograms

图谱显示，供试品溶液主峰保留时间与葡萄糖对照品溶液主峰一致，且原料药对照溶液在相应保留时间处未出现色谱峰，说明门冬氨酸洛美沙星不干扰葡萄糖的测定，本方法专属性良好。

2.4 线性关系考察

取对照品溶液，按“2.1”中色谱条件，分别进样1、2、5、10、20、50μL，记录色谱图。以葡萄糖的峰面积为纵坐标（y），葡萄糖的质量为横坐标（x）绘制标准曲线。结果表明，葡萄糖质量在5～250μg之间与峰面积呈良好线性，回归方程为：y=16810.99749x+3021.25310，r2=0.99999，详见图 2。

图2 葡萄糖线性关系图Fig.2 Linear Graph of Glucose

2.5 精密度和重复性

取对照品溶液，按“2.1”中色谱条件连续进样5针，葡萄糖峰面积的RSD为0.2%，表明本方法精密度良好。取供试品（A公司，21704191-2）制备6份供试品溶液，按“2.1”中色谱条件测定，供试品溶液中葡萄糖峰面积分别为：829293、829447、831446、8307 59、829699，峰面积的RSD为0.1%，表明本方法重复性良好。

2.6 稳定性试验

取供试品溶液（A 公司，批号：21612201-1），按“2.1”中色谱条件测定，分别在 0、6、12、18、27h 进样，结果葡萄峰面积分别为758394、758982、756941、763893、765891，峰面积的RSD为0.51%。表明葡萄糖在27h内稳定性良好。

2.7 定量限与检出限考察

取对照品溶液倍比稀释，按“2.1”中色谱条件测定，以信噪比满足3∶1和10∶1计算检出限和定量限。结果本方法的检出限和定量限分别为15ng和45ng。

2.8 回收率试验

取供试品（A 公司，批号：21704191-1）6份，每份10mL，分别用水稀释至100mL，摇匀后取5mL置10mL容量瓶中，分别加入葡萄糖对照品约22.4mg，溶解后再加水稀释至刻度，摇匀，按“2.1”中色谱条件测定，记录色谱图并计算回收率（按无水葡萄糖计算）。回收率为98.4%～100.0%，平均回收率为99.4%，回收率RSD=0.55%，说明本方法准确度良好，详见表1。

表1 加样回收率试验结果（n=6）Tab.1 Results of recovery tests（n=6）

2.9 样品测定

对供试品进行测定，按外标法以峰面积计算供试品中葡萄糖含量 [标准规定含葡萄糖（C6H12O6·H2O）应为标示量的95.0%～105.0%]，结果均符合规定，结果见表2。因本法能消除门冬氨酸洛美沙星的干扰，检测值较法定检验方法测定值偏小。

表2 样品含量测定结果Tab.2 Results of content determination of samples

3 结论

采用旋光法和滴定法测定门冬氨酸洛美沙星葡萄糖注射液中葡萄糖含量时，门冬氨酸洛美沙星对检测均存在干扰，会导致结果出现偏差。本研究建立的采用HPLC-RID法测定门冬氨酸洛美沙星葡萄糖注射液中葡萄糖含量方法前处理操作简单方便，能消除门冬氨酸洛美沙星产生的干扰，具有极佳的专属性。通过对本方法线性、精密度、回收率等方法验证，证明本方法具有高度的专属性、良好的准确度和重复性等特点，适用于门冬氨酸洛美沙星葡萄糖注射液中葡萄糖的含量测定。