梁山慈竹竹叶黄酮提取工艺的初步研究

坤旭锋，吴章桥，卓 蕾，何昌杰，向成丽，陈小军，郑 升，龙治坚*

（1 西南科技大学生命科学与工程学院，四川绵阳 621010；2 西南科技大学竹类研究所）

梁山慈竹（Dendrocalamus farinosus）是我国西南诸省主要的乡土大型丛生竹之一[1-2]。其竹叶含有大量的黄酮类、三萜类、酚酸等生物活性物质[3]。而竹叶黄酮类物质具有较强的抗菌、抗炎、抗氧化、抗疲劳功能，在药用、医用和保健用方面有着广泛的应用前景[4-7]。目前，关于不同年龄梁山慈竹的竹叶黄酮含量的研究尚未见报道。因此，以不同年龄的梁山慈竹为对象，采用乙醇法提取不同年龄梁山慈竹的竹叶黄酮，以期为梁山慈竹竹叶黄酮的开发和利用提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验材料采自西南科技大学竹类研究所的竹种质资源圃。采样后，用蒸馏水冲洗2～3 次，于105℃烘30min，再于70℃烘干，粉碎并过60 目筛，置于自封袋内备用。

1.2 试验方法

1.2.1 不同单因素处理对竹叶黄酮提取率的试验设计。试验设3 个单因素，即乙醇浓度、提取时间和提取温度，乙醇浓度分别为50%、60%、70%和80%4 个梯度，提取时间为1.0h、1.5h、2.0h 和2.5h，提取温度为50℃、60℃、70℃和80℃。

1.2.2 芦丁标准曲线的绘制。分别取已配制好的芦丁标准液0.0mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL，转移至25mL 的不同容量瓶；用30%乙醇补充至12.5mL，加入0.7mL 浓度为5%的NaNO2，摇匀；放置5min，加入0.7mL 浓度为10%的Al（NO3）3；放置6min，加入5mL的1mol/L 的NaOH 溶液；用30%乙醇补至刻度，混匀，静置10min。而后在510nm 波长下测定吸光值，试剂空白为参比液。以芦丁浓度C 与吸光值A 的标准曲线，进行线性回归，得回归方程为y=8.8906x-0.0135（R2=0.994）。

1.2.3 梁山慈竹竹叶黄酮的提取与测定。准确称取制备好的竹叶干粉2.00g，加入40 mL 乙醇浸提液，单因素试验处理后，将得到的黄酮提取液于4000r/min 条件下离心10min，萃取而得到样品提取液。吸取萃取后的样品液2mL，并转移至25mL 容量瓶。按标准曲线的测定方法，测定待测液的吸光值，根据公式计算黄酮含量。黄酮含量（mg/100g）＝C×V×N/m。式中：C 为待测液中的黄酮浓度，mg/mL；V 为黄酮提取液体积，mL；N为待测液的稀释倍数；m 为梁山慈竹竹叶样品干质量，取2.0g。

2 结果与分析

2.1 芦丁标准曲线

选用芦丁作为标准品，通过NaNO2-Al（NO3）3显色法测定芦丁在510nm 处的吸光度。芦丁标准曲线如图1 所示，芦丁在一定范围内呈较好的线性关系。

图1 芦丁标准曲线

2.2 乙醇浓度对不同年龄梁山慈竹黄酮得率的影响

图2 乙醇浓度对黄酮提取量的影响

随着乙醇浓度的逐渐提高，1 年生、2 年生和3 年生等不同年龄的梁山慈竹黄酮得率呈现先升高后下降的趋势（图2）。当乙醇浓度为60%时，黄酮的得率达到最大，其中1 年生竹子 的 黄 酮 为847.81mg/100g，2 年生和3 年生分别为870.30 mg/100g 和912.48mg/100g；当乙醇浓度为80%时，黄酮的得率最低，1 年生、2 年生和3 年生分别为558.17mg/100g、552.55mg/100g 和659.40mg/100g。进一步分析发现，在不同乙醇浓度浸提下，3 年生梁山慈竹的竹叶黄酮得率均最高，而1 年生和2 年生的均显著低于3 年生。这表明3 年生梁山慈竹竹叶黄酮的含量相对较高，是黄酮提取的最佳原料。

2.3 提取时间对不同年龄梁山慈竹黄酮得率的影响

提取时间对不同年龄梁山慈竹的黄酮提取得率有较大的影响（图3）。在一定提取时间范围内，1 年生、2年生和3 年生梁山慈竹的黄酮得率与提取时间呈现显著正相关；而当提取时间大于2h 后，黄酮得率则与提取时间呈显著负相关。提取时间为2h 时，黄酮得率最高，1 年生、2 年生和3 年生的分别为667.84mg/100g、681.9mg/100g 和836.558mg/100g。同时，3 年生梁山慈竹的竹叶黄酮得率显著高于1 年生和2 年生。说明3 年生梁山慈竹的黄酮含量最高。

图3 提取时间对黄酮提取量的影响

2.4 提取温度对不同年龄梁山慈竹黄酮得率的影响

提取温度对原料黄酮得率也有较大的影响。随着提取温度的增加，梁山慈竹黄酮得率大体呈现出先增而后降的趋势（图4）。当提取温度为50℃时，1 年生的梁山慈竹黄酮得率高于2 和3 年生。提取温度为60℃时，1 年生、2 年生和3 年生梁山慈竹的黄酮得率均达到最 大，分 别 为738.406mg/100g、758.104mg/100g 和862.224mg/100g。随着温度的进一步提高，黄酮得率逐渐降低，但3 年生的梁山慈竹显著高于1 年生和2 年生。

图4 提取温度对黄酮提取量的影响

综合分析上述乙醇浓度、提取时间和提取温度等3 个单因素对梁山慈竹黄酮得率的影响，表明其黄酮提取的最优工艺组合为乙醇浓度60%、提取时间2.0h、提取温度60℃。同时，发现不同年龄梁山慈竹竹叶黄酮含量有较大的差异，大体呈现出梁山慈竹的黄酮含量3 年生＞2 年生＞1 年生。这说明随着竹龄的不断增加，竹叶黄酮含量也逐步增加。

3 结论

通过乙醇浓度、提取时间和提取温度等单因素试验发现，随着各因素水平的提高，梁山慈竹竹叶黄酮的得率大体呈现出先增加而后下降的趋势。当乙醇浓度为60%时，黄酮得率最高；而提取时间和提取温度分别为2.0h 和60℃时，其黄酮得率也达到最大值。因此，3 个因素的最优组合是乙醇浓度为60%、提取时间为2.0h、提取温度为60℃。

综合分析上述各单因素对梁山慈竹黄酮得率的影响，发现梁山慈竹3 年生＞2 年生＞1 年生。这说明随着竹龄的不断增加，竹叶黄酮含量也逐步增加。这与贾之慎等[8]的研究结果相吻合。这表明在梁山慈竹竹叶黄酮的开发和利用上，3 年生的梁山慈竹是较好的原料。本研究为进一步探索竹叶黄酮的提取工艺，开发竹叶黄酮提供一定的理论和技术支持。