血清ASM与GPx水平检测与类风湿性关节炎膝关节病变的相关性研究

王 娟,马飞艳, 樊 萍

(1.陕西省森工医院检验科,西安 710300; 2.咸阳市妇幼保健院检验科,陕西咸阳 712000;3.咸阳市第一人民医院检验科,陕西咸阳 712000)

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA) 是一种以关节滑囊组织增生及炎性细胞浸润为特征的慢性自身免疫性疾病。研究发现，RA 病因比较复杂，如果早期诊断治疗能缓解病情，降低致残率[1]。近年来的研究表明，酸性鞘磷脂酶(acid sphingomyelinase,ASM)和谷胱甘肽过氧化酶(glutathione peroxidase,GPx)可能与RA 的发生发展有关[2-3]。本研究通过分析58 例RA 膝关节病变患者血清ASM 和GPx 水平的变化，旨在评价两指标在RA 中的应用价值,并为RA 的诊断和治疗提供依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选择2016年3月～2019年3月于咸阳市第一人民医院、陕西省森工医院和咸阳市妇幼保健院就诊的58 例RA 膝关节病变患者作为研究对象。RA 确诊均符合2010年中国风湿病学会修定的RA 诊断标准[4]。依据疾病活动评分28 (disease activity score 28,DAS28)将RA 患者分为缓解期组和活动期组。缓解期组纳入25 例患者,男性8 例,女性17 例,平均年龄53.50±12.47 岁。活动期组纳入33 例患者,男性11 例,女性22 例,平均年龄54.12±11.67 岁。排除标准：并发关节退行性病变、糖尿病、血友病、白血病及银屑病等其他可引起关节病变的自身免疫性疾病患者。选择30 例同期体检健康者作为对照组,男性10 例,女性20 例,平均年龄52.33±11.39 岁。各组研究对象的年龄及性别比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。本研究经咸阳市第一人民医院、陕西省森工医院和咸阳市妇幼保健院医学伦理委员会批准,并得到所有研究对象的知情同意。

1.2 试剂与仪器 ASM 试剂盒购于上海北沪生物科技有限公司，GPx 试剂由北京方程生物科技有限公司提供，抗环瓜氨酸抗体(anti-cyclic peptidecontaining citrulline,Anti-CCP)试剂由上海美康生物股份有限公司提供。类风湿因子(rheumatoid factor,RF)试剂由广州科方生物技术股份有限公司提供。RF 与Anti-CCP 水平采用日立7600 全自动生化分析仪检测，膝关节超声检查采用飞利浦IU22 型彩色多普勒超声诊断仪,探头频率为12～18 MHz。

1.3 方法 采用酶联免疫吸附法检测血清ASM和GPx 水平，Anti-CCP 与RF 水平检测采用乳胶增强免疫比浊法。应用超声检查评价RA 患者膝关节的病理变化，阳性判断标准：Anti-CCP＞45 U/ml, RF＞15 IU/ml。

1.3.1 标本采集：所有研究对象于清晨空腹状态被抽取静脉血5ml，室温静置30min 后3 000r/min 离心10min，分离血清，于-80℃保存备用。

1.3.2 超声检查：检查者取仰卧位，屈膝，充分暴露膝关节。应用超声诊断仪在肌肉骨骼模式下测量髌上囊滑膜厚度和髌上囊积液深度。

1.3.3 DAS28 评分[5]： 以28 个关节的疾病活动状况进行计分,包括双手掌指关节(10 个)，双手近端指间关节(10 个)，双腕关节(2 个)，双肘关节(2个)，双肩关节(2 个)，双膝关节(2 个)。依据压痛关节数、肿胀关节数及红细胞沉降率计算DAS28评分。DAS28 ≤2.6 分的患者被纳入缓解期组，DAS28＞2.6 分的患者被纳入活动期组。

1.4 统计学分析 研究资料采用SPSS22.0 统计软件进行分析。计量资料以均数±标准差表示。所有资料均呈正态分布。ASM，GPx，Anti-CCP 和RF 水平以及年龄、髌上囊滑膜厚度和髌上囊积液深度的组间比较采用单因素方差分析。以上资料多组间的两两比较采用SNK-q 检验分析，性别的组间比较采用卡方检验，相关性分析采用Pearson 法。P ＜ 0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 RA 患者血清RF 和Anti-CCP 水平分析 见表1。缓解期组和活动期组的RF 和Anti-CCP 水平与对照组比较明显增高，活动期组的RF 和Anti-CCP水平与缓解期组比较明显增高，差异均有统计学意义(P＜0.01)。

2.2 RA 患者超声检查分析 见表2。缓解期组和活动期组的髌上囊滑膜厚度和髌上囊积液深度与对照组比较明显增高，活动期组的髌上囊滑膜厚度和髌上囊积液深度与缓解期组比较明显增高，差异均 有统计学意义(P＜0.01)。

表1 RA 患者血清RF,Anti-CCP 水平 (±s)

表1 RA 患者血清RF,Anti-CCP 水平 (±s)

检测指标 对照组(n=30) 缓解期组(n=25) 活动期组(n=33) F P RF(IU/ml) 6.39±2.16 48.23±5.37 113.89±13.56 64.33 0.000 Anti-CCP(U/ml) 12.23±2.73 83.58±16.72 154.63±27.91 53.21 0.000

表2 RA 患者超声检查分析(±s，cm)

表2 RA 患者超声检查分析(±s，cm)

检测指标 对照组(n=30) 缓解期组(n=25) 活动期组(n=33) F P髌上囊滑膜厚度 0.11±0.02 0.30±0.07 0.53±0.13 99.15 0.000髌上囊积液深度 0.21±0.03 0.42±0.08 0.65±0.11 85.23 0.000

2.3 RA 患者血清ASM 和GPx 水平分析 见表3。缓解期组和活动期组的GPx 水平与对照组比较显著降低，活动期组的GPx 水平与缓解期组比较显著降低，缓解期组和活动期组的ASM 水平与对照组比较显著增高，活动期组ASM 水平与缓解期组比较显著增高，差异均有统计学意义(P＜0.01)。

表3 RA 患者血清ASM 和GPx 水平分析(±s)

表3 RA 患者血清ASM 和GPx 水平分析(±s)

检测指标 对照组(n=30) 缓解期组(n=25) 活动期组(n=33) F P ASM(nmol/L) 21.35±6.61 72.30±13.49 123.67±19.26 79.15 0.000 GPx(U/mL) 93.26±13.07 65.13±11.29 41.07±8.65 68.23 0.000

2.4 Pearson 线性相关分析 缓解期组和活动期组的GPx 水平分别与RF，Anti-CCP 水平、髌上囊滑膜厚度及髌上囊积液深度呈负相关性(r缓解期组=−0.832,−0.829,−0.813,−0.809，均P＜0.01；r活动期组=−0.851，−0.836，−0.827，−0.815， 均P＜0.01)。缓解期组和活动期组的ASM 水平分别与RF 和Anti-CCP 水平、髌上囊滑膜厚度及髌上囊积液深度有正相关性(r缓解期组=0.820，0.811，0.789，0.793，均P ＜0.0 1)，(r活动期组= 0.837，0.825，0.807，0.817，均P＜0.01)。

3 讨论

研究发现，RA 的发病机制可能与机体的氧化应激反应有关。抗氧化能力减弱，会造成机体产生过量的氧自由基，进而破坏软骨细胞，导致滑膜与骨质受损[3]。相关研究表明高频超声检查能够反映RA 患者关节的病理变化[6]。本研究结果显示RA患者膝关节髌上囊滑膜厚度及髌上囊积液深度明显高于对照组，其中活动期组增高更显著。进一步的分析显示RA 患者血清RF 和Anti-CCP 水平的变化趋势与超声检查的结果相符。提示超声检查两参数及RF，Anti-CCP 可作为RA 患者病情监测的常用指标。研究表明，GPx 可清除人体内过多的氧自由基。GPx 水平增高，会导致机体氧化应激反应增强[7]。ZHAO 等[3]建立小鼠RA 模型研究GPx 与RA 的相关性，研究显示，小鼠血清GPx 水平显著降低。应用鹅绒碱加氨基葡萄糖治疗后血清GPx 水平明显增高。DATALAY 等[8]的研究显示RA 患者血液中性粒细胞中GPx 的活性明显降低。应用甲氨蝶呤治疗后GPx 水平明显增高。本研究的分析结果显示，GPx 水平与RF，Anti-CCP 水平、髌上囊滑膜厚度和髌上囊积液深度呈负相关性。提示GPx 可能与RA 的病情进展有关。进一步研究显示，RA 患者血清GPx 水平明显降低，其中活动期组降低更显著。提示GPx 可能与RA 的病理过程有关，且GPx 水平越低，RA 患者的疾病活动性越严重。

相关研究显示，在小鼠单核巨噬细胞诱导的炎性反应中，ASM 的蛋白表达明显增高。然而，在给予ASM 的抑制剂丙咪嗪治疗后，ASM 的蛋白表达被显著抑制[9]。BECKMANN 等[10]对小鼠关节炎实验模型的研究显示，抑制ASM 活性可减轻关节肿胀，降低关节腔内促炎细胞因子的水平。CHUNG 等[2]研究发现，RA 患者血清ASM 的活性显著增高，接受特异性肿瘤坏死因子-α 阻断治疗后，患者血清ASM 活性显著降低。提示ASM可能通过促进机体的炎性反应参与RA 的病理过程。本研究结果显示RA 患者血清ASM 水平分别与RF，Anti-CCP 水平、髌上囊滑膜厚度和髌上囊积液深度呈正相关性。进一步研究显示RA 患者血清ASM 水平明显增高，其中活动期组增高更显著。表明ASM 可能与RA 的病变进展有关，ASM 水平增高对RA 的病变进展有促进作用。

综上所述，ASM 和GPx 与RA 的发生发展密切相关。检测血清ASM 和GPx 水平可评价RA 的病情进展并为RA 的诊治提供依据。