MRN复合体在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义*

林丹，王代友

（广西医科大学附属口腔医院 1.综合一门诊，2.口腔额面外科，广西 南宁 530021）

口腔癌是一种常见的恶性肿瘤，其发病率约占全身恶性肿瘤的3%。口腔鳞状细胞癌 （oral squamous cell carcinoma，OSCC） 占口腔癌的90%，其病死率排世界癌症病死率的第6位[1]，早发现、早诊断、早治疗是提高OSCC 患者疗效最有效的手段。目前针对OSCC的诊治，通过采用基因组学、蛋白质组学等分子生物学技术筛选出了大量生物标志物，已经有上市的以生物标志物的为靶点的靶向治疗药物，以及潜在作为治疗靶点的生物标志物研究方兴未艾[2]。

MRN复合体包括MRE11、RAD50、NBS1 3种蛋白质，其在DNA 复制、细胞周期调控、DNA 损伤信号感应、维持基因组稳定等过程中有关键的作用。近来研究证实：MRN复合体与肿瘤的恶性生物学行为有关[3]，可能参与肿瘤的发生、发展，甚至与放射治疗的反应性有关[4]。作为OSCC 潜在生物标志物，目前研究主要集中在抑制MRN 对肿瘤细胞放射敏感性的影响上[5]。但MRN复合体的MRE11、RAD50、NBS1 3种蛋白质在OSCC 中的表达未见系统报道。本实验主要研究MRN复合体各亚基单位与OSCC 临床病理特征的关系，进而为OSCC的治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2016年1月—2017年6月广西医科大学附属口腔医院住院治疗的OSCC 患者50例为观察组。所有患者行手术治疗，并经常规病理切片确诊，术前未接受放化疗。获取患者临床资料，包括年龄、性别、民族、家族病史、治疗用药情况、病理分级和转移情况。其中，男性28例，女性22例；年龄38～67岁，平均 （58.8±6.7） 岁；另选择50例同期本院口腔疾病患者作为对照组，其组织来源于术中距离肿瘤边缘＞2 cm的口腔黏膜组织，以及因良性疾病 （口腔扁平苔藓、口腔白斑病、口腔溃疡、盘状红斑） 行病理检查的口腔黏膜组织。其中，男性26例，女性24例；平均年龄 （57.4±7.5） 岁。两组的性别构成比、年龄比较，差异无统计学意义 （P＞0.05）。本研究经医院医学伦理委员会批准，所有受试对象签署知情同意书。

1.2 研究方法

采用免疫组织化学SP法检测组织中MRE11、RAD50、NBS1 3种蛋白的表达。严格按照试剂盒配套说明书进行操作，经脱蜡-修复(兔抗人MRE11、RAD50、NBS1 多克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司），阴性对照使用PBS缓冲液。结果判定采用双评分半定量法评价[6]，分为着色强度评分 （0分：未着色，1分：淡黄色，2分：棕黄色，3分：棕褐色）和染色评分[400倍显微镜下随机选取5个视野，记数阳性细胞所占比例 （阳性率）。1分：≤25%，2分：＞25%～50%，3分：＞50%～75%，4分：＞75%～100%]，最终评分取着色强度评分×染色评分，≥6分为阳性，＜6分为阴性。

1.3 统计学方法

数据分析采用SPSS 22.0 统计软件，计量资料以均数±标准差 （±s）表示，比较用t检验；计数资料以例 （%）表示，比较用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MRE11、RAD50及NBS1免疫组织化学染色结果

MRE11、RAD50和NBS1阳性表达呈棕黄色，主要位于胞核内，部分位于胞浆，在正常黏膜组织中呈弱阳性反应。见图1。

2.2 两组MRE11、RAD50及NBS1表达比较

两组MRE11、RAD50及NBS1阳性表达率比较，差异有统计学意义 （P＜0.05），观察组MRE11、RAD50阳性表达率低于对照组；观察组NBS1阳性表达率高于对照组。见表1。

2.3 MRE11、RAD50和NBS1的表达与OSCC患者临床病理特征的关系

图1 MRE11、RAD50、NBS1在组织中的表达 （SP法×400）

表1 两组患者MRE11、RAD50及NBS1阳性表达率的比较 [n=50，例 （%） ]

观察组NBS1的阳性表达率在不同OSCC的组织分型、有无淋巴结转移和临床分期中比较，差异有统计学意义 （P＜0.05）。NBS1在低分化组 （76.2%） 、中分化组 （64.7%） 的阳性表达率高于高分化组 （25.0%） （P＜0.05） ；NBS1在有淋巴结转移患者的阳性表达率高于无淋巴结转移患者 （P＜0.05）。NBS1在Ⅲ、Ⅳ期 （81.8%） 的患者的阳性表达率高于I、Ⅱ期患者 （42.9%） （P＜0.05）。MRE11和RAD50的阳性表达率在性别、年龄、分化程度、临床分期、肿瘤大小及淋巴结转移间比较，差异无统计学意义 （P＞0.05）。见表2。

表2 观察组不同临床特征间MRE11、RAD50和NBS1的阳性表达率比较例 （%）

续表2

3 讨论

有研究表明NBS1蛋白水平的降低和升高均可引起癌变[7]。在肿瘤患者中，NBS1的70 kD C端片段的数量与癌症发生相关，与70 kD NBS1表达水平高的患者比较，70 kD NBS1表达水平低的患者C端片段的数量增加，并且类淋巴母细胞系易发展成癌细胞[8]。一项研究筛选29例非小细胞肺癌，13例肝细胞癌和18例非小细胞肺癌及10个食管癌样品，显示NBS1的表达与相应的正常组织比较升高[9]。NBS1在某些类型肿瘤中的过度表达是晚期恶性肿瘤预后差的标志物。在高NBS1表达患者标本中观察到细胞质染色随着NBS1 水平的升高而加深[10]。本研究在OSCC 中检测到NBS1阳性表达率高于对照组，也提示NBS1 可能与肿瘤的发生有关。且发现NBS1的阳性表达率与肿瘤的临床分期、淋巴结转移和分化程度有关，表明NBS1的表达可能与较差的临床预后有关。

与NBS1相反，RAD50过表达导致肿瘤细胞坏死和凋亡。研究结果显示，有RAD50基因表达的肿瘤血管更少，因此RAD50被认为是抑制肿瘤生长的重要靶点[11]。而MRE11在肿瘤细胞中的表达研究较少，但与RAD50类似，MRE11在肿瘤中 （卵巢癌） 的表达较正常组织减少[12]。本研究发现，在OSCC 中RAD50与MRE11阳性表达率低于对照组，提示RAD50与MRE11可能对OSCC的发生起抑制作用。但本研究未发现RAD50与MRE11表达与肿瘤临床分期及分化程度等临床特征有关。

综上所述，MRE11、RAD50和NBS1表达在OSCC组织中存在异常。NBS1与OSCC分化程度、淋巴结转移和临床分期有关。