珠蛋白生成障碍性贫血成年女性HbA2筛查切值的建立

丁思意，石亮程，李寒梅，曾 果，贺 骏

湖南省长沙市妇幼保健院遗传优生科，湖南长沙 410007

珠蛋白生成障碍性贫血是人体珠蛋白基因缺失或突变而引起的一种遗传性溶血性贫血，是世界上最常见的一种不完全显性单基因遗传病，暂无有效的治疗手段，目前国际公认的首选预防对策主要是通过婚前、孕前或产前筛查出静止型或轻型珠蛋白生成障碍性贫血夫妇，对重型珠蛋白生成障碍性贫血高危胎儿进行产前基因诊断，可有效减少该病重症患儿出生。HE等[1]研究显示长沙地区α-珠蛋白生成障碍性贫血基因携带率为2.57%，β-珠蛋白生成障碍性贫血基因携带率为1.90%，α及β两种基因都携带的携带率为0.02%，由此可见，长沙也是珠蛋白生成障碍性贫血高发地之一。积极开展珠蛋白生成障碍性贫血筛查对控制重型珠蛋白生成障碍性贫血患儿的出生有重要意义，同时有必要开展珠蛋白生成障碍性贫血防治知识教育及婚育年龄人群珠蛋白生成障碍性贫血筛查。

参考区间是实验室检测指标用于临床的首要条件[2]。参考区间的参考人群是否具有代表性，是否真正适用于我国人群值得探讨[3]。如果一种疾病的筛查切值未结合本实验室的实际情况，则会导致筛查结果的假阴性或者假阳性，给被筛查者造成不必要的精神、经济负担，引起医疗纠纷。本研究拟根据C28-A3指南[4]要求，建立珠蛋白生成障碍性贫血成年女性全自动毛细血管电泳法的血红蛋白A2(HbA2)筛查切值，为临床医生提供更有价值的参考水平。

1 资料与方法

1.1一般资料 回顾性研究长沙市妇幼保健院遗传科2014年1月至2018年12月的珠蛋白生成障碍性贫血筛查及基因诊断检测结果。受检者均为女性，年龄≥18岁。将已确诊的珠蛋白生成障碍性贫血的标本作为病例组，其中α-珠蛋白生成障碍性贫血组991例，β-珠蛋白生成障碍性贫血组250例；正常组645例。纳入标准：平均红细胞体积(MCV)>80 fL,平均红细胞血红蛋白量(MCH)>27 pg,血红蛋白(Hb)>110 g/L,铁蛋白(FER)≥10 μg/L。排除标准：FER<10 μg/L,患有肝脏疾病及肿瘤者。

1.2检测方法 采用Capillarys 2型全自动毛细管电泳仪进行血红蛋白电泳,采用跨越断裂点的PCR技术(gap-PCR)和PCR技术结合反向膜杂交技术进行基因诊断。

1.3统计学处理 所有数据使用SPSS20.0统计软件进行分析，数据的分布情况采用Kolmogorov-Smirnov检验进行判断，P>0.05时表明数据呈正态分布，反之则为非正态分布。离群值的剔除：采用C28-A3指南推荐的Dixon规则(1/3规则)剔除离群值，即D/R值。D=极端观测值-次极端观测值,R=最大值-最小值,若D/R>1/3,考虑为离群值，应当剔除。临界值的建立：采用C28-A3指南推荐的非参数方法确定临界值。分别计算出临界值90%的置信区间(CI)。

2 结 果

2.1HbA2离群值的剔除 根据Dixon规则剔除3组HbA2值的离群值，3组数据D/R 都小于1/3，即本研究无离群值。见表1。

表1 HbA2极端值的判断结果

2.2HbA2值的频数分布图 本研究中，经过Kolmogorov-Smirnov正态性检验显示，3组数据均为非正态分布(P<0.05)。

2.3HbA2水平的分布及临界值的90%CI根据C28-A3指南推荐的非参数方法确定临界值。α-珠蛋白生成障碍性贫血HbA2的临界值仅参考上限有意义，采用第95%位数确定临界值，临界值为2.7%(90%CI：2.5%～2.8%)；正常组HbA2的临界值参考上限和参考下限均有意义，采用第2.5%和97.5%位数确定参考下限和参考上限，分别为2.4%(90%CI：2.3%～2.5%)、3.1%(90%CI：3.0%～3.2%)；β-珠蛋白生成障碍性贫血HbA2的临界值仅参考下限有意义，采用第5%位数确定临界值，临界值为3.7%(90%CI：3.6%～4.1%)。HbA2水平的分布见表2。

表2 HbA2水平的分布

3 讨 论

长沙市大部分医疗机构进行珠蛋白生成障碍性贫血筛查的流程分为3步:(1)血常规检查，具体指标为MCV及MCH,MCV<80 fL和(或)MCH<27 pg者；(2)血红蛋白电泳，HbA2的参考区间为2.5%～3.5%；(3)基因诊断，血红蛋白电泳异常者建议行珠蛋白生成障碍性贫血基因诊断。有研究结果显示全自动毛细血管电泳法珠蛋白生成障碍性贫血患者检出率高于琼脂糖凝胶电泳[5]及高效液相色谱法电泳[6]。骆明勇等[7]研究结果显示广东地区α-珠蛋白生成障碍性贫血毛细血管电泳法的HbA2切值为2.7%。李育敏等[8]研究结果显示全自动毛细管电泳法筛查非静止型α珠蛋白生成障碍性贫血的HbA2切值为2.7%。HAN等[9]研究表明贵州省育龄人群HbA2的参考区间为2.3%～3.1%。β-珠蛋白生成障碍性贫血男性、未孕女性及孕妇HbA2的筛查切值分别为4.40%、3.75%、3.70%。霍梅等[10]的研究显示深圳地区孕妇毛细血管电泳法筛查α-、β-珠蛋白生成障碍性贫血HbA2切值分别为2.55%和3.90%。由此可知，不同的检测方法及不同地区的珠蛋白生成障碍性贫血HbA2切值研究结果不统一。各实验室应根据实际情况严格按照美国临床实验室标准化协会(CLSI)所颁布的C28-A3指南《临床实验室如何确定、建立和验证参考区间》里的要求建立合适的筛查切值。

本研究收集本实验室1 886例成年女性HbA2筛查数据(包含991例α-珠蛋白生成障碍性贫血、250例β-珠蛋白生成障碍性贫血及645例健康者)，严格按照C28-A3指南要求，采用非参数方法对总数据进行分析，α-珠蛋白生成障碍性贫血组的HbA2筛查切值为2.7%，切值的90%CI为2.5%～2.8%；β-珠蛋白生成障碍性贫血组的HbA2筛查切值为3.7%，切值的90%CI为3.6%～4.1%；正常组的HbA2筛查范围为2.4%～3.1%，切值的90%CI分别为2.3%～2.5%、3.0%～3.2%。本实验室检测结果表明，α-珠蛋白生成障碍性贫血和β-珠蛋白生成障碍性贫血成年女性全自动毛细血管电泳法HbA2筛查切值分别为2.7%和3.7%。本实验室一直以来使用试剂说明书和仪器生产商推荐的HbA2参考区间(2.5%～3.5%)，本实验室检测结果表明α-珠蛋白生成障碍性贫血成年女性HbA2筛查切值为2.7%，则HbA2值处在2.5%～2.7%时可能存在α-珠蛋白生成障碍性贫血的漏筛。孙艳虹等[11]研究结果显示毛细管电泳联合MCV、MCH筛查珠蛋白生成障碍性贫血具有较高的灵敏度和特异性。本实验室正常组HbA2筛查上限为3.1%，HbA2值在3.1%～3.5%时，可以结合血常规结果综合考虑是否检测珠蛋白生成障碍性贫血基因。希望实验室能够重视此问题，建立符合本实验室的HbA2筛查切值，最大可能降低漏筛率，更好地完成国家珠蛋白生成障碍性贫血的防控工作。