蓝芩止咳颗粒质量标准研究

董桃杏，王 绮，胡 梦

(1.湖北第二师范学院 化学与生命科学学院，武汉 430205 ；2.健民药业集团股份有限公司，武汉 433700)

蓝芩止咳颗粒为健民药业集团股份有限公司自主开发的中药六类新药，处方主要是由板蓝根、薄荷、黄芩、川贝母、枳壳等药材组成。具有清热、宣肺、止咳、化痰、利咽的功效。主要可用于外感咳嗽，中医辨证为风热犯肺证，症见咳嗽不爽或咳声重浊、痰黄稠、不易咳出、发热、咽痒等症。本文通过实验对方中黄芩[1-3]进行了定量分析，对方中枳壳、板蓝根、薄荷进行了定性鉴别，为蓝芩止咳颗粒的质量研究提供了参考依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Dionex高效液相色谱仪 (UVD17OU 检测器、ChromeLeon7.0化学工作站)，Sartorius CP225D型分析天平(十万分之一)，LC-350A超声波中药处理机(山东济宁鲁超超声设备有限公司)，AB204-N电子天平(德国赛多利斯科技公司)。

1.2 试药

黄芩苷对照品(批号110715-201503，供含量测定用，购自中国食品药品检定研究院)，试验所用中药材来自武汉强康药业有限公司，均符合中国药典2015年版规定，蓝芩止咳颗粒(批号：160401,160502,160503)由健民药业集团股份有限公司提供。甲醇、乙腈为色谱级纯，水为蒸馏水，其余试剂均为分析级纯。

2 鉴别试验[4～6]

2.1 枳壳

取蓝芩止咳颗粒10.0g，研细，加入20ml水使其溶解，再分别用15ml乙醚振摇提取2次，弃去乙醚层液，水溶液用20ml乙酸乙酯分别振摇提取2次，合并两次乙酸乙酯溶液，蒸干，残渣用1m甲醇进行溶解，作为供试品溶液；对照品溶液主要是精密称取柚皮苷对照品，加入1ml甲醇，使其最终浓度为0.5mg/ml；阴性对照品溶液是取处方量中除枳壳以外的各味药材按成品的制备方法进行制备。分别吸取5μl的以上3种溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，展开剂为三氯甲烷-甲醇-水(13 ∶7 ∶3)的下层溶液，先展开，取出后晾干，再喷以含有5%三氯化铝的乙醇试液，再晾干，在紫外光灯)下检视，波长为365nm。结果发现，在供试品色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点，阴性对照无干扰(图1-A)。

2.2 板蓝根

取精密称取蓝芩止咳颗粒5.00g，研细，加水30ml，再用20ml三氯甲烷振摇提取，重复3次，合并三氯甲烷溶液，蒸干，向残渣加入1ml乙醇使溶解，作为供试品溶液；精密称取1.0g板蓝根对照药材，加入乙醇40ml，加热回流1个小时，过滤，收集滤液后蒸干，在残渣中加入1ml乙醇使其溶解，即为对照药材溶液；取处方量除板蓝根以外的各味药材按成品的制备方法进行阴性对照品溶液制备。各取10μl上述3种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上(黏合剂为羧甲基纤维素钠)，展开剂用三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯(5 ∶3 ∶2)，展开，取出后晾干，再喷以浓度为10%的硫酸乙醇溶液，在105℃条件下加热直到斑点清晰。结果发现，与对照药材色谱相对应的位置上，供试品色谱中也呈显相同颜色的斑点，且阴性对照无干扰(图1-B)。

2.3 薄荷

称取蓝芩止咳颗粒5.0g，加石油醚(60-90℃)30ml，密塞后超声处理30分钟，滤过，在水浴中将滤液蒸干，加入2ml石油醚(60-90℃)于残渣中，即得供试品溶液。精密称取薄荷脑对照品，加入石油醚(60-90℃)制成浓度为2mg/ml的溶液，即为对照品溶液；再取处方量除薄荷以外的各味药材按成品的制备方法制得阴性对照溶液。取供试品溶液、阴性对照溶液和对照品溶液各1 0μl，分别点于上述硅胶G薄层板上，以石油醚(60-90℃)—乙酸乙酯(5 ∶1)作为展开剂，展开，取出后晾干，再喷以5%香草醛硫酸溶液，置于105℃加热至显色后斑点清晰。结果发现与对照品色谱相应的位置上，供试品色谱中呈现相同颜色的斑点，阴性对照无干扰(图1-C)。

图1 (图A中1为柚皮苷对照品，2-4为供试品溶液，5为阴性对照溶液；图B中1为阴性对照溶液，2-4为供试品溶液，5为板蓝根对照药材溶液；图C中1为阴性对照溶液，2-4为供试品溶液，5为薄荷脑对照溶液。)

3 含量测定

3.1 色谱条件

色谱柱：WEL TECH Hisep C18-T(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-水-磷酸(47∶52.5∶0.5)，检测波长：280nm，柱温：30℃，流速：1.0ml/min，进样量：各10μl，理论板数按黄芩苷峰计算应高于2500。

3.2 制备对照品溶液的制备

精确称取五氧化二磷真空干燥24h的黄芩苷对照品4.13mg，放置于100ml量瓶，加入70%甲醇溶解至刻度，摇晃使其均匀，即得对照品溶液浓度为0.0413 mg/ml的溶液。

3.3 供试品溶液制备

取装量差异项下的内容物，研细，混匀，精密称取约0.5g，放置于100ml具塞锥形瓶中，再精确加入70% 40ml甲醇，称定重量，进行30分钟超声处理，取出后放至冷却，再称定重量，用70%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

3.4 阴性样品溶液制备

按处方比例配制阴性样品，其中不含黄芩制备方法参考前面的3.3所述。

3.5 考察线性范围

分别精密吸取浓度为0.1012mg/mL的黄芩苷对照品溶液0.25，0.5，1，2，4，6，8mL，分别放置于10mL的容量瓶中，再用70%甲醇分别稀释至刻度，摇晃均匀，接下来分别精密吸取以上对照品稀释溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，按前面所述色谱条件进行测定，以峰面积的积分值为纵坐标Y，进样量(μg)为横坐标X，以黄芩苷峰面积(y∶mAU*s)对进样量(x∶ng)进行线性回归，得回归方程为：y=0.0027x+0.0987，相关系数r=0.9999。结果表明，黄芩苷进样量在25.3～809.6ng的范围内表现出良好线性关系。

3.6 精密度试验

精密吸取3.5所述的同一浓度的对照品溶液10μL,6次重复进样，测定其峰面积，结果发现黄芩苷的峰面积RSD为1.07%。表明本实验具有良好的精密度。

3.7 稳定性试验

取与前面所述同一批供试品溶液(批号：160401)10μL，于0，2，4，8，12，24h分别注入液相色谱仪中，进样后测定其峰面积，统计结果表明黄芩苷峰面积在24h内基本不变，RSD为1.24%。说明本品供试品溶液具有良好稳定性。

图2 (A.对照品；B.供试品；C.阴性样品)

3.8 重复性试验

取6份上述同一批次样品(批号：160401)，按前面相同试验条件平行处理后进行测定，结果其平均含量为4.418mg/g，RSD为0.63%，本法重复性良好。

3.9 加样回收率试验

精密称取已知黄芩苷含量为4.418mg/g的供试品(批号：160401)约0.5g，精密加入黄芩苷对照品溶液(0.8036mg/ml)3ml,即2.4108mg，挥干溶剂，按前面所述方法进行含量测定。结果表明平均回收率为99.40%，RSD为1.00%，说明本品具有良好的加样回收率(见表1)。

表1 黄芩苷加样回收率试验测定结果(n=6)

3.10 样品测定

按含量测定方法测定3批样品中黄芩苷的含量，结果3批供试品中黄芩苷的含量平均值为4.409mg/g，暂定本品每克含黄芩苷不得少于3.09mg。

4 讨论

4.1 提取溶剂的选择

实验过程中，对同一批样品分别采用乙醇、70%甲醇、甲醇提取，结果显示采用70%甲醇提取时含量较高，而且峰型好，杂质相对较少。故采用70%甲醇作为样品的提取溶剂。

4.2 板蓝根的鉴别

试验中，展开剂曾选用正丁醇-冰醋酸-水(19 ∶5 ∶5)、石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(1 ∶1)、石油醚(60～90℃)-三氯甲烷-乙酸乙酯(1 ∶8 ∶1)、三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯(7 ∶3 ∶4)分离结果均不佳，选用本文试验的展开条件，得到比较理想的结果。