呼吸道患病犬菌群组成及病因分析

解秀梅 蒋含伟 张丽芳 牛玉丰

（青海畜牧兽医职业技术学院，青海湟源 812100）

宠物犬呼吸道疾病是临床常见病、多发病，在宠物犬疾病中占很大比例，常因发病原因复杂[1]，很难做出确切的临床诊断，给疾病治疗带来很大的困扰。若治疗不及时或者不合理，加重病情而危及生命。因此，了解西宁地区宠物犬呼吸道疾病的发生原因和患呼吸道疾病的菌群组成，可以为西宁地区宠物医院治疗呼吸道疾病提供有利可行的科学依据，也可以提高宠主的防护意识，减少宠物犬呼吸道疾病的发生。

1 材料

1.1 研究对象

选取青海省西宁地区佰汇缘宠物医院、好伙伴宠物医院等相关医院7家，在2018年2月至2018年6月内选取患有呼吸道疾病，并伴有明显呼吸道症状，如咳嗽、流鼻涕或出现黄脓鼻涕的犬只，共92例作为研究对象。其中1岁以下病例67例，占总患病样本的72.8%；1～8岁的病例25例，占总患病样本的27.2%。

1.2 快速诊断试剂板

犬瘟热（CDV）、犬副流感（CIV）、犬腺病毒感染（CAV）等相应的病毒病的抗原快速诊断试剂板均为韩国安捷动物诊断试剂有限公司生产。革兰阴性细菌鉴定卡和革兰阳性细菌鉴定卡购自于梅里埃生物科技有限公司。

1.3 培养基

増菌液选用LB液体培养基，制备方法：胰蛋白胨10g，氯化钠5g，酵母粉10g，1000ml溶液，溶解后，调节PH值并高压灭菌。进行细菌分离培养的培养基为LB固体培养基。配方：LB液体培养基1000ml，琼脂粉20g。进行生化实验时选用的是TSA培养基，购自杭州微生物试剂有限公司。

2 方法

2.1 样本采集

采用咽拭子采集法，事先在专用咽拭子采集管中放入2ml无菌LB液体培养基。样本采集时使用一次性无菌棉拭子进行咽部深层旋转采集，采集的拭子迅速插入采集管中旋转以利于细菌的洗脱，之后立即盖紧盖口。注意采集时棉拭子尽量避免接触口腔和舌黏膜。收集的咽拭子标本立即放入-20℃的冰箱储存。

2.2 病毒筛查

对未进行疫苗注射的犬只，按犬瘟热（CDV）、犬副流感（CIV）、犬腺病毒感染（CAV）快速诊断试剂板的操作步骤进行呼吸道常见病毒病的筛查诊断。

2.3 细菌分离培养

取出储存于冰箱的咽拭子培养基，放置于恒温培养箱内进行细菌复苏培养 4～8h，之后取增菌培养液接种于LB固体培养基，37℃培养18～48h。挑出分离培养结果为阳性的固体LB培养基，根据形成的菌落形态、大小等不同的特征，分别进行纯培养；并进行革兰氏染色镜鉴。

2.4 菌种的鉴定

最后将纯培养出的细菌接种于TSA培养基，后按MicroScan WalkAway-40（西门子公司）全自动细菌鉴定仪的操作要求和步骤，根据染色结果选择相对应的革兰阴性细菌或革兰阳性细菌鉴定卡，进行细菌种属鉴定。

3 结果与分析

3.1 病毒筛查结果

样本经病毒快速诊断试剂板检测，结果由病毒感染引起的呼吸道疾病有19例，具体情况如下表1。

表1 犬呼吸道病毒感染统计表

3.2 细菌的分离培养结果

92份病例样本进行分离培养后，有13份未生长出菌落，其余79份都有不同程度的菌落形成，占总体病例的85.9%。对每份中形成的不同菌落进行计数，共计104株菌。有23个病例样本分离到两种或两种以上菌株。

3.3 分离鉴定结果

将纯培养的104株菌经过染色镜检后，确定革兰阴性菌34株，革兰阳性菌70株，经全自动细菌鉴定仪的鉴定，最终确定细菌种属12种。其中葡萄球菌种类和数量较多，合计分离率为48.1%，其次是放射根瘤菌。主要呼吸道致病菌金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌臭鼻亚种，分离率合计为15.3%。其具体分离情况和菌种生化结果见表。

4 讨论与结论

从患呼吸道疾病的宠物犬来看，年龄幼小的犬较易发呼吸道疾病，其中1岁以内的幼犬发病概率和数量均较高，年龄较大的犬发生率较低，这可能与幼犬自身免疫力低下及气管粘膜脆性有关[2]。其次，在西宁地区，幼犬的呼吸道疾病中病毒引起的感染不可忽视，其感染率达28.4%，其中犬瘟热病毒感染比例最大，占幼犬病例的19.4%。而成年犬病毒感染发生极少。这可能与幼犬未能及时注射疫苗，且易受环境因素的影响而使呼吸道抵抗力下降有关[3]，而成年犬疫苗注射完全且抵抗力较强[5]。因此及时的疫苗免疫是防制幼犬呼吸道病毒感染的关键措施。

表2 分离鉴定菌株名称及所占比例表

在呼吸道感染的总体病例中可以看到，病毒和主要致病菌感染占36.1%，其他原因如支原体、真菌、过敏等原因引起的更是少见[1、6、8]，而且犬呼吸道疾病易发生于气候变化较大的早春晚秋[7]，这就意味着，犬呼吸道疾病大部分是由于环境发生改变，引起呼吸道菌群失调或条件性致病菌的大量繁殖而发病。因次，环境因素的刺激或改变是导致犬呼吸道疾病发生的主要原因。建议宠主在环境发生改变时采取相应的清洁、保暖等防护措施减少宠物犬呼吸道疾病的发生。

从患病犬呼吸道菌群分离的相对情况而言，除未分离出菌种的13份（占总病例的14.1%）病例样本外，其余病例83.9%的病例都可分离出细菌，主要分离菌为葡萄球菌。肖焰[8]等调查研究发现犬瘟热发病期细菌引起的呼吸道感染率达90%，这也说明犬呼吸道疾病中前期或后期都有细菌感染的参与。因此临床用药治疗呼吸道疾病或继发感染可偏抗革兰氏阳性菌，尤其是葡萄球菌的抗生素。

在92例呼吸道感染病例中，有19例混合感染病毒性疾病，有23例病例分离出两种及两种以上的菌株，可见呼吸道疾病中通常是以混合感染的形式出现[9]，混合感染率达45.6%。因此临床用药不能忽视混合感染，若只使用单一抗生素可能达不到较好的治疗效果[10]。呼吸道感染的细菌种类繁多，在呼吸道感染病例治疗时，最好进行药敏实验，根据实验结果选用合理的药物，避免盲目用药和滥用抗生素而导致耐药性的急剧升高[11]。同时，还要结合其他综合性的治疗方法，如加强营养、加强护理等也是关键[12]。