HPLC同时测定感冒止咳颗粒中10种成分的研究

张厚杰

摘  要：目的 通过HPLC法对感冒止咳颗粒中的新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、葛根素、连翘酯苷A、异绿原酸A、异绿原酸C、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素等10种成分的含量进行探究。方法 对该感冒止咳颗粒的70%的甲醇提取液采用Agilent ZORBAXSB-C18色谱柱的方法进行分析研究。结果 该药物的10种成分的线性关系在一定范围之内保持良好状态（r≥0.9994），平均加样回收率可以达到98.08%-101.98%之间，RSD则达到0.45%-2.28%之间。结论 HPLC法对药物成分的研究更加简便，结果相对准确，可以用于感冒止咳颗粒的质量控制中，具有较好的效果。

关键词：感冒止咳颗粒;化学成分;HPLC

本次试验所用的感冒止咳颗粒主要是由柴胡、山银花、葛根、黄芩、青蒿、连翘、桔梗、苦杏仁、薄荷脑等9种药物成分组成，常用于外热引起的感冒，常见症状有发热、头痛、鼻塞以及咽喉疼痛等。其中柴胡和山银花的主要功效是疏热散热，为君药;葛根具有缓解肌肉疲劳，退热的功效，黄芩、青蒿、连翘都具有清热功效，都是臣药;桔梗、苦杏仁止咳化痰清肺，薄荷脑属于芳香辛散药物，同为佐药，这几种药物合在一起服用，可以起到清热解毒，止咳平缓的有效作用。该类型的感冒止咳颗粒通常是由多种中药复方制剂共同组成，仅仅对单一的一种成分进行检测很难把握药物用量的控制和疗效的稳定，因此必须要度多种成分同时测定。感冒止咳颗粒中的9种成分包含了新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、葛根素、连翘酯苷A、异绿原酸A、异绿原酸C、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素等共10种物质，本次研究试验使用HPLC法同时对这10种成分的含量进行测定，为感冒颗粒的质量把控提供准确的实验依据。

1 材料

1.1 仪器

Agilent1260高效液相色谱仪，配置G1311B四元泵、G1329B自动进样器、G1316A柱温箱、G1315DDAD检测器;XSE-205电子天平;KQ-300DE超声波清洗器;Milli-Q超纯水处理系统。

1.2 试剂与药物

绿原酸、葛根素、连翘酯苷A、异绿原酸C、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A;小儿解表颗粒;乙腈为色谱纯;磷酸、甲醇为分析纯;超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Agilent ZORBAXSB-C18色谱柱;流动相乙腈;体积流量1.0mL/min;柱温30℃;检测波长326nm、250nm、326nm、278nm;进样量10μL。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液。精密称取对照品新绿原酸5.57mg、绿原酸7.43mg、隐绿原酸7.03mg、葛根素8.02mg、连翘酯苷A10.17mg、异绿原酸A6.37mg、异绿原酸C7.36mg、汉黄芩苷9.14mg、黄芩素5.67mg，置于25mL量瓶中，70%甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为贮备液;精密称取黄芩苷对照品3.81mg，置于25mL量瓶中，精密吸取上述贮备液。

2.2.2 供试品溶液。取颗粒适量，研细，取粉末约1.0g，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入50mL70%甲醇，称定质量，超声处理30min，放冷，70%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，滤液过0.45μm微孔滤膜，即得。

2.2.3 阴性样品溶液。按处方工艺，分别制备缺山银花和青蒿、缺葛根、缺连翘、缺黄芩的阴性样品，按“2.2.2”项下方法制备，即得。

2.3 专属性试验

精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各10μL，在“2.1”项色谱条件下进样测定，结果见图1。由此可知，该方法专属性良好。

2.4 线性关系考察

精密吸取对照品溶液1、2、4、6、8、10mL，置于10mL量瓶中，70%甲醇定容，各精密吸取10μL，在“2.1”项色谱条件下进样测定，结果见表1。

2.5 稳定性试验

取同一份供试品溶液，色谱条件下各进样10μL测定，检测结果表明溶液在36h内稳定性良好。

2.6 加样回收率试验

取各成分含有量已知的同一批颗粒，研细，取粉末约0.5g，精密称定，共6份，精密加入对照品溶液，计算回收率，结果表明样品的加样回收率较高。

3 讨论

3.1 指标成分选择

本次实验对该感冒止咳颗粒中的柴胡中的柴胡皂苷a进行了测定，经过检测之后发现这种成分的含量较低，甚至有些药物药品中并没有检测出这种成分，因此没有考虑这种药品成分。在前期的实验中也发现，连翘中的连翘苷的含量也比较低，而且均匀性相对较差，于是选择了另一种成分指标连翘酯苷A。最终确定了新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、葛根素、连翘酯苷A、异绿原酸A、异绿原酸C、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素等10种成分作为本次实验的药品指标，基本上包含了该药物颗粒中的所有成分，可以全面反映药物的质量，具有一定的科学性。

3.2 检测波长选择

本次实验使用的是DAD检测器，可以在200-400nm的范围之内对药物成分进行全方位的扫描，然后采集到准确的光谱。通过扫描检测之后发现，新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C、连翘酯苷A等成分在326nm的波长位置吸收最好，葛根素则是在250nm波长处吸收最大，黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素是在278nm波长位置吸收最大，因此选择了每一种药物的最大吸收波长作为本次实验的波长检测。

3.3 色谱条件优化

本次实验对比分析了三种色谱柱，分别是Agilent ZORBAXSB-C18色谱柱、Waters Symmetry-C18色谱柱以及Thermo Hypersil Gold-C18色谱柱，最终发现Agilent ZORBAXSB-C18色谱柱对该药物成分的分离效果要比其它两种色谱柱的分离效果好很多，色谱峰的对称性也比较好。然后又对流动相乙腈-水、乙腈-0.1%乙酸、乙腈-0.1%磷酸、甲醇-0.2%磷酸進行了实验考察，发现乙腈-0.1%乙酸洗脱效果最好，色谱峰的对称性也比较好，将其定位本次实验的流动相。

参考文献

[1]何艳，胡小祥，王庆.HPLC法同时测定感冒止咳颗粒中10种成分[J].中成药，2020，042（004）：849-852.

[2]王子凌云，梁琨，李国文.HPLC法测定芩杏清热止咳颗粒中8种成分[J].中成药，2019，041（005）：995-999.

[3]何悦，王四旺，肖会敏.HPLC法同时测定复方金银花颗粒中10种成分的含量[J].药学实践杂志，2019，037（002）：177-182.