rhGH对肝硬化大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护及修复作用

黄恒

【摘 要】目的：探讨重组人生长激素（rhGH）对肝脏缺血再灌注损伤的保护和修复作用。方法：SD大鼠分为空白对照组50只，实验组50只和对照组50只。实验组皮下注射rhGH，对照组给予等量生理盐水。Pringie‘s法建立100种肝脏缺血再灌注损伤模型，检测不同时间点各组AST、ALT、TNF-α水平。结果：两组在每个时间点的ALT和AST均逐渐升高（P<0.05），但在rhGH组，同期的ALT和AST指标较对照组明显降低（P<0.05）。rhGH组在6h和3/4h之间的TNF-a水平具有显著差异。对照组6h，3/4h和1h之间的TNF-a水平比较具有差异性。结论：rhGH对肝缺血再灌注损伤具有保护和修复作用，可促进肝缺血再灌注损伤，促进线粒体功能恢复，改善肝细胞能量代谢。rhGH可通过降低细胞因子TNF-α的水平来保护肝脏缺血/再灌注损伤。

【关键词】重组人生长激素;大鼠;缺血再灌注损伤

【中图分类号】R575【文献标识码】A【文章编号】1672-3783（2020）10-30--02

1 材料与方法

1.1 实验动物

雄性健康SD大鼠，重200-250g，术前禁食12h但不禁水。

1.2 实验试剂

重组人生长激素（rhGH）、肿瘤坏死因子（TNF）、人白细胞介素-1（IL-1）、酒精等。

1.3 方法

1.3.1 建立SD大鼠模型

实验动物在手术前禁食12小时，自由饮水，麻醉后腹膜内注射戊巴比妥钠（30mg/Kg），上腹部中切开，并切开腹壁各层暴露第一肝门部，暴露肝十二指肠韧带。用Pringl‘s法用精细无损伤血管夹肝蒂，阻断门静脉、肝动脉和胆总管，使肝脏缺血，30分钟后取下血管钳以恢复肝脏血液供应，然后关闭腹部。

1.3.2 实验设计

1.3.2.1 动物分组

建立150只SD大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型，实验组50只，对照组50只。另50只作空白对照。

1.3.2.2 注药

模型建成当天实验组按0.2uI/100g给予rhGH皮下注射，共7天，对照组分别给予等量的生理盐水作安慰试剂。

1.3.2.3 取材

分别于术后第1天、第7天、第14天、第28天四个时点，取腹腔静脉血检验，同时每只SD大鼠肝组织分3份，1份用10%福尔马林固定;1份用2.5%戊二醛固定;1份用锡箔纸包裹置于液氮中保存。每一时点如有死亡动物，均给予补齐。

1.3.2.4 石蜡标本处理

常规石蜡包埋，连续切片，如4微米厚切片、HE染色、常规封片，在显微镜下经病理医师观察。

1.3.3 血清检测

各组大鼠分别于肝脏再灌注后第l天、第7天、第14天、第28天经下腔静脉抽血5ml，血样离心，取上清液置于-70℃冰箱保存待后备测。

1.3.3.1 肝功酶学

用全自动生化分析仪测ALT、AST。

1.3.3.2 TNF-a

该测试使用双抗体夹心ABC-EUSA方法。酶标板上涂有抗人TNF-a单克隆抗体，将标准品和样品TNF-a与单克隆抗体结合，加入生物素华抗人TNF-a形成与板连接的免疫复合物，辣根过氧化物酶标记将链霉亲和素与生物素结合，添加酶底物OPD，出现黄色，添加终止溶液硫酸，颜色变深，在492nm处测得OD值，TNF-α浓度与OD值成正比，并且可以画一条标准曲线来找出标本中TNF-a的浓度。

1.4 统计学处理

所有数据均值±标准偏差（x±s）。使用t检验进行组间平均值的成对比较，使用q检验进行组内平均值的成对比较。所有数据均使用SPSS13.0软件在计算机上完成。取P<0.05，表示差异具有显著性。

2 结果

2.1 肝功酶学

用自动生化分析仪测量ALT和AST。随着SD大鼠再灌注时间的延长（ld，7d，14d，28d），rhGH组和对照组的ALT和AST逐渐降低。与该组各时间点比较，差异有显着性（P<0.05），说明SD大鼠肝再灌注早期发生肝细胞损伤，随再灌注时间减少。ld和28d在不同时间段，rhGH组和对照组在同一时期之间无显着差异（P>0.05），而在7d和14d之间有显着差异（P<0.05）。见表1表2.

2.2 肿瘤坏死因子TNF-a水平

正常SD大鼠血清TNF-a水平为11.39±3.54IU/L。从实验中可看出，无论是rhGH组还是对照组，SD大鼠血清TNF-a在此时均明显升高。肝脏再灌注1d，并随着再灌注时间持续减少。两组在不同时间点的比较：手术后ld，14d，28d，差异无统计学意义（P>0.05）;术后7d差异最大（P<0.01）。不管rhGH组还是对照组术后14d和28d，差异均无统计学意义（P>0.05）。其余时间点有显着差异（P<0.05）。术后14d、28d大鼠血清TNF水平已接近正常无进一步下降，见表3.

3 讨论

研究表明，hGH对肝脏具有保护作用，rhGH主要具有间接促进生长和直接促进代谢的两种生理功能。rhGH促进肝细胞增殖的确切机制尚不完全清楚，可以通过以下机制完成：（1）rhGH促進HGF信使核糖核酸（mRNA）合成及表达，而HGF是己知最强烈的促肝细胞分裂原;（2）促进胰岛素样生长因子I（IGF-I）合成。rhGH与肝细胞膜上受体结合后促进肝脏合成IGF-I，rhGH大部分生理作用均由IGF-I介导，称rhGH-IGF轴，IGF能促进肝HGFmRNA及肝细胞DNA合成;（3）rhGH能促进胰岛素样生长因一子结合蛋白一3（IGFBP-3）合成，后者与结合后能延长在血浆中的半衰期，进一步提高促增殖活性。

参考文献

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