南昌地区消化道溃疡患者奥美拉唑药物相关CYP2C19基因多态性分布

周洁 ，吕小林 ，聂益军 ，赵锐 ，万腊根 ，呙阳

（1.江西省妇幼保健院检验科，江西 南昌 330006；2 南昌大学第一附属医院检验科，江西 南昌 330006）

消化道溃疡（peptic ulcer）是临床上最为常见的消化系统疾病之一，好发于胃和十二指肠，但若是不及时治疗可能会引起较为严重的并发症，其发病率和复发率均比较高[1]，既往临床研究[2]表明其主要的致病因子是胃酸分泌过多和幽门螺杆菌的感染等两个方面。 而相关指南指出奥美拉唑是针对消化道溃疡应用最广泛也最为安全的第一代质子泵抑制剂（proton pump inhibitors，PPIs），它可显著地抑制胃酸分泌和加速幽门螺杆菌的清除[3]，但在临床实践中我们往往发现，并非所有患者都能从奥美拉唑中受益，不同患者对奥美拉唑的反应性差异也较大，而越来越多研究[4]显示基因多态性可能是导致此现象的一个重要因素。

随着遗传药理学的不断发展，人们发现细胞色素 P4502C19（cytochrome P450，family2，subfamily C，polypetide19，CYP2C19）作为细胞色素 P450 药物代谢酶家族中的主要药物代谢酶，其参与代谢并明显影响的临床应用药物多达几十种，其中主要包括抗癫痫药、抗抑郁药、抗真菌及PPI 等[5]。 国内外研究指出奥美拉唑高度依赖肝脏细胞色素 P450 酶系进行代谢，而 CYP2C19 基因又具有明显的种族和地域的多态性分布[6]。 因此，本研究旨在分析南昌地区消化道溃疡患者CYP2C19 基因型分布情况，以指导临床更合理地应用奥美拉唑， 为实现个性化用药奠定遗传学基础。

1 资料与方法

1.1 一般资料 采集 2018 年 1 月-2018 年 10 月因消化道溃疡就诊于南昌大学第一附属医院的患者218 例，男 147 例，中位年龄 48 岁，女 71 例，中位年龄51 岁。清晨抽取就诊患者空腹静脉血2-3ml，EDTA 抗凝，当天提取DNA。 本实验已经过医院伦理委员会批准，患者均签署知情同意书。

1.2 仪器与试剂 DNA 全自动基因提取仪采购于苏州天隆生物科技有限公司， 荧光定量PCR 仪为ABI7500，采购于美国 ABI，CYP2C19 基因检测试剂盒购自苏州旷远生物分子技术有限公司。

1.3 方法

1.3.1 DNA 提取 利用苏州天隆生物科技有限公司全自动基因提取仪进行提取所用标本DNA，具体步骤见其说明书，并且于基因检测前通过定量分析仪检测DNA 浓度和纯度，判断合格后，用于后续Real-time PCR。 若在24h 内检测，将已提取的DNA 于2～8℃保存，否则置于-20℃以下保存备用。

1.3.2 荧光PCR 法检测CYP2C19 基因型 严格按照CYP2C19 基因检测试剂盒说明书进行操作。 反应条件: 去污染37℃2min; 预变性95℃3min;95℃30s，56℃30s，65℃45s，10 个循环;95℃30s，56℃30s，设置Fam 及Rox 双通道采集荧光信号，65℃45s，30 个循环;冷却 25℃1min。 程序结束，观察扩增曲线，分析Ct 值数据，进行基因型结果判读。

1.3.3 CYP2C19 基因型检测 本实验中检测的基因型有 CYP2C19*1/*1、CYP2C19*1/*2、CYP2C19*1/*3、CYP2C19*2/*2、CYP2C19*2/*3、CYP2C19*3/*3 等 6 种基因型。 结果判读：CYP2C19*1/*1 为快代谢型；CYP2C19*1/*2 和 CYP2C19*1/*3 为中代谢型；CYP2C19*2/*2、CYP2C19*2/*3 和 CYP2C19*3/*3 为慢代谢型。

1.4 统计学方法 采用SPSS19.0 统计学软件处理数据，计数资料采用百分数表示，组间比较用χ2检验。 P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CYP2C19 基因型的分布 将荧光PCR 结果进行CYP2C19 基因型分析， 结果显示218 例患者中CYP2C19 基因型由多到少分布为 *1/*1、*1/*2、*2/*2、*1/*3、*2/*3、*3/*3， 所占比例分别为 45.0%、39.9%、6.9%、4.6%、3.2%、0.5%。其在不同性别所占比例，差异无统计学意义（χ2=2.250，P=0.814），见表1。

2.2 CYP2C19 等位基因的频率分布 本研究218例患者中，CYP2C19*1、*2、*3 的基因频率分别为67.2%、28.4%、4.4%，其在不同性别中的比例，差异无统计学意义（χ2=1.256，P=0.534），见表2。

表2 CYP2C19 等位基因的频率分布[n（%）]

2.3 奥美拉唑不同代谢型在不同性别中的分布本研究218 例患者中，根据荧光PCR 结果进行CY P2C19 基因型判读，其奥美拉唑代谢型主要以快代谢型（45.0%）为主，中代谢型和慢代谢型分别为44.5%和10.6%，其在不同性别中的比例，差异无统计学意义（χ2=0.368，P=0.832），见表3。

表3 奥美拉唑代谢型在不同性别中的分布[n（%）]

2.4 不同年龄段奥美拉唑代谢型于不同性别中的分布 临床资料显示消化道溃疡以十二指肠溃疡多见，其发病特点是以青壮年为主，且男多于女，同时，老年患者所占比例亦逐年有所增加。 为明确代谢型与病人性别年龄的关系，将218 例患者分为6个年龄段，各年龄段各代谢型分别在男性和女性中所占比例比较，差异无统计学意义(P＞0.05)，见表4。

表4 不同年龄段奥美拉唑代谢型在不同性别中的分布[n（%）]

3 讨论

随着医疗水平的不断提高，我国消化道溃疡老年化患者基数也不断增加，奥美拉唑作为最早应用于消化道溃疡的PPIs， 在抑酸杀菌等方面效果显著，但是早有临床研究[7]发现奥美拉唑在治疗消化道溃疡的疗效上存在着显著的个体差异，以往认为这可能与药物间相互作用或患者依从性差等有关系，随着遗传药理学的不断深入研究，人们发现[8]奥美拉唑主要在肝脏CYP2C19 基因的G-A 出现突变时，将促使下游提前生成终止密码子，合成不完整的蛋白质最终导致其失去了原有的催化活性，酶活性的丧失是导致CYP2C19 呈现基因多态性的主要原因， 而研究表明 CYP2C19 主要有 CYP2 C19*1、CYP2C19*2 和 CYP2C19*3 等三种中国人最常见的等位基因组成，CYP2C19 作为一种由遗传因素决定的酶，其基因多态性将直接影响酶的活性从而导致明显地个体差异。 因此在实际临床应用中， 可通过患者CYP2C19 基因代谢型适当调整奥美拉唑剂量，以真正做到个体化医疗。

随着奥巴马精准医疗计划的提出，人们越来越重视遗传基因的检测，相关报道[9]指出CYP2C19 存在着广泛的地域、种族差异，探讨不同地区不同种族的CYP2C19 基因多态性的分布特征将有助于指导临床用药。 本研究的主要人群为南昌大学第一附属医院的消化道溃疡患者，共计218 例患者，男147 例，19～94 岁，中位年龄 48 岁，女 71 例，20～85岁， 中位年龄 51 岁， 本研究采用 “等位基因特异PCR”技术结合荧光探针的方法对218 例江西地区心脑血管患者进行CYP2C19 基因多态性检测，结果 显 示 CYP2C19*1、*2、*3 的 基 因 频 率 分 别 为67.2%、28.4%、4.4%，其 CYP2C19*1 型的携带率最高；而 CYP2C19*1/*1、CYP2C19*1/*2、CYP2C19*1/*3、CYP2C19*2/*2、CYP2C19*2/*3、CYP2C19*3/*3基因型的频率分别为45.0%、39.9%、4.6%、6.9%、3.2%、0.5%，CYP2C19*1/*1 型占南昌地区的主导；其快代谢型、中间代谢型、慢代谢型的频率分别为45.0%、44.5%、10.6%；以快代谢型为主，与张爱玲等[10]报道并不一致，可能存在地域差异，同时我们观察到有10.6%的患者为慢代谢型，据Baldwin RM报道[11]表明中代谢型尤其是慢代谢型对常规剂量的质子泵抑制剂具有更加优异的抑酸效果，因此我们认为这10.6%的患者可能PPIs 治疗效果更好；不同性别之间CYP2C19 基因型及代谢型差异均无统计学意义（P＞0.05），各年龄段各代谢型差异也无统计学意义（P＞0.05）这与华仙丽[12]，李洁[13]等相关文献报道一致， 尽管不同性别甚至不同年龄与代谢型并无统计学意义，但是不能忽略不同性别可能出现各自不同的不良反应，临床医生需谨慎区别对待， 同时年龄虽不影响CYP2C19 的基因多态性遗传，但是考虑到老年化患者身体机能的退化以及胃肠道负担的加重，临床给药前应充分考虑剂量的合理性。

消化道溃疡作为消化系统常见疾病之一，为了更好的治疗和防范，奥美拉唑用药前的CYP2C19基因分型检测势在必行，据第五次全国幽门螺杆菌感染处理共识报告[14]指出优先选取受CYP2C19 影响较小的PPI，可提高幽门螺杆菌的根除概率;同时，抗血小板药物消化道损伤的预防和治疗中国专家共识[15]指出一些PPI 对氯吡格雷代谢酶CYP2C19具竞争性抑制作用，尤其是伴有心脑血管疾病的老年人，应避免与奥美拉唑联用。 而本研究结果显示CYP2C19*1/*1 型占南昌地区的主导基因型， 其代谢型以快代谢为主，为提高治疗效果，应适当增加剂量，或换其他受CYP2C19 影响较小的PPI，临床医生在实际应用中应考虑多方因素，从而为患者制定个体化医疗方案，提高疗效的同时并能够更大程度的降低不良事件的发生。